莪术醇通过JAK3/STAT信号途径抑制Jurkat细胞增殖

目的 观察莪术醇对抑制Jurkat细胞增殖的影响,并从JAK3/STAT信号途径探讨其作用机制.方法 不同浓度(6.25、12.5、25、50 μg/mL)莪术醇干预处理人Jurkat细胞株,分别用新型四唑单钠盐法、流式细胞技术观察检测细胞增殖活力及细胞周期分布.Hoechst 33258染色,观察莪术醇诱导的细胞凋亡形态学变化.设正常对照组、IL-2刺激组、JAK3抑制剂组及莪术醇干预组,Western blot检测细胞中JAK3、STAT3及STAT5a磷酸化蛋白表达量的变化.结果 不同浓度的莪术醇体外处理24 h后,Jurkat细胞的增殖受到明显抑制,呈浓度依赖性下降(P＜0.05).细胞周期分布结果显示,随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡的比例明显升高,S期细胞比例呈浓度依赖性增多,G2/M细胞比例则呈减少趋势.50 μg/mL的莪术醇处理24h后,细胞表现出核固缩、碎裂等典型的凋亡形态学变化.Western blot检测结果显示,50 μg/mL的莪术醇可抑制JAK3与STAT5a磷酸化蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01),但对STAT3无明显影响(P＞0.05).结论 莪术醇作用于Jurkat细胞S～G2/M期,阻滞S期细胞向G2/M期移行,并下调JAK3/STAT5信号分子以抑制该细胞增殖.     

莪术醇对人胃癌细胞凋亡、MMP2、NO影响的初步探讨

目的初步探讨莪术醇（Curcumol）对人胃腺癌细胞（SGC-7901细胞）凋亡、基质金属蛋白酶（MMP2）、一氧化氮（NO）的影响。方法将莪术醇溶于无水乙醇中,初始浓度为9 mg/mL,设实验1、2、3、4、5组,莪术醇的浓度分别是7.5、15、30、60、120μg/mL,并以含1%无水乙醇的培养液为对照组。采用台盼蓝（Trypan blue）、噻唑蓝（MTT）法检测SGC-7901细胞的活性及莪术醇对SGC-7901细胞抑制增殖的影响;用流式细胞仪（FACSCalibur）检测莪术醇对SGC-7901细胞的凋亡率;用蛋白质印迹法检测莪术醇作用于SGC-7901细胞后,其MMP2的表达情况;NO试剂盒检测莪术醇作用SGC-7901细胞后的细胞培养液上清的NO含量。结果 30μg/mL的莪术醇在药物浓度与抑制肿瘤生长方面效果较佳,与对照组比较,其抑制肿瘤细胞增殖差异有统计学意义（P〈0.05）;莪术醇实验组能促进细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;莪术醇实验组作用细胞后,其MMP2蛋白表达明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;实验研究表明,随着莪术醇实验组浓度的增加,其细胞培养液上清中的NO含量逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 30μg/mL的莪术醇浓度是最佳药效组,它能显著抑制SGC-7901细胞的增殖,明显促进肿瘤的细胞凋亡,显著抑制MMP2的表达,降低细胞培养液上清中的NO含量,从而发挥系列抗肿瘤作用。本研究从细胞分子水平探讨莪术醇治疗胃癌可能存在的部分机制,为临床应用莪术醇及其衍生物或结构类似物治疗胃癌提供理论与试验依据。     

莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:观察莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及潜在的作用机制。方法:细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测莪术醇对A549细胞活性的影响;EdU检测细胞增殖;体外侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测上皮间质转化和Wnt通路相关蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测vimentin光点的水平。结果:莪术醇浓度低于60μmol·L~(-1)时对A549细胞的活性无显著影响;不同浓度莪术醇作用于A549细胞后,细胞增殖倍数显著降低;侵袭细胞数目显著减少;划痕闭合率显著降低;细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平显著升高,而Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、snail、β-连环蛋白(β-catenin)、T细胞因子4(T-cell factor 4,TCF4)和细胞周期蛋白1(Cyclin-D1)的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞中vimentin光点水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术醇可抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化,其作用机制与Wnt/β-catenin通路相关。     

莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:观察莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及潜在的作用机制。方法:细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测莪术醇对A549细胞活性的影响;EdU检测细胞增殖;体外侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测上皮间质转化和Wnt通路相关蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测vimentin光点的水平。结果:莪术醇浓度低于60μmol·L~(-1)时对A549细胞的活性无显著影响;不同浓度莪术醇作用于A549细胞后,细胞增殖倍数显著降低;侵袭细胞数目显著减少;划痕闭合率显著降低;细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平显著升高,而Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、snail、β-连环蛋白(β-catenin)、T细胞因子4(T-cell factor 4,TCF4)和细胞周期蛋白1(Cyclin-D1)的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);细胞中vimentin光点水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:莪术醇可抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化,其作用机制与Wnt/β-catenin通路相关。     

莪术醇下调FoxD2-AS1逆转胶质瘤细胞替莫唑胺化疗耐药的作用研究

[目的]初步明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)Fox D2-AS1与胶质瘤替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)耐药的关系,并探索莪术醇逆转胶质瘤替莫唑胺耐药与Fox D2-AS1基因表达的相关性。[方法]以生物信息学分析胶质瘤lncRNA表达谱;以胶质瘤A172、U251细胞系为研究对象,采用药物浓度递增法建立耐药细胞系A172/TMZ、U251/TMZ;以流式细胞术检测干扰Fox D2-AS1对耐药细胞凋亡的影响;莪术醇以不同浓度和时间梯度处理耐药细胞后,以Hoechst染色观察细胞形态变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测不同浓度莪术醇处理后耐药细胞中Fox D2-AS1的表达水平。[结果]lncRNA Fox D2-AS1在胶质瘤患者瘤体组织中高表达,其高表达与患者总生存率呈负相关;敲除Fox D2-AS1可显著增加耐药细胞对TMZ的敏感性并促进细胞凋亡,诱导细胞周期发生S和G2/M期阻滞;莪术醇和TMZ联用显著增加耐药细胞凋亡的典型变化。RT-qPCR结果显示,莪术醇处理后耐药细胞内Fox D2-AS1的含量明显下降,且具有浓度和时间依赖性。[结论]敲除Fox D2-AS1基因可以逆转胶质瘤细胞TMZ耐药。莪术醇可抑制胶质瘤耐药细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,其作用机制与下调Fox D2-AS1基因表达有关。     

低频刺激抑制GABA介导背根神经节神经元膜去极化反应

目的:探讨低频率电刺激对GABA介导的背根神经节神经元膜电位去极化反应的影响.方法:新鲜分离的大鼠DRG坐骨神经干标本,通过细胞内微电极记录技术,应用波宽5 ms,强度2 V,频率分别为2 Hz和10 Hz的脉冲波作用于大鼠坐骨神经远端,观察刺激前后GABA(3×10-4mol/L)介导的DRG神经元膜电位去极化反应幅值的变化.结果:低频电刺激(2 Hz、10 Hz)对GABA介导的DRG神经元膜电位去极化反应均有抑制作用,10 Hz时抑制作用达到最大,反应幅值从17.00±3.39mV降至12.00±2.45mV(P<0.05).刺激频率增加,电刺激对GABA介导DRG神经元膜去极化反应抑制作用持续时间也逐渐延长,10 Hz时作用持续时间达到最长(>72 min).结论:电刺激可抑制DRG神经元膜GABA去极化反应,从而易化伤害性信息的传入,导致疼痛.     

莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的研究莪术醇对人胃癌SGC-7901细胞生物学特性的影响。方法用MTT法测定莪术醇对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测莪术醇对SGC7—901细胞周期和细胞凋亡的影响。结果10、30、100μg／mL莪术醇均能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖;莪术醇能使S和G2／M期肿瘤细胞比例减少,G0／G1期肿瘤细胞比例增加,其中100μg／mL浓度的莪术醇作用最强（F=88．14,P〈0．01）;莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,其中100μg/mL浓度的莪术醇凋亡作用最强（F=34．14,P〈0．01）。结论莪术醇诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖,     

