邪毒壅盛和气虚证H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺基因转录的差异

目的 揭示H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证肾上腺基因表达的特征.方法 采用小鼠标准化四诊及辨证方法 ,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注早期2个证候表达量大、差异显著的基因.结果 ①筛选邪毒壅盛证上调和下调基因20条和7条,气虚证上调和下调基因4条和7条.②邪毒壅盛证上调的基因涉及到信号转导与免疫应答的Pomc1、Tnfaip6、Ccrl2、Rgs1等,调控转录的Bhlhb2、Ell2、Atf3、Hivep2、Klf4等,参与代谢调节的Usp37、Chka、Dusp10等;邪毒壅盛证下调基因有Hbxip、H2-T22、Ndufs6,Tgfb1、Mgat4b、Cdkl3等.③气虚证独特上调基因有Pde10a、Ol-fr1305、Olfr46、Cyp3a13等;气虚证独特下调基因涉及到激素类Gh、Pomc1、Prl、Cga和原癌基因Junb.结论 荷瘤小鼠邪毒壅盛证和气虚证肾上腺存在大量基因表达的改变,这可能是证候内在的本质之一.     

Smad信号转导通路在不同证候H22荷瘤小鼠肾上腺的基因表达

目的 研究TGF-β、Bmp/Smad信号通路基因在不同证候H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺的表达特征.方法 采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠接种第8天(早期)邪毒壅盛证和气虚证、接种第21天(中期)阳气虚证、接种第29天(中晚期)气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异.通过系统聚类法分析不同证候肾上腺Smad信号通路基因表达模式的相似性及其差异特征.结果 就证候而言,邪毒壅盛证与气虚证的基因表达模式相似,而阳气虚证和气阴阳虚证的基因表达模式类似.就基因而言,TGF-βr1、2、3等基因具有相似的表达模式;Smad2与Smad4,Bmp1与Bmp4也具有相似的表达模式.Smad信号通路中,TGF-β受体及Bmp受体表达量分别高于TGF-β与Bmp基因.结论 芯片数据提示,H22荷瘤小鼠肿瘤发生后,不同证候的肾上腺Smad通路基因多数被激活,且基因表达模式可能与不同证候有关.     

邪毒壅盛证和气虚证荷瘤小鼠垂体上调与下调的基因

目的：揭示荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证与气虚证垂体基因表达的差异。方法：采用小鼠标准化四诊及辨证方法,及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证3阶段4个证候垂体的基因表达,筛选邪毒壅盛和气虚两证候垂体基因表达与正常比较一致上调或下调的基因。结果：①邪毒壅盛证和气虚证垂体表达上调的基因有5个,其中邪毒壅盛证Alas2、Sgk、Cbln3表达高,十分突出,可能与该证候形成有关;②邪毒壅盛证和气虚证的垂体有13个基因表达几乎关闭,其中Abpg、Pip,以及Car6、Klk1b22、Klk1b3、Klk1b9、Muc10、Ren1、Hspa1a、Wfdc12等基因在正常组表达量大。结论：荷瘤小鼠垂体早期出现显著的衰退表现,而个别基因表达的增加,可能与邪毒壅盛有关。     

不同证候H22荷瘤小鼠垂体一致上调或下调的基因

目的：观察常见不同证候荷瘤小鼠垂体基因表达的特征。方法：采用H22荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个证候及正常小鼠垂体基因的表达,筛选出不同证候一致上调或下调的基因。结果：荷瘤小鼠一致上调的基因有Alas2、Ube2l6、Sgk、BC055107、Cdh26、Bhlhb2、Nr1d2、Slc39a14、Serpina3n、Ms4a6c、Lcp1、Dhx8、Il1r1、S100a8、S100a9、Cxcl1、Hp、Csf1r、RIKEN cDNA2610307008gene、Phactr3、Mknk1、Aloxe3、Aqp11等23个;一致下调的基因有2310047A01Rik、Hoxa10、Cryaa、Hspa1a、Dub2a、Mpz、Klk1、Naaladl1、Prph1等9个;其中部分基因在一些证候中的表达有显著的改变。结论：肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠垂体存在大量基因表达的差异,其中部分与证候有关。     

