转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移？…

目的 观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突关细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法 从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭ－ＣＳＦ＋ＴＧＦβ）条件下培养增殖（ＧＣ１）并转导Ａｄ－ＬａｃＺ（Ｄｃ２）或Ａｄ－ＴＧＦβ１（ＤＣ３）,每组５×１０＾５个细胞注入Ｇ３Ｈ小鼠后掌皮下,分别     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

甲状腺细胞产生白细胞介素-6及其调节的研究

目的 研究碘化钠（ＮａＩ）、促甲状腺激素（ＴＳＨ）、白细胞介素－１（ＩＬ－１）、肿瘤坏死因了－α（ＴＮＦ－α）、地塞米松（ＤＥＸ）、肾上腺素等因子对Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺细胞（ＴＥＣ）生成ＩＬ－６的影响。方法 以超敏ＥＬＩＳＡ方法,检测甲状腺培养细胞上清液中ＩＬ－６含量。结果 单层培养的ＴＥＣ能够产生高浓度的ＩＬ－６、ＴＳＨ（１０＾３ｍＵ／Ｌ）、ＩＬ－１（１０Ｕ／ｍｌ）、ＴＮＦ－α（１０＾－     

多囊卵巢综合征患者脂代谢的研究

目的：探讨多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）患者雄激素过多和胰岛素抵抗与其脂代谢的关系。方法：本文对黄体生成素（ＬＨ）／卵泡刺激素（ＦＳＨ）≥３的１５例１型组患者、ＬＨ／ＦＳＨ＜３的１５例２型组患者和２０例正常对照组妇女，行黄体生成素释放激素（ＬＲＨ，１００μｇ）兴奋垂体－卵巢轴功能试验，观察试验前后三组睾酮（Ｔ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白－胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）及其载脂蛋白（Ａ１）（ａｐｏＡ１）的变化。结果：基础状态下，ＴＧ浓度高低顺序是对照组＜１型组＜２型组，ＨＤＬ－Ｃ的情况正好相反；ＬＲＨ试验后，两个对照组Ｔ和ＴＧ均呈上升曲线，ＨＤＬ－Ｃ呈下降曲线，尤其以２型组的变化更加明显。结论：２型组患者的脂代谢异常比１型组更加严重。雄激素过多和胰岛素抵抗是ＰＣＯＳ患者脂代谢异常的两个基本因素     

黄颜木素对HSC—T6细胞增殖和胶原合成的影响

目的：研究黄颜木素对激活的永生型大鼠肝腑 脂细胞－－ＨＳＣ－Ｔ６细胞增殖和胶原合成的影响。方法：细胞增殖采用结晶紫染色法检测,胶原合成采用＾３Ｈ－酸掺入法分析。结果：黄颜木素（６．２５－５０．００μｍｏｌ／Ｌ）以剂量依赖方式显著抑制血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）刺激的ＨＳＣ－Ｔ６细胞增殖,并抑制生长因子因子β１（ＴＧＦβ１）诱导的细胞内胶原合成,结论：黄颜木还给具有抑制激活的肝储脂细胞增殖和胶原合成     

基因转移人TGF-β1在NIH/3T3细胞中表达鉴定

目的：研究转移人转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）在真核细胞系中蛋白表达。方法：借助真核质粒表达载体,将人ＴＧＦ－β１转移入小鼠成纤维细胞株（ＮＨ／３Ｔ３）细胞中,经Ｇ４１８筛选,克隆扩增,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、ＰＣＲ、ＰＴ－ＰＧＲ鉴定,并经水貂肺上皮细胞（ＣＣＬ－６４）生长抑制法,对克隆细胞分泌ＴＧＦ－β１蛋白进行活性检测。结果：证实了重组人ＴＧＦ－β１基因在ＮＩ     

