微RNA对K562细胞基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片技术,研究微RNA（miR-18la）对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 针对miR-18la成熟序列设计并合成miR-181a RNA duplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用Agilent HumanlA寡核苷酸基因芯片,检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果 从20173个候选基因中,筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有59个,主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等;表达下调的有169个,主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论 微RNA转染K562细胞48h后,影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关,同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。     

微小RNA在白血病中的作用及治疗策略

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类由19～25个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子RNA.其在白血病中扮演着癌基因和抑癌基因的角色,针对miRNA在自血病中的不同作用,可采取相应的治疗策略.对于在白血病中高表达的具有癌基因功能的miRNA,可采用反义寡核苷酸等技术下调或抑制miRNA:而对于在白血病中显...     

manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用

探讨manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用,为其治疗白血病提供理论依据。方法：实验设阴性对照组（K562加含10%胎牛血清的IMDM培养液）和manumycin组（终浓度分别为2、4、8及16 μmol/L）,分别作用24、48和72 h,镜下观察manumycin作用后K562细胞的生长情况;MTT法检测K562细胞的生长抑制率;24 h 后,用Western blotting方法检测对照组及4、 16 μmol/Lmanumycin组K562细胞中survivin蛋白的表达。结果：镜下观察显示,对照组细胞生长状态良好,密度均一,大小一致,轮廓清晰,折光性强。与对照组比较,8 μmol/L manumycin组细胞明显变小,密度稀疏,大小不均一,细胞轮廓欠清晰,折光性差;16 μmol/L  manumycin组细胞密度明显减少,大小不等,轮廓不清,有细胞碎片。MTT结果显示,随着manumycin浓度增加和作用时间延长,生长抑制率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,且存在时间-剂量-效应关系。Western blotting结果显示,与对照组比较,16 μmol/L manumycin作用K562细胞24 h以后细胞内survivin蛋白含量下降。结论：manumycin通过下调K562细胞survivin蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,从而达到治疗白血病的目的。     

Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过脂质体将化学合成针对Bmi-1基因的siRNA转染K562细胞,采用MTT法观察Bmi-1 siRNA对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测Bmi-1 siRNA对K562细胞中Bmi-1和P16蛋白表达的影响。结果Bmi-1 siRNA能明显延长K562细胞的倍增时间、G1期比例增加;下调Bmi-1表达的同时上调P16蛋白表达。结论体外化学合成的Bmi-1 siRNA对K562细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,下调Bmi-1蛋白表达的同时上调P16蛋白表达。     

Liproxstatin-1对K562白血病细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的：研究Liproxstatin-1(Lip-1)对K562白血病细胞株的抑制作用。方法：采用CCK-8法检测不同浓度Lip-1处理前后的细胞活力。将未经任何处理的K562细胞作为对照组,10μmol/L Lip-1处理24 h的K562细胞作为低浓度组,20μmol/L Lip-1处理24 h的K562细胞作为高浓度组。用二代测序法分析各组转录组表达差异。分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blotting法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(CDKN1A)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)基因及蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期时相,微量法测定细胞内谷氨酸含量。将K562细胞在含或不含谷氨酰胺培养基中培养,用细胞计数法检测细胞倍增时间（DT）变化。结果：Lip-1浓度依赖性抑制K562白血病细胞增殖。与对照组相比,低、高浓度组CDKN1A、SLC7A11基因及蛋白表达水平增高（P<0.05）,高浓度组细胞内谷氨酸含量下降（P<0.05）,低浓度组发生G1/S阻滞,而高浓度组同时存在G1/S和G2/M阻滞。K562细胞在不含谷氨酰胺培...     

三氧化二砷对乳腺癌细胞株的抑制作用及其机制探讨

目的 探讨三氧化二砷(arsenous oxide,As2O3)对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用及其机制.方法 对乳腺癌MCF-7细胞株进行培养传代.As2O3作用于细胞一定时间后利用流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin基因的表达;电镜观察乳腺癌细胞凋亡情况.结果 As2O3对乳腺癌细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主;凋亡抑制因子survivin基因在乳腺癌细胞中表达;乳腺癌细胞经As2O3作用后,能抑制survivin基因的表达.结论 As2O3可能通过抑制凋亡抑制因子survivin基因的表达,促进细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用.     

