低频脉冲电磁场通过cAMP/PKA信号通路促进成骨细胞分化的研究

目的研究50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields, PEMFs）是否通过cAMP/PKA信号通路促进成骨 细胞分化。方法体外培养大鼠颅骨成骨细胞（rat calvarial osteoblasts, ROBs）,传代融合后采用50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场 处理不同时间后检测细胞内cAMP浓度及PKA磷酸化水平的变化。使用2’,3’-双脱氧腺苷（DDA）抑制细胞内腺苷酸环化酶 （AC）活性,检测经低频脉冲电磁场刺激后细胞碱性磷酸酶（ALP）活性及成骨性基因转录的变化;使用KT5720抑制PKA的磷酸 化,检测经低频脉冲电磁场刺激后细胞成骨性基因转录及蛋白表达的变化。结果采用50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场处理 20 min 后,ROBs内cAMP浓度显著升高,持续至40 min 后迅速下降,至2 h时再次升高,p-PKA亦表现出同样的变化趋势,说 明低频脉冲电磁场激活了cAMP/PKA信号通路;使用DDA抑制腺苷酸环化酶活性后,由低频脉冲电磁场引起的ALP活性及成 骨性基因转录升高显著下降,同样使用KT5720抑制PKA磷酸化后,由低频脉冲电磁场引起的成骨性基因转录及蛋白表达亦下 降,说明cAMP/PKA信号通路参与低频脉冲电磁场促进ROBs分化的过程。结论50 Hz 0.6 mT低频脉冲电磁场通过cAMP/ PKA信号通路促进ROBs分化。     

低频脉冲电磁场通过IGF-1R/NO信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞成熟及矿化

目的: 观察低频脉冲电磁场（PEMF）是否通过胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）/一氧化氮（NO）信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞成熟及矿化。方法: 体外分离培养乳鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分成9组,每天用50 Hz 0.6 mT PEMF处理不同的时间,通过检测成骨细胞中NO含量确定PEMF最佳处理时长。将传代后的成骨细胞随机分成空白对照组、PEMF组、GSK（IGF-1R阻断剂）组、PEMF+GSK组,PEMF处理成骨细胞3 d后,采用蛋白质印迹法检测蛋白激酶（AKT）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和cGMP依赖性蛋白激酶（PKG）蛋白表达水平;PEMF处理第6天时测定碱性磷酸酶（ALP）活性;PEMF处理第12天时采用茜红素染色法观察钙化结节形成情况。结果: 经1.5 h电磁场处理后的成骨细胞中NO含量显著提高（P < 0.01）,遂后续采用PEMF处理1.5 h。与空白对照组比较,PEMF组AKT、iNOS、PKG蛋白表达量增加（均P < 0.01）,ALP活性升高（P < 0.05）,且茜红素染色面积增大（P < 0.01）;GSK组AKT、iNOS、PKG蛋白表达量减少,ALP活性降低（P < 0.05）,茜红素染色面积最小（P < 0.01）;PEMF+GSK组上述实验结果均高于GSK组但低于PEMF组（P < 0.05或P < 0.01）。结论: PEMF可能通过IGF-1R/NO信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞成熟与矿化。     

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的 探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞（MC3T3-E1）分化的影响及作用机制。方法 将MC3T3-E1细胞分为正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、NG+特立帕肽组（5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽）、高糖组（HG,25 mmol/L葡萄糖）、HG+特立帕肽组（25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽）和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组（25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89）。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果 各组细胞增殖能力差异无统计学意义（P>0.05）。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高（P<0.05）,ALP活性增强（P<0.05）,茜素红矿化结节生成能力增强（P<0.05）,细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、R...     

PKA信号通路通过CREB正性调控USP22基因的转录激活

【目的】 通过对原癌基因USP22的5'端启动子活性分析,获得 PKA信号通路调控USP22转录激活的直接证据并探索其中机制。 【方法】 克隆USP22基因5'端核心启动子,定向插入荧光素酶报告载体pGL3-Basic;重组质粒经脂质体转染人宫颈癌HeLa细胞12 h后,分别采用PKA信号的激动剂Forkslin和抑制剂H-89刺激;双萤光素酶实验分析USP22启动子片段的相对活性;在此基础上,利用real-time PCR检测Forkslin和H-89对内源性USP22表达影响,以获得PKA信号通路调控USP22转录激活的直接证据;采用DNA定点突变技术,剔除该启动子区一个典型的CREB/ATF结合位点,经Forkslin和H-89处理,双萤光素酶检测以证实PKA信号通路通过CREB/ATF反应元件调控USP22的转录;最后,联合染色质免疫共沉淀(ChIP)与real-time PCR实验观察H-89对转录因子CREB与USP22启动子结合能力的影响。 【结果】 USP22基因的启动子活性及内源性mRNA表达受到PKA通路抑制剂H-89的显著抑制,但并未因为PKA的激活而出现明显上调;破坏CREB/ATF结合位点可消除USP22启动子对H-89的反应性;H-89抑制CREB与USP22启动子中CREB/ATF反应元件的结合导致USP22转录活性的下降。 【结论】 CREB/ATF结合位点控制着USP22基因的常规表达;USP22的转录受到PKA信号通路的正性调控;PKA信号通路通过转录因子CREB实现上述功能。     