转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移与生存

目的观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突状细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭＣＳＦ＋ＴＧＦβ）条件下培养增殖（ＤＣ１）,并转导ＡｄＬａｃＺ（ＤＣ２）或ＡｄＴＧＦβ１（ＤＣ３）。每组５×１０５个细胞注入Ｃ３Ｈ小鼠后掌皮下,分别于第１、２、７及１４天取淋巴器官,以免疫组织化学方法检测ＩＡｂ阳性细胞的分布及数量。结果各组ＤＣ在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移及分布均相似,即ＩＡｂ阳性细胞首先出现在窝淋巴结被膜下,继而迁入脾的Ｔ细胞依赖区和边缘区,第７天脾内阳性细胞数达顶峰。与ＤＣ１组相比,ＤＣ２在脾内的阳性细胞数减少,ＤＣ３阳性细胞数在各时间点都为最高。结论ＤＣ经转导ＡｄＬａｃＺ,可增加其免疫活性,使宿主加速排斥反应;而转导ＡｄＴＧＦβ１可使ＴＧＦβＤＣ表达ＴＧＦβ１,维持ＤＣ于功能不成熟状态,从而提高宿主的耐受性。     

低氧对体外培养的肺血管周细胞免疫表型的影响

用细胞培养,免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＦＣＣＭ）对体外培养的新生大鼠肺血管周细胞（ＰＣ）α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ,ＣＤ３４、Ｓ－１００和ＰＣＮＡ的表达及细胞周期的影响。结果发现,低氧和ＨＥＣＣＭ可促进ＰＣ表达α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ和ＰＣＮＡ,而抑制ＣＤ３４和Ｓ－１００的合成,促进ＰＣ由静止期（Ｇ０／Ｇ１）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）及有丝分裂期（Ｇ２＋     

肝星形细胞表达转化生长因子α与成纤维细胞生长因子

目的 研究肝星形细胞（ＨＳＣ）转化生长因子α（ＦＧＦα）与成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）的表达。方法 分别从正常与ＣＣＬ４肝纤维化大鼠肝脏分离ＨＳＣ,提取ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ测定ＴＧＦα和ａＦＧＦｍＲＮＡ。结果 正常ＨＳＣ表达ＴＧＦα和ａＦＧＦ,肝纤维化时ＴＧＦα与ａＦＧＦｍＲＮＡ水平均显著升高（Ｐ〈０．０５）。结论 ＨＳＣ自分泌ＴＧＦα和ａＦＧＦ,对肝纤维化具有重要促进作用。     

转化生长因子β及受体在增生和癌变的细支气管肺泡细胞中的分布

用免疫组织化学方法检测转化生长因子（ＴＧＦ）β三型及其受体（ＴβＲ－Ⅰ）在细支气管肺泡细胞增生（ＢＡＨ）和细支气管肺泡细胞癌（ＢＡＣ）中的分布情况。结果示，大部分ＢＡＣ和ＢＡＨ病例均有一种以上ＴＧＦ－β亚型和ＴβＲ－Ⅰ表达；ＢＡＣ的ＴＧＦ－β１和ＴＧＦ－β３阳性率明显高于ＢＡＨ；有二种以上ＴＧＦ－β表达的ＢＡＣ病例，其淋巴结转移发生率更高。提示增生和癌变的细支气管肺泡细胞均可合成和分泌ＴＧＦ－β和ＴβＲ－Ⅰ，且ＴＧＦ－β对ＢＡＣ的发展起一定作用     

不同细胞因子组合对c-kit~+Lin~-细胞的体外扩增研究

目的探讨在无血清无基质条件下，不同细胞因子组合对c-kit^＋Lin^-细胞增殖效应以及最佳扩增时间。方法采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit^＋Lin^-细胞，将干细胞因子（stem cell factor，SCF），FLt-3配基（FLt-3 ligand，FL），血小板生成素（thrombopoietin，TPO），白细胞介素-3（intedeukin，IL-3），肝细胞生长因子（hepatocyte graoth factor，HGF）等细胞因子进行不同组合，体外扩增干细胞14d，于不同时间检测细胞总数和c-kit^＋Lin^-细胞数及比例，并在第10天通过细胞凋亡早期膜变化标记FIFT-Annexin-V，检测细胞凋亡率。结果各组细胞因子均能显著扩增c-kit^＋Lin^-细胞，扩增倍数3～19倍不等。在SCF＋FL＋TPO中加入IL-3或HGF，其效果更明显，c-kit^＋Lin^-细胞在第6天分别扩增4．71和5．15倍，当同时加入时，两者有协同作用。其中SCF＋FL＋TPO＋IL-3＋HGF在第10天扩增程度最为显著，并且凋亡率最低为6．59％。结论在体外短期培养过程中上SCF＋FL＋TPO＋IL-3＋HGF组合能产生大量的c-kit^＋Lin^-细胞，并且最佳培养时期为第10天，为肝干细胞提供种子细胞。     