莪术醇抗肿瘤研究进展

莪术醇是近年来发现的新的抗肿瘤中药单体之一,特别是莪术醇药物的有效性和低毒性,使其在肿瘤治疗中的研究越来越受到人们的重视。莪术醇的抗肿瘤机制尚未完全明确,可能与诱导细胞凋亡、细胞分化,影响细胞膜电位、肿瘤细胞核代谢以及抑制血管生成等作用有关。     

莪术醇对SGC-7901细胞Akt、P-Akt及BAD表达水平影响的初步研究

目的初步研究莪术醇对SGC-7901部分蛋白信号的影响,探讨Akt、P-Akt和BAD表达水平的变化。方法设不同浓度的莪术醇组和对照组,用MTT法、AnnexinV-PI双染、Western blotting法等检测方法,观察莪术醇对SGC-7901细胞增殖活性、细胞凋亡以及Akt、P-Akt、BAD蛋白的表达水平的影响。结果适当浓度的莪术醇能抑制SGC-7901细胞增殖、诱导SGC7901细胞发生凋亡、抑制磷酸化Akt以及增强BAD蛋白表达,其呈明显浓度依赖性。实验结果表明,莪术醇对总Akt蛋白表达没有明显影响。结论莪术醇能够明显抑制SGC-7901细胞的增殖并诱导其凋亡,其抗肿瘤效应与下调PI3K/Akt信号转导通路蛋白表达以及上调其下游的BAD有相关性。     

莪术残油中莪术醇 莪术二酮在大鼠体内的GC测定

目的:研究莪术残油(提取榄香烯后的残余莪术油)中两种指标性成分在大鼠体内的各组织分布。方法:采取大鼠灌胃给药,运用毛细管气相色谱法采用程序升温条件,以α-香附酮为内标物同时测定莪术残油中指标性成分莪术醇、莪术二酮在大鼠各个组织中的药物浓度。结果:莪术醇在0.002628～0.2102mg·mL-1范围内呈现良好的线性关系,莪术二酮在0.0004552～0.03642mg·mL-1范围内呈现良好的线性关系,精密度、稳定性及融冻次数考察均符合要求,测定方法的平均绝对回收率莪术醇为83.6%～88.7%,莪术二酮为80.6%～85.0%;内标物α-香附酮的平均绝对回收率为82.6%～85.8%;平均方法回收率莪术醇为71.9%～76.1%,莪术二酮为69.7%～72.8%,均符合有关要求。通过各组织中指标性成分含量分析,各组织中均含有两种指标性成分。结论:莪术残油口服给药对于大鼠的组织作用靶点可能是脑、脾和肾。     

粘附式细胞仪测定主动脉平滑肌细胞膜电位的方法

采用亲脂性阴离子荧光染料ＤｉＢＡＣ＿４（３）标记免主动脉平滑肌细胞，以ＡＣＡＳ５７０粘附式细胞仪观察主极化剂氯化钾（ｋＣｌ）对平滑肌细胞膜电位的影响。结果，加入ＫＣｌ后荧光强度迅速升高，１２４ｓ后达最高值，之后荧光强度维持一较高水平。此法可监测活细胞快速的膜电位变化，不损伤细胞，简单，快捷。     

牛蛙球囊毛细胞电压依赖性钾通道电流的研究

目的 :研究牛蛙球囊毛细胞膜上钾通道的类型。方法 :全细胞膜片钳技术。结果 :1当钳制电位为 - 1 0 0 m V,以 1 0 m V的步距阶跃 ,阶跃从 - 70 m V至 + 2 0 m V,随着膜电位的去极化 ,可记录到一系列快速、瞬时的外向电流 ,4- Ap对其有特异性阻断作用。激活电压为 - 53.85± 7.8m V。2 A型钾通道的数量在牛蛙毛细胞间存在差异。 3当钳制电位为 - 70 m V,以 1 0 m V的步距阶跃去极化 ( - 50 m V～ + 4 0 m V) ,可产生一延迟整流性钾离子流 ,四乙基氯化氨 ( TEA)能使该电流幅度下降 59%± 1 1 %。结论 :牛蛙毛细胞膜上含有 A型钾通道和延迟整流性钾通道。     