肝癌小鼠不同阶段有关证候肾上腺差异表达的基因分析

目的：揭示肝癌小鼠不同阶段常见证候肾上腺基因表达的特征。方法：采用实验小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因。结果：筛选到不同阶段一致上调的基因73个,一致下调的基因26个。其中一致上调的基因包括Hp、C3、Anxa1、Procr、C2、Il4ra、Cd14、Ptprc、Cd52、C4b以及Eno3、Xdh、Gpx3等。一致下调的基因涉及到神经系统相关基因如Plp1、Mbp、Aldh1a1、Cck和Atn1,与水电解质代谢有关的基因如Aldh1a1和Slc22a17等,与信号转导有关的基因如Cxcr4、Spag5和Stmn3等,以及参与转录调控和蛋白质生物合成的基因,如Hspa1a、Dnajb1、Thra和Hhex等。结论：H22肝癌小鼠在疾病发生发展过程中,存在证候的演变及肾上腺组织基因表达的差异,不同阶段一致上调或下调的差异表达基因可能是肝癌小鼠及其证候区别于正常小鼠的特征之一。     

中晚期气阴阳虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达基因的分析

目的：揭示H22荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法：采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术及芯片分析方法,观察H22荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证与其他3个典型证候早期邪毒壅盛和单纯气虚证,及中期阳气虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果：①筛选到中晚期阴虚证独特性高表达的基因12个,包括与蛋白酶或其抑制因子有关的基因Mmp10、Slpi等4个,与B淋巴细胞有关的基因Cxcll3、P0u2afl等3个,及其他相关的基因Id．V1、Abpg等5个;②筛选到中晚期阴虚证独特性低表达的基因12个,包括与小鼠生殖、发育有关的基因Ldhc、Fabp9、Mael等9个,及其他功能类基因Cxcl9、Atp8b3等3个。结论：中晚期阴虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

垂体特异性转录因子Pou1f1靶基因在不同证候H22荷瘤小鼠的表达特征

目的分析垂体重要功能基因及其垂体特异性转录因子(Pou1f1)靶基因在不同证候荷瘤小鼠的表达差异。方法将H22肝癌腹水细胞接种于190只昆明种小鼠腋下,并设置对照组,采用小鼠标准化四诊信息采集与辨证技术筛选典型的邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证小鼠,并抽提小鼠垂体、下丘脑、肾上腺等组织RNA,采用基因芯片技术检测不同组织基因表达谱,本文重点分析不同证候垂体基因芯片数据。结果与对照组比较,垂体重要功能基因阿片促黑素皮质素原(Pomc)、生长激素(Gh)和催乳素(Prl)在早期的邪毒壅盛证和气虚证中表达下调约10%,而Pomc、Gh、Prl和促甲状腺激素β亚基(Tshb)在中晚期的阳气虚证和气阴阳虚证中表达上调30%以上。Pou1f1在垂体组织中表达最高,呈现组织特异性表达特征;垂体特异性转录因子Pou1f1和Neurod1仅在邪毒壅盛证上调,Tbx19和Egr1在不同证候中均呈现上调特征,Nr4a1、Nr4a2、Pitx1、Gata2、Nr4a3、Foxl2等基因在不同证候中均呈现下调特征。Pou1f1相关靶基因Crem、Tcf4、Rnf41、Lrpprc,Mrps18b、Eif3a、Lars,Arf4、Cep57、Vcpip1,Ptpn6、Myd88、F3,Lrrfip2、Dixdc1与Pou1f1基因表达模式类似,即在邪毒壅盛证上调。结论肿瘤状态下的不同证候小鼠,其垂体重要功能基因表达失常,垂体特异性转录因子Pou1f1及其靶基因在邪毒壅盛证具有类似的表达模式。     

不同证候H22荷瘤小鼠胸腺一致上下调高表达的基因

目的:观察常见证候荷瘤小鼠胸腺中一致上调和下调的高表达基因。方法:采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon1.0ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠在早期邪毒壅盛证、气虚证,中期阳虚证,中晚期阴虚证等4个证候胸腺中一致上调或下调者,重点关注表达量高的基因。结果:肿瘤发生后,胸腺中有34个基因表达发生显著改变。其中一致上调者20个,一致下调9个。结论:(1)Tpp2、per2基因在肿瘤发生的早期表达几乎关闭,与肿瘤发生的早期关系密切。(2)20个高表达基因,如Hey2、MMP-19等,可能在中晚期胸腺退化阶段起到特殊的作用。(3)推测这些一致上调和下调的基因与肿瘤发生及其不同阶段的关系更为密切,而非证候。     