脉冲电磁场促进成骨细胞成熟分化依赖于初级纤毛-PI3K/AKT途径

目的: 研究脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields, PEMF)促进大鼠成骨细胞成熟分化是否与初级纤毛和PI3K/AKT途径相关,探讨PEMF促进骨形成的作用机制。方法: 用酶解法获取新生SD大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts, ROB), 50 Hz、0.6 mT PEMF处理0、0.5、1、1.5和2 h后检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)蛋白表达量及初级纤毛长度和发生率的变化情况;用LY294002阻断PI3K/AKT信号途径,观察PEMF促进ROB成骨性分化是否受到影响;以RNAi法干扰IFT88的基因表达以抑制初级纤毛发生,观察PEMF激活的PI3K/AKT信号途径及ROB的成骨性分化是否受到影响。成骨性分化指标包括碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,real-time PCR法和Western blot法检测的成骨性相关基因BMP-2、COL-1和OSX的基因表达量,以及钙化结节数量等。结果: 经PEMF处理0、0.5、1、1.5、2 h后,ROB的PI3K、AKT蛋白表达量升高(P<0.01),初级纤毛变长;其中PI3K在0.5 h时蛋白表达量达到最高,随着PEMF处理时间增加,蛋白表达量降低; AKT在0.5 h和1.5 h时蛋白表达量较高。用PI3K阻断剂LY294002阻断PI3K/AKT信号途径后,PEMF不再能提高成骨细胞中ALP 活性和成骨性相关基因BMP-2、COL-1、OSX的基因表达量,但在阻断前PEMF能增加ROB中ALP活性和成骨性相关基因的表达;RNAi干扰初级纤毛发生后,PEMF不再能增加PI3K的蛋白表达量,说明初级纤毛干扰后,PEMF不能激活PI3K/AKT信号途径;其次,PEMF提高ALP活性的作用消失,也不能提高BMP-2、COL-1和OSX的基因表达量,其增加ROB钙化结节形成能力的作用也消失,说明初级纤毛干扰后,PEMF促进成骨细胞成熟矿化的能力消失。结论: PEMF通过成骨细胞表面的初级纤毛激活了PI3K/AKT信号途径,进而发挥了骨形成活性的促进作用。     

低频脉冲电磁场对大鼠成骨细胞骨形成的影响及作用机制

目的 观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制。方法 取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合。采用50 Hz 0.6 mT PEMFs处理3、6、9 d后,检测ROBs内的碱性磷酸酶(ALP)浓度;处理0、15、30、60、90、120 min后,检测ROBs内骨形成相关因子(RUNX2)和成骨相关转录因子(OSX)蛋白表达,cAMP浓度,p-PKA、p-CREB和CREB蛋白表达。观察p-CREB核转位情况。采用RNA干扰法干扰IFT88后,检测ROBs内RUNX2、OSX、p-PKA和p-CREB蛋白表达情况。结果 PEMFs处理ROBs 3、6、9 d后,ALP活性值分别为24.356±4.911、37.688±2.151和39.922±5.486,均明显高于相应对照组的18.531±2.401(P=0.0121)、33.675±4.366(P=0.0324)和36.574±1.339(P=0.0134)。PEMFs处理30(P=0.0042和P=0.0058)、60(P=0.0097和P=0.0079)、90 min(P=0.0083和P=0.0098)时,ROBs内的RUNX2和OSX活性均显著高于未处理组;PEMFs处理30(P=0.0012) 和60 min(P=0.0035)时,ROBs内的cAMP浓度明显高于未处理时;PEMFs处理15(P=0.0018)、30(P=0.0087)、90(P=0.0250)和120 min(P=0.0350)时,ROBs内的p-PKA水平明显高于未处理组;PEMFs处理15(P=0.0075)、30(P=0.0017)、60(P=0.0074)和90 min(P=0.0096)时,ROBs内的p-CREB水平明显高于未处理组。PEMFs处理ROBs 15 min后,CREB发生磷酸化并聚集于细胞核内。将PKA、p-PKA与初级纤毛共定位染色,结果发现p-PKA定位于初级纤毛上。RNA 干扰去除初级纤毛后,干扰组的p-PKA(F=78.602,P=0.0270)和p-CREB(F=76.082,P=0.0089)蛋白表达量及RUNX2(F=41.064,P=0.0230)和OSX(F=57.524,P=0.0310)蛋白表达量均明显低于未干扰组。结论 PEMFs可能是通过初级纤毛相关的cAMP/PKA/CREB信号通路促进ROBs骨形成。     

