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相似文献
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1.
目的 构建人GW112基因的逆转录病毒载体,并通过病毒介导其在人胃癌SGC-7901细胞的稳定表达.方法 采用DNA 重组技术构建并鉴定重组逆转录病毒载体pLEGFP-N1-GW112;以脂质体PT67细胞包装病毒,经病毒感染的SGC-7901细胞通过G418筛选及荧光定量 PCR 鉴定,建立GW112稳定过表达SGC-7901细胞株.结果 成功构建了pLEGFP-N1-GW112逆转录病毒表达载体,经病毒包装的重组转录病毒成功感染SGC-7901细胞,Real-Time PCR结果显示实验组中GW112基因是对照组细胞中的4.2倍.结论 逆转录病毒介导的GW112基因在胃癌SGC-7901细胞获得了稳定过表达,为进一步研究GW112在胃癌中的功能奠定了良好基础.  相似文献   

2.
目的 探讨RGS22对人胃癌SGC-7901细胞在裸鼠体内转移的影响.方法 将人RGS22基因克隆到逆转录病毒表达质粒LZRsPBMN中,构建重组质粒LZR-RGS22.以GFP为对照构建LZR-GFP.转染人胃癌SGC-7901细胞,Western blot法检测不同细胞中RGS22的表达.设计不同针对RGS22的RNAi片段和对照RNAi,将其构建入pSilencer2.1-U6 neo siRNA载体中,转染SGC-7901-LZR-RGS22细胞.RT-PCR法检测不同细胞中RGS22的表达.将不同组细胞注射于裸鼠腹腔内,观察不同肿瘤细胞的转移情况.结果 SGC-7901-LZR-RGS22细胞中146、112和76 ku片段RGS22蛋白表达较对照SGC-7901-LZR-GFP细胞表达均明显提高.RNAi 484片段和3313片段对RGS22的表达均有抑制作用.在裸鼠肿瘤转移实验中,RGS22能抑制SGC-7901肿瘤细胞向远处器官的转移,当其表达下调后,这种抑制效应又变弱.结论 RGS22能够抑制人胃癌SGC-7901在裸鼠中的转移.  相似文献   

3.
目的探讨RGS22对人胃癌SGC-7901细胞在裸鼠体内转移的影响。方法将人RGS22基因克隆到逆转录病毒表达质粒LZRsPBMN中,构建重组质粒LZR-RGS22。以GFP为对照构建LZR-GFP。转染人胃癌SGC-7901细胞,Western blot法检测不同细胞中RGS22的表达。设计不同针对RGS22的RNAi片段和对照RNAi,将其构建入pSilenc-er2.1-U6 neo siRNA载体中,转染SGC-7901-LZR-RGS22细胞。RT-PCR法检测不同细胞中RGS22的表达。将不同组细胞注射于裸鼠腹腔内,观察不同肿瘤细胞的转移情况。结果 SGC-7901-LZR-RGS22细胞中146、112和76 ku片段RGS22蛋白表达较对照SGC-7901-LZR-GFP细胞表达均明显提高。RNAi 484片段和3313片段对RGS22的表达均有抑制作用。在裸鼠肿瘤转移实验中,RGS22能抑制SGC-7901肿瘤细胞向远处器官的转移,当其表达下调后,这种抑制效应又变弱。结论 RGS22能够抑制人胃癌SGC-7901在裸鼠中的转移。  相似文献   

4.
魏伟  王智  汪玲  肖军 《医学新知杂志》2013,(6):410-413,F0004
目的构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响。方法利用慢病毒表达体系pHelperl.0/pHelper2.0/pGCL—GFP,成功构建针对Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA—Bmi-1,适时定量PCR(real—timePCR)检测稳定转染后胃癌细胞SGC-7901中Bmi-1mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTr法检测其增殖能力。结果稳定转染vshRNA—Bmi-1后SGC-7901细胞Bmi-1mRNA表达明显下降,总抑制效率达85%;癌细胞增殖减慢,凋亡率明显增加。结论构建针对Bmi-1基因的RNAi表达载体,成功转染胃癌细胞SGC-7901,可促进癌细胞凋亡,抑制其增殖能力。  相似文献   