血管内皮细胞衰老与细胞生物学特征变化

目的探讨血管内皮细胞衰老与细胞生物学特征变化的关系。方法体外培养人脐静脉内皮细胞，通过传代形成细胞的衰老模型。光镜下观察各代细胞的形态结构；流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内自发荧光产物的变化；线粒体膜电位特异染色法检测线粒体膜电位的演变。结果随着细胞传代次数的增加，血管内皮细胞结构逐步退化，细胞分裂减缓，细胞周期趋向停滞于G0／G1期。处于G0／G1期的细胞由第2次传代细胞的74．17％增加至第8次传代细胞的88．80％。细胞自发荧光有显著性增加，线粒体膜电位则有显著性降低。结论在血管内皮细胞复制性衰老过程中，伴随着细胞形态退化，细胞周期分布异常，细胞内线粒体功能降低，脂质过氧化反应增强。     

依托咪酯对大鼠海马 CA1区神经元突触结构电流-电压曲线的离子通道机制研究

目的：探讨静脉麻醉药物依托咪酯对大鼠海马 CA1区兴奋性突触后电流（excitatory postsynaptic cur-rents,EPSCs）的电流-电压（I-V）曲线在离子通道层面的影响机制。方法采用断头法分离 Wistar 大鼠海马脑半球,运用切片机制作400μm 厚度的海马脑部切片。切片分别置于60μL 脂肪乳剂和依托咪酯（相当于10μmol/L）乳剂中孵育40 min。在 Schaeffer 侧支/联合纤维处给予单个刺激,同时改变 CA1锥体神经元细胞膜钳制电位（-100～＋40 mV 时,变化幅度为20 mV）,绘制 I-V 曲线,并且采用膜片钳内面向外式记录技术全程记录外向整流特性的单通道氯电流。结果在保持膜钳制电位-70 mV 的条件下,10μmol/L 的依托咪酯降低反转电位,其电位由-53 mV 左右降低为-60 mV 左右,I-V 曲线左移,相应的单通道氯电流明显增强,通道开放程度增加。结论在静息状态下,依托咪酯主要作用于兴奋性突触后膜 GABAA 受体,通过使其 EPSCs 的离子构成发生变化抑制兴奋性突触活动,此过程中外向的电流分量增加,发生的主要改变可能为氯离子的跨膜转运。     

二步酶消化法分离大鼠主动脉血管平滑肌细胞及活性鉴定

目的:建立一种有效、方便的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的酶解分离方法.方法:采用二步酶消化法分离VSM-Cs,显微镜下观察细胞形态,锥虫蓝染色观察细胞成活率,荧光显微镜检测细胞内钙荧光强度(FI)在KCl激下的变化,全细胞膜片钳记录电压-依赖性钾电流.结果:分离的VSMCs镜下呈典型的梭状或长条状,成活率达68.0％;VSMCs内钙FI在KCl刺激下可增高;并可记录到稳定的电压-依赖性钾电流.结论:本法可获得大量形态和结构良好的VSMCs,且胞膜离子通道功能良好.     

Rh123、FDA荧光法测定超声作用对大肠杆菌细胞膜的影响

目的研究大肠杆细胞经超声处理后细胞膜通透性和细胞膜电位的变化。方法应用二乙酸荧光素(FDA)、罗丹明123(Rh123)染色,通过荧光分光光度计检测FDA、Rh123荧光强度的变化,观察大肠杆菌细胞经25 kHz、300 W超声处理后细胞膜通透性和细胞膜电位的变化。结果大肠杆菌细胞经25 kHz 300W超声处理,随处理时间延长,FDA、Rh123都降低。在90 s内,超声处理对细胞存活率影响不明显,膜电位降低26.7%,膜通透性增加33.3%。结论大肠杆菌经一定超声处理后膜通透性增加,膜电位降低。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

The role of membrane potential and calcium kinetic changes in the pathogenesis of vascular hyporeactivity during severe shock