低频脉冲电磁场促进骨愈合的研究

目的研究低频脉冲电磁场对骨愈合的影响,并对其机理进行了探讨。方法利用自行研制的一种低频脉冲电磁场治疗仪,将治疗线圈安放在骨折部位,并在治疗线圈中通以脉冲方波电流,使其在骨折部位产生低频脉冲电磁场,磁感应强度为２～４ＧＳ。结果实验研究表明低频脉冲电磁场有明显促进骨愈合的作用。具有一定的临床价值。结论该方法对骨折愈合有较好的促进作用,临床应用也取得了满意的疗效,具有广泛的应用前景。     

依托咪酯调节cAMP/PKA/CREB信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的 探究依托咪酯（Eto）调节环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白（CREB）信号通路对糖氧剥夺/复氧（OGD/R）诱导的神经元损伤的影响。方法 将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Eto最佳干预浓度;EdU、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;ELISA法检测细胞中cAMP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;全自动生化分析仪检测细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平;Western blot方法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著降低,凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著升高（P<0.05）;与模型组比...     

JNK通路在低频脉冲电磁场促进牙周膜干细胞成骨分化的作用研究

目的：通过JNK特异性抑制剂SP600125干预JNK信号通路,探究JNK通路是否参与低频脉冲电磁场(LPEMF)诱导人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的成骨分化。方法：LPEMF(15HZ、0-3mT、1h/每隔12h)体外辐照hPDLSCs,通过 qRT-PCR检测细胞内Runt 相关转录因子 2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)等成骨相关基因表达量,来确定LPEMF诱导hPDLSCs成骨分化的能力、并筛选适宜的磁场作用强度;通过Western-blotting检测LPEMF刺激下胞内JNK蛋白和p-JNK蛋白的表达量,以及使用不同浓度SP600125抑制剂干预后细胞内成骨基因表达量的变化,来确定JNK通路在PEMF促进hPDLSCs成骨分化过程中是否发挥作用。结果：15Hz、2.5mT的LPEMF辐照hPDLSCs时,Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因表达量高于其他磁场强度分组(P ＜ 0.05);LPEMF刺激下明显促进了细胞内JNK蛋白和p-JNK蛋白表达量(P ＜ 0.05);JNK通路抑制后细胞内成骨相关基因表达量降低,且随着SP600125抑制剂浓度的升高对成骨基因表达的抑制效果更明显(P ＜ 0.05)结论：LPEMF物理刺激部分激活了hPDLSCs内JNK通路参与诱导成骨分化。     

Low-frequency pulsed electromagnetic fields significantly improve time of closure and proliferation of human tendon fibroblasts

Background

The promotion of the healing process following musculoskeletal injuries comprises growth factor signalling, migration, proliferation and apoptosis of cells. If these processes could be modulated, the healing of tendon tissue may be markedly enhanced. Here, we report the use of the Somagen™ device, which is certified for medical use according to European laws. It generates low-frequency pulsed electromagnetic fields that trigger effects of a nature that are yet to be determined.

Methods

A 1.5-cm wide, linear scrape was introduced into patellar tendon fibroblast cultures (N = 5 donors). Treatment was carried out every second day. The regimen was applied three times in total with 30 minutes comprising pulsed electromagnetic field packages with two fundamental frequencies (10 minutes of 33 Hz, 20 minutes of 7.8 Hz). Control cells remained untreated. All samples were analyzed for gap closure time, proliferation and apoptosis one week after induction of the scrape wound.

Results

The mean time for bridging the gap in the nontreated cells was 5.05 ± 0.33 days, and in treated cells, it took 3.35 ± 0.38 days (P <0.001). For cell cultures with scrape wounds, a mean value for BrdU incorporation of OD = 0.70 ± 0.16 was found. Whereas low-frequency pulsed electromagnetic fields treated samples showed OD = 1.58 ± 0.24 (P <0.001). However, the percentage of apoptotic cells did not differ between the two groups.