RN181基因对肿瘤的抑制作用及其进展

原发性肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,我国是肝癌发病大国,其死亡率较高。目前外科手术切除仍然是治疗肝癌最主要的方式,但术后往往发生复发,且对化疗效果欠佳,长期发展易发生远处转移。然而,对于晚期发生转移的肝癌,目前尚无有效的治疗方法。RN181基因是一种全新的抑癌基因,然而,目前对RN181报道甚少,且该基因对肿瘤的抑制作用尚不明确;因此,本文旨在对RN181基因对肿瘤的抑制作用进行综述,为肝癌及与该基因相关的其他肿瘤的靶向治疗提供新的方向。     

羟基磷灰石微晶体对人白血病HL—60细胞株的生长抑制作用

采用体外细胞培养和ＭＴＴ测定等方法，研究羟基磷灰石微晶体（ＨＡＰ－Ｓｏｌ）对人白血病细胞株（ＨＬ－６０）的生长抑制作用。将不同浓度的ＨＡＰ－Ｓｏｌ（０．００１－０．０２ｍｇ／ｍｌ）分别加入ＨＬ－６０细胞（１０＾４／孔），置３７℃，５％ＣＯ２培养４８小时。结果显示：①不同浓度ＨＡＰ－Ｓｏｌ对ＨＬ－６０细胞集落形成可产生影响：在倒置显微镜下，可见全部测定孔细胞集落形成均较对照孔低下，且呈剂量依赖关系，     

蝎毒对人白血病细胞株的抑制作用

目的 :采用 3种人白血病细胞株 (人B淋巴细胞株Raji、人早幼粒白血病细胞株HL - 6 0、人红白血病细胞株K5 6 2 )作为实验模型 ,观察东亚钳蝎毒对人白血病细胞的生长抑制作用。方法 :台盼蓝排染法细胞计数观察细胞生长、MTT法检测蝎毒对细胞的毒性、流式细胞术分析凋亡细胞。结果 :蝎毒对Raji、HL - 6 0、K5 6 2 3种人白血病细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,并且其作用强度在一定范围内呈现浓度和时间依赖性。结论 :蝎毒对人白血病细胞具有抑制作用     

RNA干扰对HL-60白血病细胞株WT1基因表达的抑制作用

目的 研究RNA干扰(RNA interference, RNAi) 对白血病细胞株WT1 基因表达的抑制作用.探讨WT1小干扰RNA在白血病治疗中的应用.方法 设计制备多对针对WT1基因的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),转染HL-60人白血病细胞株,采用RT-PCR法测定WT1 mRNA 的表达,Western blot 测定WT1 蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 siRNA 后WT1 mRNA与蛋白的表达强度分别为(23.62±1.28)%和(23.20±1.04)%,和对照组比较有显著性差异(P＜0.05);在WT1表达受到抑制的同时,HL-60细胞的凋亡率为(13.72 ±1.33)%,和对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 siRNA能有效抑制HL-60细胞中WT1基因的表达,增加细胞凋亡.     

依硫磷酸对人慢性髓细胞白血病K562细胞系增殖的抑制作用

目的观察依硫磷酸对人慢性髓细胞白血病K562细胞系增殖的抑制作用。方法将依硫磷酸（粉末）以1640培养液稀释成0.2mg/ml、0.5mg/ml、0.75mg/ml、1.0mg/ml、1.6mg/ml、3.2mg/ml共6个浓度组,分别处理增殖期人慢性髓细胞白血病K562细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度（IC50）。结果依硫磷酸对K562细胞增殖具有抑制作用,细胞倍增时间为48h,并且具有时间和剂量依赖性。在给药48h〉0.75mg/ml浓度的依硫磷酸对K562细胞增殖具有抑制作用（P〈0.05）,而3.2mg/ml浓度的依硫磷酸与K562细胞培养72h后对其增殖抑制作用最强,抑制率为91%。结论依硫磷酸对K562细胞增殖具有抑制作用,为临床应用依硫磷酸治疗慢性髓细胞白血病提供了实验基础。     