同病异证和异病同证的物质基础——肿瘤、高血压、糖尿病大鼠/小鼠神经-内分泌组织一些重要激素的转录特征

目的:揭示肿瘤、高血压、糖尿病同病异证、异病同证大鼠、小鼠神经-内分泌组织一些重要激素表达的特征。方法:采用腋下接种H22荷瘤小鼠,辨证出早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证和气虚证、中晚期气阴阳虚证和气虚证;采用自发性高血压大鼠和自发性糖尿病大鼠,辨证出气盛证和气虚证;分别与正常和正常气虚证大鼠、小鼠对照;采用Affymetrix外显子芯片,检测其下丘脑、垂体、甲状腺、肾上腺、性腺等组织基因表达的差异;重点观察CRH、POMC,TRH、TSH,GnRH、FSH、LH,GhRH、GH等基因表达的改变。结果:①大鼠、小鼠下丘脑TRH表达量较CRH、GnRH、GhRH大;垂体TSH、POMC、FSH、GH表达量大,并不同程度表达GnRH、GhRH、CRH;甲状腺、肾上腺、性腺等亦不同程度地表达POMC、TSH、FSH、LH、GH,小鼠尤甚,但大多没有规律;正常大鼠睾丸高表达LH。②正常大鼠、小鼠气虚证者,这些激素水平不同程度下调,唯小鼠TRH和TSHb上调。③疾病发生后,对机体危害程度较重的证候,如肿瘤的邪毒壅盛证、高血压的气盛证,其神经-内分泌有关激素的表达抑制程度略重于同期的气虚证。结论:大鼠、小鼠神经-内分泌一些重要激素调节模式略有差异。总体上,气虚证大鼠、小鼠神经-内分泌轴轻度抑制,疾病危重者抑制更显著,小鼠甲状腺轴例外。     

Expressive Characteristic of Growth Factor in Thyroid of H22 Mice with Different Syndromes

目的 观察同病异证H22荷瘤小鼠甲状腺生长因子类基因表达的特征.方法 采用小鼠计量化四诊辨证方法、GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,观察肿瘤早期邪毒壅盛证及气虚证小鼠甲状腺细胞因子类基因表达特征.结果 胰岛素生长因子类、血小板衍生生长因子类、血管内皮生长因子类基因表达量总体上呈上调趋势;成纤维细胞生长因子类总体呈在肿瘤早期气虚证上调的趋势;表皮生长因子类和转化生长因子类基因,总体特征不明显.以上各类基因,均体现出气虚证表达量高于邪毒证的特点.结论 与既往研究甲状腺轴变化趋势一致:肿瘤气虚证小鼠甲状腺处于积极的代偿状态,其它内分泌等组织机能减退可能是主要的;而邪毒壅盛证小鼠的细胞生长因子及受体表达量低于同期的气虚证小鼠,可能与邪毒壅盛证小鼠预后差有关,是神经-内分泌轴的调节出现失代偿的征兆之一.     

氢化可的松诱发虚证状态对H22肝癌小鼠肿瘤增长的影响

目的?研究氢化可的松诱发的虚证状态对肝癌小鼠肿瘤增长的影响。方法?将雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组、肿瘤模型组、氢化可的松组,氢化可的松肿瘤组,采用氢化可的松给药小鼠14?d造成虚证状态,给药第1天同步接种H22肝癌细胞至腋下复制荷瘤小鼠模型。动态观测小鼠体质量与肿瘤大小变化;处死小鼠后,取脾脏、胸腺称质量并计算脏器指数;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成酶以及肿瘤增殖相关的mRNA表达;运用Western blot方法检测肿瘤Akt、p-Akt蛋白表达。结果?与正常对照组比较,肿瘤模型组脾脏显著增大（P＜0.05）,肾上腺Cyp11a1、Cyp11b1、Cyp11b2的基因表达显著下调（P＜0.05）;使用氢化可的松的小鼠脾脏和胸腺明显萎缩（P＜0.01）,肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因均下调（P＜0.05）。与肿瘤模型组比较,氢化可的松肿瘤组小鼠接种肿瘤第7天肿瘤体积减小（P＜0.05）,同时氢化可的松显著抑制肿瘤组织Akt1基因表达（P＜0.05）,促使Foxo3基因表达上调（P＜0.05）、抑制Akt、p-Akt蛋白表达。与氢化可的松组比较,氢化可的松肿瘤组小鼠脾脏、胸腺萎缩减轻,肾上腺类固醇合成酶基因表达均上调（P＜0.05）。结论?氢化可的松通过抑制内分泌免疫功能诱发小鼠虚证,短期使用小鼠肿瘤增殖减缓,而持续性虚损状态下促进肿瘤生长。      

阳痿肾阳虚证转录组学特征研究

目的:研究阳痿肾阳虚证的转录组特征,揭示肾阳虚证"同证异治"的生物学基础。方法:分别对3例阳痿肾阳虚证,3例健康组进行Agilent人4×44 k表达谱芯片实验,对差异表达基因进行GO、Pathway分析。结果:阳痿组与健康组的差异表达基因达1396条。其中差异性最大的是归属于GO:0008287(蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物),找出具有显著性差异的信号转导通路8个。结论:阳痿肾阳虚证的转录组特征有可能是丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物通过Rho激酶调节钙信号转导通路,通过与前期同类研究对比,发现阳痿肾阳虚证在钙信号转导通路方面存在一致性,其他功能基因及通路均有差异。由此表明不同疾病的肾阳虚证在信号转导通路方面各自有显著特点,为我们提出的"同证异治"提供了分子生物学基础上的证据。     