Objective To determine the role of membrane potential and intracellular calcium kinetic changes in producing vascular hyporeactivity during severe hemorrhagic shock.Methods Rats were subjected to hemorrhagic shock (HS) for 2 hours.The spinotrapezius muscle was prepared for microscopy and the responses of arterioles in the muscle to norepinephrine(NE) were tested.The resting membrane potentials of isolated arterial strips were measured with a microelectrode.Membrane potential and intracellular Ca(2+)(［Ca(2+)］i) changes in isolated arteriolar smooth muscle cells (ASMCs) were determined with fluorescent probes and a confocal microscopy. Results The arteriolar resting membrane potential was decreased from -36.7±6.3 mV in control to -29.2±5.3 mV concurrent with the increase of vasoreactivity to NE at 20 minutes after HS.At 120 minutes post-HS, the resting potential hyperpolarized to -51.9±9.1 mV, and NE stimulated ［Ca(2+)］i increase was reduced to 50% of the control values during the appearance of arteriolar hyporeactivity, i.e.the NE threshold of the arteriolar response increased 15 fold 2 hours after the onset of hemorrhage as compared with normal animals.The state of vasoreactivity was closely related to the resting potential of vascular smooth muscle in hemorrhagic shock, with a correlation coefficient of 0.96.Treatment with glybenclamide, a selective blocker of ATP-sensitive K(+)(K(ATP)) channels, decreased the resting potential, increased NE-stimulated［Ca(2+)］i increase, and partially restored vasoreactivity in severe hemorrhagic shock. Conclusion The results suggested that membrane hyperpolarization and the reduction of NE-stimulated ［Ca(2+)］i increase in smooth muscle cells appeared to contribute to the vascular hyporeactivity in hemorrhagic shock.The mechanism is likely to involve in K(ATP)channels.     

聚乙烯醇-卟啉新型纳米颗粒的制备及其光热特性

目的 将一定比例的脱镁叶绿酸引入聚乙烯醇-硫辛酸聚合物中,分析其理化性质及光热特性.方法 采用“一步法”合成聚乙烯醇-硫辛酸-脱镁叶绿酸(PLP)聚合物,激光粒径测定仪测定PLP纳米颗粒(PLPN)的粒径、多分散系数和ζ电位,电镜下观察形态,分光光度法和热成像仪初步探索其体外荧光和光热特性;建立卵巢癌裸鼠模型,行初步的体内实验评价.结果 合成的PLP聚合物在水相中自组装形成规则的球状纳米颗粒,电镜下呈紧密的球状结构,平均粒径、多分散系数和ζ电位分别为(22.92±9.00)nm、0.117±0.056和(-25.43±0.77)mV;PLPN在磷酸盐缓冲液(PBS)中的荧光强度明显低于十二烷基硫酸钠(SDS)溶液(P＜0.05),而近红外光照后温度明显高于SDS溶液(P＜0.05);在荷瘤裸鼠模型中,PLPN可靶向聚集在肿瘤部位,近红外光激发后能明显提高肿瘤部位的温度,并能杀伤肿瘤细胞.结论 PLPN发射红色荧光,能靶向聚集在肿瘤部位并行活体显像,且在体内外均具有显著的光热转换特性,在体内能有效抑制肿瘤的生长.     

Ionic basis of noradrenaline depolarization and hyperpolarization in toad dorsal root ganglia neurones

Summary The membrane conductance and reversal potential were estimated for neurones in toad dorsal root ganglia with intracellular recording technique during depolarization or hyperpolarization induced by noradrenaline (NA). The effects of blocking agents for potassium or calcium ion current on NA-induced membrane potential responses were observed as well. The NA depolarization was accompanied by a 32.6% decrease of membrane conductance. In a few neurones, the membrane conductance showed an initial increase and a following decrease. The NA hyperpolarization was associated with an increase of membrane conductance by 16.2%. The mean reversal potential of NA depolarization was -88.5 ± 0.9mV. The NA hyperpolarization responses were nullified at -89 to -92 mV of membrane potential. TEA superfusion enhanced NA depolarization amplitude by 73.7 ± 11.9% and depressed NA hyperpolarization amplitude by 40.5%. CsCl (intracelluar injection) increased phenylephrine depolarization by 34.5 %. MnCl₂ superfusion decreased the amplitudes of NA depolarization by 50.5 ± 9.9%, and of NA hyperpolarizalion by 89.5±4.9% respectively. The results suggest that depolarization or hyperpolarization induced by NA might be mediated by the alteration of K or Ca channels.