5.
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术在体外抑制COX-2基因表达,探讨RNAi诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的可能途径.方法 设计靶向COX-2基因的小干扰RNA(siRNA),构建重组表达质粒pTZU6+1-siRNA-COX-2,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNAi,用RT-PCR、免疫细胞化学、末端标记细胞凋亡检测法(TUNEL)和Western Blot检测COX-2基因表达、细胞凋亡和凋亡相关基因的表达.结果 重组质粒pTZU6+1-siRNA-COX-2导入SGC-7901细胞株后,COX-2表达明显下调,细胞出现凋亡(P<0.05),Caspase-9和Caspase-3表达明显上调.结论 RNA干扰明显抑制了靶基因COX-2的表达,并可能通过激活Caspase途径诱导SGC-7901细胞凋亡.  相似文献   

6.
陈亦明  徐鲁白  王继生  周斌  余震 《浙江医学》2010,32(10):1509-1510,1513
目的 通过观察康莱特对胃癌SGC-7901细胞株生长以及对过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPAR γ)mRNA表达的影响,探讨康莱特抑制SGC-7901细胞增殖的可能机制.方法 用不同浓度的康莱特处理胃癌SGC-7901细胞,CCK-8法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌SGC-7901细胞中PPARγ mRNA表达的变化.结果 康莱特抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;作用48h后明显抑制胃癌SGC-7901细胞PPAR γ基因表达,呈浓度依赖性.结论 康莱特可能通过下调PPAR γ mRNA的表达来抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖.  相似文献   

7.
目的利用反义核酸技术封闭胃癌细胞的谷氨酰胺酶(glutaminase,GA)基因,观察反义GAcDNA对胃癌细胞恶性增殖能力的影响。方法构建含有GAcDNA片段的反义真核表达载体pcDNA3.0/GA,经脂质体介导转入胃癌细胞SGC-7901(命名为SGC-7901^GA),并对胃癌细胞生长曲线、细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达、软琼脂克隆形成试验进行观察。结果与对照组比较,8GC-7901^GA在各时相点的细胞生长数目显著性降低(P〈0.05),PCNA表达较对照组显著下降,在软琼脂上克隆形成数减少。提示SGC-7901^GA生长速度减慢,增殖活性明显减弱。结论通过特异性抑制GA基因的表达,反义GAcDNA对胃癌细胞恶性增殖能力有显著抑制作用。  相似文献   

8.
观察大蒜汁、新鲜芦笋汁对体外培养的胃癌细胞SGC-7901的增殖抑制作用,探讨其可能的作用机制.传代培养胃癌细胞SGC-7901,采用MTT法检测大蒜汁、新鲜芦笋汁作用后细胞的增殖抑制率.结果:浓度从10-50 μl/ml的大蒜汁和新鲜芦笋汁对SGC-7901细胞都有抑制增生作用,并随着药物浓度的升高,作用时间的延长,对SGC-7901细胞的抑制率也升高.结论:大蒜汁、新鲜芦笋汁能明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖.  相似文献   

9.
目的:观察胃上皮细胞胃泌素、PCNA表达及RNA干扰对胃泌素表达的抑制.方法:应用免疫组织化学方法检测胃癌细胞BGC-823、SGC-7901及胃黏膜上皮细胞Ges-1胃泌素和PCNA的表达,应用shRNA抑制BGC-823细胞胃泌素的表达,免疫组织化学方法检测胃泌素表达的抑制效果.结果:BGC-823细胞、SGC-7901细胞和Ges-1细胞胃泌素阳性细胞率分别为(56.98±10.09)%、(18.22±4.61)%和(21.13±8.29)%,PCNA阳性细胞积分分别为1.72±0.10、1.56±0.11和1.29±0.07,BGC-823细胞胃泌素阳性细胞率和PCNA阳性细胞积分均高于SGC7901细胞和Ges-1细胞(P<0.05).且胃泌素阳性细胞率与PCNA阳性细胞积分呈正相关(r=0.849,P<0.01).经shRNA处理的BGC-823细胞胃泌素表达水平降低(P<0.05).结论:胃泌素、PCNA表达与胃癌细胞的恶性程度有一定关系.shRNA可有效抑制胃癌细胞胃泌素的表达.  相似文献   

