微RNA对K562细胞基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片技术，研究微RNA（miR-18la）对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法 针对miR-18la成熟序列设计并合成miR-181a RNA duplexes，采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用Agilent HumanlA寡核苷酸基因芯片，检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果 从20173个候选基因中，筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较，表达上调的基因有59个，主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等；表达下调的有169个，主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论 微RNA转染K562细胞48h后，影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关，同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。     

缩氨基硫脲衍生物JOH-1对K562细胞增殖的影响

目的探讨JOH-1对体外培养人白血病K562细胞株增殖的影响。方法以JOH-1为研究对象,采用细胞体外培养技术,MTT法和台盼蓝拒染法检测JOH-1对K562细胞株增殖抑制。结果不同浓度的JOH-1作用于K562细胞12、24、48h后对K562细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;生长曲线显示JOH-1使K562细胞的生长受到明显抑制。结论 JOH-1对体外培养人白血病K562细胞株的增殖有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。     

钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究

目的 研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制.方法 将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株.瑞氏染色观察细胞形态,台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法 检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclin B1和c-myc等的表达.结果 筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞,与空载体转染组及未处理对照组细胞相比,K562/Per2细胞体积缩小,但是分化不明显;台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力;流式细胞仪检测周期结果 K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05],凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05];电镜结果 显示染色质浓集、断裂,核固缩和凋亡小体;RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达,而抑制cyelin B1、c-myc基因mR-NA和蛋白的表达.结论 钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖,并诱导其发生凋亡,但对分化无明显作用.其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的.     

RbAp46基因修饰K562白血病细胞系的实验研究

目的建立RbAp46基因修饰的白血病细胞系。方法应用电穿孔法将RbAp46表达载体转染白血病细胞系K562，经G418筛选以获得单克隆，用PCR检测RbAp46整合，用台盼兰拒染法判定细胞活力，细胞计数判定细胞生长速率。结果得到RbAp46基因修饰的K562／RbAp46，并经PCR证实RbAp46整合，K562／RbAp46的生长速率要比对照组低2倍左右。结论RbAp46能够抑制K562的增殖。     

新型趋化因子对肿瘤细胞的影响

目的 探讨新型趋化因子CKLFSF8对人白血病细胞株增殖的影响。方法 RT—PCR检测CKLFSF8基因在细胞株K562中的表达；利用脂质体将CKLFSF8转染K562；倒置显微镜观察细胞生长，MTT法检测CKLFSF8基因转染前后肿瘤细胞增殖的变化。结果 细胞生长过程中可测到CKLFSF8表达；CKLFSF8转染对K562的增殖有抑制作用，与空白对照组和空质粒组有显著性差异（P〈0．05）；结论 CKLFSF8基因转染对人白血病细胞株K562的增殖有明显抑制作用，可望在肿瘤治疗中发挥重要作用。     

MicroRNA-221(miR-221)抑制p27~(Kip1)蛋白促进慢性粒细胞白血病的发生

目的探讨microRNA-221(miR-221)与慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leuklemia,CML)的相关性及其作用机制。方法采用荧光实时定量PCR(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测35例CML病人与25例对照组病人骨髓中miR-221的表达情况。K562细胞转染miR-221模拟物和miR-221抑制剂48 h,qRT-PCR法检测miR-221的表达。分别用MTT法检测转染后的K562细胞增生能力,利用流式细胞仪检测转染后K562细胞周期和凋亡。利用数据库预测miR-221的调节基因为p27~(Kip1)。qRT-PCR和Western blotting法检测miR-221对p27~(Kip1)的mRNA和蛋白的表达的影响。结果 CML病人组miR-221表达明显高于对照组。转染miR-221抑制剂组K562细胞凋亡比例显著升高,细胞周期阻滞于G2SM期,细胞增生能力明显受到抑制。而miR-221过表达则明显促进了K562细胞的增生和细胞周期进程。抑制miR-221表达后K562细胞中p27~(Kip1)蛋白表达显著升高,而当miR-221过表达后p27~(Kip1)表达也随之明显降低。结论 miR-221在CML病人的骨髓中高表达,并抑制下游p27~(Kip1)蛋白的表达从而促进白血病K562细胞增生,促进细胞进入细胞周期,可能是CML发生、发展的一个潜在靶点。     