反义肽核酸对树突状细胞CD86表达的抑制作用

目的 探讨CD86mRNA反义肽核酸（peptide nucleic acid,PNA)阻断树突状细胞CD86表达和第二信号传递的可能作用。方法 采用激光共聚焦显微镜研究生物素化PNA的细胞内化；利用流式细胞术，荧光细胞组织化学以及RT-PCR研究CD86反义PNA对CD86分子表达的抑制作用，结果 （1）激光共聚焦显微镜光学细胞切片证明，培养的人未成熟树突状细胞能够有效内化生物素化PNA。（2）流式细胞术和荧光细胞组织化学证实CD86反义PNA在蛋白质水平上对CD86分子表达有抑制作用。（3）RT-PCR证明反义PNA能够抑制DCCD86mRNA水平。结论 CD86反义PNA能够抑制人树突状细胞CD86mRNA的表达，从而为进一步利用反义PNA阻断第二信号传递，诱导免疫耐受奠定了基础。     

Optimal in vitro culture conditions for murine predominant immature CD8a+ dendritic cells

Background The prospects of using immature CD8a^＋ dendritic cells （DC2） to establish transplant immunologic tolerance and treatments for autoimmune diseases in the future are promising. However, the methods for inducing DC2 are still being explored. The present study was aimed to investigate the optimal in vitro conditions for preparing large numbers of predominant DC2 from murine bone marrow cells. Methods Three groups of bone marrow cells cultured under different conditions were examined, namely a cytokine-induced experimental group （cytokine group）, a control group with a low concentration of granulocyte-macrophage colony stimulating factor （GM-CSF, low GM-CSF group） and a control group without endogenous cytokines. The cytokine group was cultured with 5 ng/ml GM-CSF, 25 ng/ml Fit3 ligand （FIt3L）, 20 ng/ml interleukin 4 （IL-4） and 100 ng/ml stem cell factor （SCF）. The low GM-CSF control group was cultured with 0.4 ng/ml GM-CSF, 25 ng/ml FIt3L and 100 ng/ml SCF, without IL-4. The control group without exogenous cytokines was cultured without additional cytokines. All cells were cultured at 37℃ under 5% CO2. On days 3, 7 and 16, 4-color flow cytometry was carried out to analyze the cell phenotypes, and the total cell numbers were counted to analyze the cell yields. Phase-contrast microscopy was used to observe the cell morphologies. Results The cytokine group exhibited higher proportions of typical immature CD8a^＋ DC, especially on day 3, but the total cell number and DC2 proportion decreased during prolonged culture. The low GM-CSF control group showed the same tendencies as the cytokine group on days 16 and 22, but produced higher total cell numbers （P 〈0.05） with lower DC2 proportions and cell numbers. The control group without exogenous cytokines spontaneously generated a certain proportion of DC2, but with low total cell and DC2 numbers that decreased rapidly, especially during prolonged culture （days 7 and 16, P 〈0.05）, Conclusions Culture in the presence of 5 ng/ml GM-CSF, 25 ng/ml FIt3L, 20 ng/ml IL-4 and 100 ng/ml SCF can rapidly induce large quantities of predominant immature CD8a^＋ DC from murine bone marrow cells. Therefore, these represent optimal culture conditions for preparing murine immature DC2 in vitro.     

肝细胞生长因子对c-kit+Lin-细胞的增殖作用

目的 探讨在无血清无基质的条件下,肝细胞生长因子(HGF)和因子组合对扩增c-kit Lin-细胞的影响.方法 采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF),FLt-3配基(FL),促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的HGF培养7 d,检测细胞总数,c-kit Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率.结果 各因子组均可显著扩增c-kit Lin-细胞,扩增倍数2～8倍不等.其中,10ng/ml HGF组扩增c-kit Lin-细胞效果最为显著.为8.00倍,细胞总数扩增45.43倍,细胞凋亡率为17.42%.但随剂量加大,虽然细胞总数上升,c-kit Lin-细胞扩增反而下降.40 ng/ml组细胞总数扩增80.50倍,c-kit Lin-细胞扩增效果不明显,仅为2.87倍,细胞凋亡率最低.为5.91%.结论 10 ng/ml的HGF能协同SCF FL TPO LIF扩增c-kit Lin-细胞,使细胞凋亡率降低,其表型并不受影响,但过高剂量会诱导其分化.     