裸鼠高致瘤性人白血病细胞系肿瘤相关基因的表达

目的：探索K562和K562－n细胞在裸鼠体内致瘤性不同的分子生物学机制。方法：应用基因芯片技术，检测K562细胞和K562－n细胞的差异表达基因。结果：K562－n细胞中表达上调的与白血病及其他肿瘤发生、发展相关的基因包括加dek基因和DP1基因（结肠直肠多发性息肉病位点基因）。许多肿瘤抑制基因或包含潜在的肿瘤抑制基因的序列在K562－n细胞中表达下降，如染色体12p13序列（U47924）.锌指蛋白127－Xp基因和锌指蛋白198基因,prohibitin基因、DNF15s2基因、hMSH2基因（遗传性非息肉性结肠癌基因，为碱基错配修复基因）、环孢素受体基因。结论：K562－n细胞的裸鼠高致瘤特性与一系列癌基因的表达上调和抑癌基因的表达下调有关。     

痰热清注射液对慢性髓系白血病K562细胞增殖的抑制作用

目的观察痰热清注射液对慢性髓系白血病K562细胞增殖的抑制作用。方法将痰热清注射液倍比稀释成1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128、1：256、1：512共9个浓度组,分别处理增殖期慢性髓系白血病K562细胞,镜下观察不同时间点各浓度组细胞生长情况,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制生长曲线,计算抑制率和半数抑制浓度（IC50）。结果痰热清注射液能明显抑制K562细胞增殖,细胞倍增时间为24h,1：2至1：8稀释浓度组的细胞毒性大,细胞基本死亡;抑制作用呈剂量和时间依赖性,IC50约为1：55稀释浓度。结论痰热清注射液对K562细胞具有抑制作用,这为临床应用痰热清注射液治疗血液肿瘤并发感染提供了实验基础。     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562胀亡和凋亡作用的研究

目的:探讨青蒿琥酯(Artesunate,ART)对人慢性粒细胞性白血病细胞株K562增殖抑制的影响.方法:采用MTT比色法检测青蒿琥酯对体外培养的K562细胞的生长抑制作用,光、电镜下观察青蒿琥酯作用后的K562细胞形态学变化特征,流式细胞仪检测在不同浓度、不同时间作用下青蒿琥酯诱导K562细胞的细胞胀亡率和凋亡率.结果:青蒿琥酯对K562细胞有明显的增殖抑制作用,24h、48h、72h的半数抑瘤浓度IC50(μg/ml)分别为65.17、31.63、10.51.青蒿琥酯主要引起K562细胞的胀亡和凋亡变化,但胀亡率与凋亡率尤明显差别.结论:青蒿琥酯主要通过胀亡和凋亡2种方式抑制K562细胞增殖,并呈明显量效时效关系.     

2-氨基甾体对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞增殖的抑制作用

目的 :观察 2 氨基甾体 (MPZ)对慢粒白血病细胞系K5 6 2细胞增殖的作用。方法 :采用形态观察、液体培养、集落培养及MTT实验检测MPZ对K5 6 2细胞增殖的影响 ,并观察其形态学变化。结果 :液体培养 6d后 ,10 - 8和10 - 5mol·L- 1 MPZ对K5 6 2细胞的抑制率分别为 4 6 %和 83%。集落培养 8d后 ,10 - 8和 10 - 5mol·L- 1 MPZ对K5 6 2细胞的抑制率分别为 5 2 %和 10 0 %。MTT实验检测表明 ,10 - 8和 10 - 5mol·L- 1 MPZ处理K5 6 2细胞 5d后其抑制率分别为2 9%和 88%。结论 :MPZ(10 - 8～ 10 - 5mol·L- 1 )能明显抑制K5 6 2细胞的增殖 ,其抑制率呈剂量依赖关系     

力达霉素抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用及其机制

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。