老龄冠心病心肾阳虚证以药测证的差异表达基因谱分析

目的：通过双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证以药测证基因表达水平的异常。方法：采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者3例治疗前后采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果：经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证以药测证,获得22条差异表达基因,主要涉及生理过程,免疫相关的基因。结论：老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和生理紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

肾阳虚证动物模型现代研究概况

肾为先天之本,藏真阴而寓元阳,为水火之脏,只宜固藏,不宜泄漏,所以肾多虚证。肾阳虚证动物模型常用的检测指标有：①一般生命质量评价。②生物化学指标的检测：包括内分泌代谢的检测（包括酶的含量变化,肾上腺、睾丸、血清睾酮水平,微量元素测定）;神经系统的检测;免疫系统的检测。③分子生物学指标。     

不同品系H22肝癌小鼠证候特征的比较研究

目的:观察并比较常用不同品系H22肝癌小鼠中医证候的特征与差异。方法:将KM、BALB/c、ICR、C57共4种品系小鼠各30只,分别随机分成正常对照组10只,肝癌组20只。肝癌组小鼠右腋下接种H22细胞造成荷瘤小鼠模型,观察出瘤后各品系肝癌小鼠生存率差异,采用小鼠四诊工作站及其方法,检测小鼠证候的发生与演变。结果:4种品系小鼠腋下接种后均形成实体瘤。在生存率方面,早期各品系肝癌小鼠无明显差异;中晚期差异大,BALB/c肝癌小鼠最低,ICR与KM肝癌小鼠其次,C57肝癌小鼠最高。瘤体积比较,KM肝癌小鼠增长最快,ICR肝癌小鼠增长最慢。去瘤体质量方面,中晚期各荷瘤小鼠呈现下降趋势,ICR小鼠下降最明显,其次是BALB/c与KM小鼠,C57小鼠去瘤体质量变化小。另外,不同品系肝癌小鼠邪毒证与气虚证贯穿疾病始终,且程度逐渐加重,阴虚证与阳虚证在中晚期发生且逐渐加重,其中BALB/c与ICR肝癌小鼠气虚、阴虚、阳虚最严重。结论:KM、BALB/c、ICR、C57等不同品系H22肝癌小鼠均会自发形成证候,KM小鼠最适合于肝癌证候与辨证论治的研究。     

基于2-DE蛋白质组学的气虚血瘀慢性心肌缺血模型的能量代谢紊乱及心肌损伤研究

Objective: To inquire the characteristic proteins in chronic myocardial ischemia by testing two-dimensional electrophoresis (2-DE) map to explore the possible inherent pathological mechanism and the therapeutic intervention of qi deficiency and blood stasis syndrome. Methods: Ameroid constrictor ring was placed on the first interval of left anterior descending coronary artery to prepare chronic myocardial ischemia model on Chinese miniature swine. Animals were randomly divided into sham group and model group with 10 animals in each group, respectively. The dynamic symptoms observation of the four diagnostic information was collected from 0 to 12 weeks. Echocardiography was employed to evaluate cardiac function and the degree of myocardial ischemia, 2-DE and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) were used to carry out proteomics research on animals. Enzyme-linked immunosorbent assay was applied to identify the relevant differential proteins on chronic myocardial ischemia with qi deficiency and blood stasis syndrome. Results: The preliminary study found that at the 12th week, chronic myocardial ischemia with qi deficiency and blood stasis syndrome model was established stably. Compared with the sham group, there were 8 different proteins down-regulated, 22 proteins up-regulated significantly. After validated by MALDI-TOF-MS/MS, 11 protein spots were identified. Distinct proteins were mainly associated with energy metabolism and myocardial structural injury, including isocitrate dehydrogenase 3 (NAD+) alpha, NADH dehydrogenase (NAD) Fe-S protein 1, chain A (crystal structure of aldose reductase by binding domain reveals a new Nadph), heat shock protein 27 (HSP27), oxidoreductase (NAD-binding protein), antioxidant protein isoform, cardiac troponin T (cTnT), myosin (myosin light polypeptide), cardiac alpha tropomyosin, apolipoprotein A-Ⅰ and albumin. Conclusion: Down-regulated energy metabolism disorder mediated by NADH respiratory chain and myocardial injury may be the pathogenesis of myocardial ischemia with qi deficiency and blood stasis syndrome. These proteins may be the potential diagnostic marker(s) for qi deficiency and blood stasis syndrome, finally provided new clues for new therapeutic drug target of Chinese medicine.