10.
榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株PPARγ基因的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的通过观察榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株生长以及对过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)mRNA表达的影响,探讨榄香烯抑制SGC-7901细胞增殖的可能机制。方法用不同浓度的榄香烯处理胃癌SGC-7901细胞,CCK-8法观察细胞增殖抑制作用;RT—PCR法检测胃癌SGC-7901细胞中PPARγ mRNA表达的变化。结果榄香烯抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;作用48h后明显抑制胃癌SGC-7901细胞PPARγ基因表达,呈浓度依赖性。结论榄香烯可能通过下调PPARγ mRNA表达抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖。  相似文献   

11.
12.
谯敏  向廷秀  王丕龙  黄爱龙 《医学争鸣》2006,27(14):1318-1321
目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在体外抑制COX-2表达,研究其抑制三种不同分化程度的胃癌细胞(MKN-28,SGC-7901,BGC-823)的可能性,探讨RNAi抑制胃癌生长与胃癌细胞分化程度的相关性. 方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2并导入胃癌细胞株,体外诱导RNAi,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测COX-2基因表达变化,MTT法检测细胞活力,原位末端标记(TUNEL)及透射电镜检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的改变. 结果:pTZU6 1-siRNA-COX-2质粒导入细胞后,SGC-7901和BGC-823中COX-2表达明显下调,细胞生长被抑制,并出现特征性的细胞凋亡,同时有Bax蛋白上调和Bcl-2蛋白下调. 对照组则无明显变化. 结论:RNAi显著抑制胃癌细胞生长,可能与下调COX-2基因表达和诱导细胞凋亡有关,其对中分化胃癌细胞的抑制作用最为显著,提示RNAi的作用可能依赖于胃癌细胞的分化程度.  相似文献   

13.
目的探讨Beclin1基因对β-榄香烯抗人胃癌SGC-7901细胞增殖及自噬诱导的影响。方法用前期实验构建成功的GV112-Beclin1-shRNA1(short hairpin RNA,短发夹RNA)慢病毒载体感染人胃癌SGC-7901细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测β-榄香烯对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及沉默Beclin1基因后对β-榄香烯抗增殖能力的影响。免疫蛋白印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,评价β-榄香烯作用SGC-7901后的自噬水平和Beclin1基因沉默对β-榄香烯诱导自噬的影响。结果 MTT法显示,β-榄香烯能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用随浓度的增加而递增(浓度为20、50、100μg/mL比0μg/mL时,抑制率为21.5%、31.7%、37.4%比0,P<0.05);沉默Beclin1基因后β-榄香烯抑制胃癌SGC-7901细胞抑制率增加(42.3%比36.1%,P<0.05)。Western blot法显示,β-榄香烯能诱导SGC-7901细胞发生保护性自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,P62蛋白表达下降,沉默Beclin1基因可抑制β-榄香烯对SGC-7901细胞保护性自噬的增强,LC3-Ⅱ蛋白表达水平下降,P62蛋白表达增加。结论β-榄香烯可诱导胃癌SGC-7901细胞发生保护性自噬,下调Beclin1基因有助于降低保护性自噬的发生,从而增强β-榄香烯的抗癌效果。  相似文献   

14.
目的:构建携带亚麻苦甙水解酶(lis)基因的重组真核表达载体,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,导入SGC-7901细胞中表达。方法:提取木薯总RNA,PCR扩增lis目的基因,将该基因全长定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒载体。用电穿孔法转染体外培养的SGC-7901细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察lis-EGFP融合蛋白在细胞中的表达。用PCR检测lis转录水平的表达,用Western blot法验证lis蛋白水平的表达。结果:酶切和测序证实pEGFP-N1-lis重组质粒构建正确,重组质粒载体在SGC-7901细胞中获得了表达,表达的融合蛋白具有lis和EGFP的双重活性。结论:通过基因克隆方法成功地构建了pEGFP-N1-lis重组质粒载体,并且在SGC-790细胞中稳定表达。  相似文献   

15.
目的:利用RNA干扰技术,研究靶向鸟苷酰环化酶C(Guanylyl cyclaseC,GC-C)的小干扰RNA(siRNA)在体外对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法:利用pSilencerTM4.1-CMV neo通过siRNA表达载体法制备GC-CsiRNA,将GC-CsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞,流式细胞检测技术及原位末端标记(TUNEL)法检测转染前后细胞的凋亡。结果:流式细胞仪结果分析示转染组平均凋亡率为5.48%±0.10%(48h)和5.63%±0.11%(72h),较对照组0.50%±0.09%明显增加(P<0.05)。TUNEL检测见特有的凋亡征象,对照组则无明显变化。结论:沉默鸟苷酰环化酶C基因可促进胃癌细胞凋亡,可能为临床探索胃癌生物治疗提供新的靶点。  相似文献   