Conclusions

Our data demonstrate that low-frequency pulsed electromagnetic fields emitted by the Somagen™ device influences the in vitro wound healing of patellar tendon fibroblasts and, therefore, possibly increases wound healing potential.     

转染LKB1基因乳腺癌细胞与胚胎发育信号通路及cAMP/PKA通路的关系

 目的 探讨抑癌基因LKB1与胚胎发育(Sonic Hedgehog,SHH)信号通路、cAMP/PKA信号通路之间的相互关系。方法 抑癌基因LKB1转染人乳腺癌细胞MDA MB 231,分MDA MB 231组(231组)和转染LKB1基因的MDA MB 231(LKB1组)两组,每组分别采用0、 5×10-6、1×10-5、2×10-5mol/L等4种浓度的SHH信号通路抑制剂环靶明(cyclopamine)作用于细胞,各小组细胞分别用RT PCR法和Western blot法检测SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA表达水平和蛋白表达水平,用cAMP、PKA试剂盒检测cAMP、PKA数值水平。 结果 LKB1组的细胞通过不同剂量环靶明抑制后,SHH信号通路相关基因SHH、Smo的mRNA和蛋白表达水平相应较231组明显抑制,且与环靶明剂量呈正相关,抑制效果在环靶明浓度为10×10-6mol/L时最明显,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,抑制效果保持不变。231组和LKB1组中细胞的PKA和cAMP数值均随环靶明浓度增加而增高,至10×10-6mol/L时达到最高,继续增加环靶明浓度到20×10-6mol/L,两组中的PKA和cAMP数值保持不变。在相同环靶明浓度下,LKB1组中PKA和cAMP数值高于231组中相应数值。结论 抑癌基因LKB1协同环靶明抑制乳腺癌MDA MB 231细胞的SHH信号通路的同时亦协同增加cAMP/PKA信号通路的表达,且在环靶明浓度为10×10-6mol/L时效果最明显;推测存在LKB1 SHH cAMP/PKA通路。     

NIPA2通过JAK/STAT信号通路对高糖诱导的成骨细胞凋亡的调控作用及其机制

目的：探讨普瑞德-威利/安格曼综合征区域蛋白2（NIPA2）对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法：将成骨细胞MC3T3-E1采用26 nmol·L^-1高糖处理24 h,将细胞分为HG+si-con组（转染si-con）、HG+si-NIPA2组（转染si-NIPA2）、HG+si-NIPA2+DMSO组（转染si-NIPA2后再用DMSO处理）和HG+si-NIPA2+AG490组（转染si-NIPA2后再用AG490处理）,另设对照组。采用脂质体法转染MC3T3-E1细胞,再用26 nmol·L^-1高糖处理;采用qRT-PCR法检测MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中NIPA2、P21、Cleavedcaspase-3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与对照组比较,HG组MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。敲减NIPA2后,与HG+si-con组比较,HG+si-NIPA2组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,MC3T3-E1细胞在48和72 h时细胞增殖活性明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,JAK/STAT信号通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达水平明显升高（P<0.01）。与HG+si-NIPA2+DMSO组比较,HG+si-NIPA2+AG490组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,在48和72 h时细胞增殖活性明显升高（P<0.01）,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）。结论：NIPA2对高糖诱导的成骨细胞增殖和凋亡具有调控作用,其调控机制与JAK/STAT信号通路有关。     

低频脉冲磁场对大鼠学习与记忆、EEG及脑组织形态学的影响

目的：研究低频弱脉冲磁场（LFPMF）对大鼠学习和记忆、脑电图（EEG）及脑组织形态学的影响。方法：选用雄性Sprague Dawley（SD）大鼠36只,随机分为对照组（A组）和磁场辐射组（B组）,每组各18只;B组施加低频弱脉冲磁场（频率15Hz,平均场强0．1mT）30d,1次／d,45min／次;两组均采用Morris水迷宫方法测试逃避潜伏期;用光镜和电镜进行形态学观察;RM-600八导脑电图仪检测脑电图。结果：第1次辐射24h后．B组大鼠行为改变明显,逃避潜伏期明显延长,差异有统计学意义（P〈0．05）;随着时间延长,两组之间的差别逐渐减少,无统计学意义（P〉0．05）;脑电图显示,B组大鼠的频率和波幅均低于A组（P〈0．05）;其脑组织形态学存在异常改变。结论：采用低频弱脉冲磁场长时程辐射,应充分考虑其负面影响．     