WT1基因特异性siRNA对K562细胞表达及增殖的影响

目的:研究WT1基因特异性小干扰RNA (small RNA interference, siRNA)对K562细胞表达及增殖的影响,为白血病的基因治疗提供新的思路.方法:以慢性粒细胞白血病细胞系-K562为研究对象,化学合成并转染针对K562细胞WT1基因的siRNA,倒置显微镜观察细胞的生长状态及形态学改变;MTT法检测细胞增殖状态;半定量RT-PCR检测siRNA对WT1基因表达的抑制作用;流式细胞仪法检测K562细胞凋亡.结果:siRNA转染K562细胞后, 细胞生长受抑,增殖能力减弱,其增殖抑制作用于转染后48、72 h最明显, 增殖抑制率分别为50.6%和54.1%.半定量RT-PCR显示WT1mRNA表达水平明显低于对照组;WT1 siRNA转染48 h后有42.19 %的K562细胞发生凋亡.结论:WT1基因特异性siRNA可显著抑制K562细胞增殖,促进凋亡,为白血病的基因治疗提供了新的思路.     

胭脂树橙对白血病 K562 细胞凋亡及 PPARγ蛋白表达的影响

目的 探讨胭脂树橙在诱导白血病 K562 细胞凋亡过程中对 PPARγ蛋白表达的影响。方法 用胭脂树橙作用于 K562 细胞一定时间后,通过台盼蓝拒染法观察 K562 细胞生长曲线,MTT 法检测其对细胞的抑制率,Hoechst 33258 染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;采用 Western-blotting 技术从蛋白分子水平上检测胭脂树橙对 PPARγ蛋白表达的影响。结果 胭脂树橙显著抑制 K562 细胞的增殖并呈浓度依赖关系。电泳的结果显示一定浓度的胭脂树橙能够上调 PPARγ蛋白的表达,进而可能诱导 K562 细胞的凋亡。结论 PPARγ蛋白表达的上调可能是胭脂树橙抑制 K562 细胞增殖诱导凋亡的原因之一,其中,胭脂树橙具有 PPARγ非特异配体的作用。     

FOXO3a转录因子对自血病HL60细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:研究转录因子FOXO3a对急性粒细胞白血病HL60细胞株增殖、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:将FOXO3a表达质粒pcDNA3.1-FOXO3a及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出FOXO3a稳定表达细胞株.台盼蓝拒染法和MTT法检测HL60细胞增殖,流式细胞...     

H101腺病毒对K562白血病细胞的作用

目的 探讨E1B缺陷型腺病毒(H101)对K562白血病细胞的生长抑制作用.方法 选用不同浓度H101腺病毒,体外感染K562白血病细胞株,通过白血病细胞感染率、细胞生长曲线、台盼蓝蓝染细胞数、MTT法检测细胞抑制率等检测细胞的增殖受抑和细胞毒作用情况.结果 H101腺病毒转导K562细胞随浓度增加而有所增加, 但为很低的转染率; 诱导K562白血病细胞株死亡效率很低, 仅在高剂量组达到30%的死亡率; 对K562细胞的生长有一定的影响,与未转染组比较,随剂量加大, 生长受抑制程度逐渐明显, 高剂量组第4天为19.5%; MTT法测定细胞抑制率提示随剂量加大,对K562细胞抑制程度逐渐加大,高剂量组抑制率为22.7%.结论 E1B缺陷型腺病毒(H101)在体外人白血病细胞K562的生长有一定的抑制作用,但是杀伤作用不显著.     