大鼠OX-62~+树突状细胞的体外诱导及生物学特性

目的 :从大鼠骨髓中有效地诱导、培养OX 6 2 + 树突状细胞 (dendriticcells,DC) ,观察其表型及功能特征。方法 :大鼠骨髓细胞培养 3h ,贴壁细胞加入含重组大鼠GM CSF和IL 4 ,继续培养 6～ 12d ,淘洗法去非粘附细胞中的Fc受体阳性细胞 ,流式细胞仪分析细胞表型及抗原摄取能力 ,混合淋巴细胞反应检测其刺激同种T细胞增殖能力 ,ELISA测定分泌IL 12水平。结果 :培养DC90 %以上表达OX 6 2。培养 6d的OX 6 2 + DCs具有不成熟表型 ,表达中等水平的MHCII抗原和低水平的CD80、CD86、ICAM 1;分泌少量IL 12 ;具有较强的摄取抗原能力 ,但刺激同种T细胞增殖能力极低。培养 12d的OX 6 2 + DC已经成熟 ,MHCII、CD8、CD86、ICAM 1表达明显增加 ;分泌IL 12增加 ;摄取抗原能力下降 ;刺激同种T细胞增殖能力明显增强。结论 :成功建立了体外大量扩增大鼠骨髓OX 6 2 + DC的新方法。     

Her2/neu基因重组腺相关病毒转染人外周血来源树突状细胞的免疫功能

OBJECTIVE: To observe the immunostimulatory effect of human peripheral blood dendritic cells (DCs) transfected by Her2/neu gene delivered by adeno-associated virus. METHODS: The mononuclear cells in healthy donors were isolated by Ficol-Hypaque density gradient separation and divided into transfection group and control group without transfection by the recombinant virus. The cells were initially cultured in RPMI 1640 medium supplemented with 10% AB human serum, followed by addition of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), interleukin (IL)-4 and tumor necrosis factor (TNF)-alpha into the medium. The surface markers of DC were detected by flow cytometry, allogeneic mixed lymphocyte reaction assayed by 3H-TdR incorporation and the specific killing activity of T cells evaluated by MTT assay. RESULTS: The expression rates of CD1a, CD86 and CD83 of the transfected DCs were 98.10%, 99.42%, and 84.59%, and those of the non-transfected DCs were 92.69%, 98.07%, and 82.72%, respectively, showing no obvious differences between the two groups. The rates of CD4 and CD80 expression were 61.02% and 97.61%, respectively, in the transfected DCs, significantly higher than those in the non-transfected cells (36.19% and 55.5%). Both groups of DCs stimulated a strong T cell proferation response. The transfected DCs were capable of inducing specific killing of the target tumor cells, with the highest killing rate of (39.7+/-7.2)%. CONCLUSION: The immunostimulatory effect of human peripheral blood DCs can be enhanced by Her2/neu gene transfection mediated by adeno-associated virus.     

抗原致敏树突状细胞诱导CTL杀伤K562细胞体外实验研究

目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞（DC）诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞（PBMC）诱导培养出DC，在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法，对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC；在效靶比为10：1及20：1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55．9％土22．0％、90．2％＋24．8％，均高于其他3组（p，0．05）。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL，具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。     

小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

TGF-β1基因修饰树突状细胞对免疫排斥反应影响的研究

目的 探讨术前输注TGF-β1基因修饰的供者树突状细胞（dendritic cell，DC）对大鼠肝移植免疫排斥的抑制作用及相关机制。方法 TGF-β1重组腺病毒转染供者DC，静脉输注受体大鼠，1周后建立大鼠肝移植免疫排斥模型并鉴定表达，记录存活时间，凝胶电泳迁移率试验法检测脾T细胞、Kupffer细胞NF—κB活性及相关细胞因子TNF的表达，观察移植肝排斥病理改变。结果 Ad—TGF—β1-DC输注组移植大鼠的T细胞、Kupffer细胞活性及TNF表达明显低于对照组，排斥病理改变明显减轻，存活时间延长，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论 TGF-β1-DC能有效降低T细胞和Kupffer细胞活性，提高移植肝免疫耐受，延长存活时间。