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的 探讨原花青素B2（PCB2）是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯（CYP）导致的神经元氧化损伤。方 法 原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元,将细胞随机分成5组：正常对照组;PCB2处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h）;CYP暴露组（将50 μmol/L的CYP与细胞共培养24 h）;PCB2预处理组（将5 μg/mL的PCB2 与细胞预处理30 min后加入CYP 50 μmol/L共培养24 h）;LY294002处理组（先将20 μmol/L的 LY294002与细胞预处理30 min,然后加入PCB2预处理30 min,后与CYP共培养24 h）。采用CCK-8分析各组细胞活性,采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平,通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化,采用JC-1检测线粒体膜电位异常,利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果 CYP暴露降低细胞活性（P<0.001）,引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征,导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率（P=0.006）,改善细胞核形态异常,逆转CYP导致的线粒体膜电位下降,减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位,Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调（P<0.001）。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用（P<0.05）。结论 PCB2通过激活P13K/Akt信号通路,调控Nrf2/ARE通路,减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。     

松郁安神方对失眠大鼠海马cAMP/PKA信号通路的影响

目的探讨松郁安神方对失眠大鼠海马5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)介导的环磷酸腺苷(cAMP)信号通路的影响,明确其作用靶点。方法50只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、松郁安神方低剂量组、松郁安神方高剂量组和丁螺环酮组,每组10只。除对照组外,其余4组采用慢性夹尾刺激和腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)建立肝郁失眠大鼠模型。造模成功后,除正常组和模型组外,松郁安神方低剂量组(8.5 g/kg)、松郁安神方高剂量组(17 g/kg)和丁螺环酮组(2.0 mg/kg)按相应剂量灌胃,1次/d,连续14 d。模型组和对照组以等量生理盐水灌胃,频次、时间同前。给药期间,观察大鼠一般状态;给药结束后,观察大鼠体质量、敞箱实验变化,检测各组5-HT1AR及cAMP、蛋白激酶A(PKA)基因和蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠敞箱实验中央格停留时间、修饰次数、大便颗粒数上升(P<0.05),海马5-HT1AR、cAMP、PKA mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。不同剂量松郁安神方干预后,和模型组相比,松郁安神方高剂量组敞箱实验中央格停留时间、修饰次数、粪便颗粒数均减少,5-HT1AR、cAMP、PKA mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);松郁安神方低剂量组敞箱实验中央格停留时间、修饰次数、粪便颗粒数减少,5-HT1AR、PKA和cAMP mRNA及蛋白表达上调(P<0.05);高剂量组各项指标与丁螺环酮组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论松郁安神方改善肝郁失眠大鼠睡眠的机制可能是通过海马5-HT1AR介导的cAMP信号通路发挥作用。     

基于Rho/Rho-kinase信号通路探讨丙泊酚减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的效果

目的 基于Rho/Rho-kinase信号通路探讨丙泊酚减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的效果.方法 SD大鼠100只分成:对照组、模型组、丙泊酚低、中、高剂量组(20.0、40.0、80.0 mg/kg),模型组、丙泊酚低、中、高剂量组建立脑缺血再灌注损伤模型,建模成功后,丙泊酚低、中、高剂量组给予相应剂量丙泊酚灌胃,对照组...     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨硫氢化钠对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜损伤的影响

目的 基于Nrf2/ARE信号通路探讨硫氢化钠对溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠黏膜损伤的影响。方法将27只UC大鼠随机分为模型组、阳性对照组及硫氢化钠组,每组9只,另取8只正常大鼠为对照组。阳性对照组大鼠于模型复制成功后第3天给予柳氮磺胺吡啶（SASP）混悬溶液0.5 g/（kg·d）灌胃给药,硫氢化钠组大鼠于同时间腹腔注射1 mL硫氢化钠溶液（100μmol/L,1次/d,连续7 d）,模型组和对照组于同时间腹腔注射等量生理盐水,观察大鼠一般情况。酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红染色观察大鼠结肠组织病理学变化;Western blotting检测大鼠结肠组织中核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路蛋白水平的变化。结果 与对照组比较,模型组、阳性对照组及硫氢化钠组大鼠血清IL-8水平、TNF-α水平升高（P <0.05）;与模型组比较,阳性对照组和硫氢化钠组大鼠血清IL-8水平、TNF-α水平降低（P <0.05）。模型组、阳性对照组及硫氢化钠大鼠结肠黏膜组织CMDI评分比较,差异有统计学...