16.
王鹏飞  张洁  毛振彪 《南通医学院学报》2010,23(1):43-45,48,F0003
目的:研究靶向鸟苷酰环化酶C(Guanylyl cyclaseC,GC-C)的小干扰RNA(siRNA)对人胃癌SGC-7901细胞体外生长能力的影响。方法:利用pSilencer TM4.1-CMVneo通过siRNA表达载体法制备GC-CsiRNA。将GC-CsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光观察转染前后胃癌细胞GC-C基因的表达变化,黏附实验观察转染前后胃癌细胞黏附能力。结果:构建的GC-CsiRNA测序鉴定与设计完全相符。GC-CsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,明显抑制GC-C基因的表达。转染后,GC-CmRNA和蛋白表达分别抑制了66.7%和75.8%,细胞黏附能力较对照组减弱(P〈0.05)。结论:靶向GC-C的siRNA可明显下调靶基因GC-C的表达,在体外抑制胃癌SGC-7901细胞的黏附,提示GC-C基因与胃癌的发生、发展有密切的关系。  相似文献   

17.
Objective To investigate effect of let-7a gene over-expression on apoptosis of gastric cancer cell lines SGC-7901. Methods The stablelet-7a gene over-expressing SGC-7901 cells, SGC-7901/let-7a cells, were established using shRNA lentiviral vector methods. Real-time RT-PCR analysis was used to evaluate the expression level of let-7a mRNA. Cells apoptosis was assessed by flow cytometry. Results RT-PCR analysis revealedlet-7a expression in SGC-7901/let-7a cells was significantly increased. Cellular apoptosis assay showed that over-expression oflet-7a could increase apoptosis of SGC-7901 cells (P=0.002). Conclusion Up-regulatinglet-7a expression promoted apoptosis in SGC-7901 cells.  相似文献   

18.
目的 研究靶向蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶2(COX-2)短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用.方法 构建腺病毒载体pGSadeno-Akt1+COX-2(rAd5-A+C),体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后,噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞术评价转染后胃癌细胞的增殖活性.裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-A+C对SGC-7901生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术检测肿瘤细胞的原位凋亡.结果构建的rAd5-A+C重组腺病毒载体转染SGC-7901后,胃癌细胞的增殖活性明显被抑制.细胞周期分析显示对照组和空载组在G0/G1期,S期和G2/M期的细胞数占细胞总数分别为49.8%、35.2%、15.0%和50.8%、36.5%、12.7%;而治疗组在G0/G1期、s期和G2/M期的细胞数占细胞总数的68.1%、21.8%和10.1%.裸鼠皮下荷瘤模型显示rAd5-A+C可抑制肿瘤的生长和诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的Aktl和COX-2 shRNA可抑制人胃癌细胞的生长,这可能为胃癌靶向性联合基因治疗提供了新的策略.  相似文献   

19.
目的检测nucleostemin(NS)基因在胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞中的表达情况。方法21例胃癌手术标本,提取胃癌组织和胃癌SGC-7901细胞株总RNA,用半定量RT-PCR方法检测胃癌组织和SGC-7901中NS基因的表达情况。用脂质体法将PCDNA4/C-NS-silencer质粒及空载体PCDNA4/C-vector质粒分别转染SGC-7901细胞,分别命名为silencer组和vector组,未转染的SGC-7901细胞记为normal组,RT-PCR方法检测NS基因表达量。用MTT法检测3组细胞的生长增殖情况。结果胃癌组织和SGC-7901细胞中皆有NS基因表达。定性分析显示,与vector组和normal组比较,silencer组细胞趋于分化,NS基因表达量下降。细胞培养24 h、48 h、72 h后,si-lencer组和vector组细胞增殖抑制率间差别均有统计学意义(P<0.01)。结论胃癌组织和SGC-7901细胞中有NS基因表达;NS基因特异性RNA干扰使NS基因表达量下降,抑制SGC-7901细胞株体外增殖。  相似文献   

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