羟基脲联合干扰素-α对K562细胞生长及凋亡相关基因表达的影响

目的 观察羟基脲（ＨＵ）及ＨＵ联合干扰素－α（ＩＮＦ－α）对慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）细胞株－Ｋ５６２细胞增殖、死亡及其相关基因表达的影响,进一步探讨化疗药物与细胞因子联合治疗ＣＭＬ的分子基础。方法 细胞计数及台盼蓝染色分析细胞增殖与存活率;逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分析４８ｈ培养后的Ｋ５６２细胞中ｂｃｒ－ａｂｌ、ｂａｘ及ｃ－ｍｙｃ基因表达水平。结果 ＨＵ及ＨＵ联合ＩＦＮ－α均抑制细胞     

皖南蝮蛇蛇毒抗凝组份抗白血病作用的实验研究

目的:探讨皖南蝮蛇蛇毒抗凝组份对白血病细胞HL60和K562增殖的抑制作用。方法:采用细胞形态学观察,台盼蓝染色,MTT比色法测定蛇毒抗凝组份Ⅱ和Ⅲ(ACFⅡ和Ⅲ)对体外培养的白血病细胞株HL60和K562增殖的抑制作用。结果:蛇毒ACFⅢ对白血病细胞HL60和K562均有较强的抑制作用,蛇毒ACFⅡ对白血病细胞HL60和K562的影响经统计学分析无明显统计学意义。蛇毒ACFⅢ对HL60和K562的抑制作用呈剂量时间依赖性。结论:蛇毒ACFⅢ对白血病细胞系HL60和K562细胞的增殖有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

Wnt5a与髓细胞白血病发生关系的研究

目的观察Wnt5a在髓细胞白血病中的表达以及外源性Wnt5a对K562细胞生长的影响。方法RT-PCR检测5例急性髓细胞白血病、6例慢性髓细胞白血病外周血或骨髓标本及白血病细胞系中Wnt5a的表达。用AdWnt5a和AdG-FP腺病毒转染CHO细胞制备的条件培养液分别处理K562细胞1～5d,采用细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态等方法观察Wnt5a对K562细胞生长影响。结果6例慢性髓细胞白血病均未表达Wnt5a,5例急性髓细胞白血病中4例不表达或弱表达,仅1例完全缓解的病人高表达Wnt5a。K562、HL-60细胞中Wnt5a也不表达,Jurkat细胞高表达。以GFP条件培养液处理细胞为对照,Wnt5a条件培养液处理K562细胞生长明显受到抑制,但未影响细胞的存活率。与对照相比细胞形态上出现了分化的表型。结论Wnt5a在急慢性髓细胞白血病外周血或骨髓中以及髓系白血病细胞株中均表达缺失或降低,并且外源性的Wnt5a可抑制K562细胞生长并有诱导其分化的现象,提示Wnt5a的表达下调可能与髓细胞白血病的发生有关。     

力达霉素抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用及其机制

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。     

错配修复基因hMSH2在阿霉素耐药白血病细胞K562中的表达

[目的]探讨错配修复蛋白hMSH2与白血病耐药发生的关系。[方法]MTT检测K562/ADM细胞耐药倍数,PT-PCR检测K562与K562/ADM的hMSH2基因表达,Western-blot检测二者的hMSH2蛋白表达,免疫细胞化学方法检测正常血有核细胞的hMSH2蛋白表达。[结果]K562/ADM耐药倍数为6.7倍,正常血有核细胞未见hM-SH2蛋白表达,Western-blot显示K562/ADM的hMSH2蛋白表达强于K562。[结论]白血病细胞K562存在hM-SH2基因及其产物的表达;耐药细胞的hMSH2蛋白增多可能与持续阿霉素作用有关。     

三七总皂苷联合阿糖胞苷对K562细胞的影响

[目的]考察三七总皂苷联合应用阿糖胞苷对白血病细胞K562细胞活力、增殖抑制、诱导凋亡的协同作用.[方法]处于对救生长期的白血病K562细胞,给予三七总皂苷、阿糖胞苷以及两药的联合,采用MTT试验、集落形成实验、Annexin V-PI双染流式细胞检测等实验手段进行分析检测.[结果]单用三七总皂苷对K562白血病细胞有一定的增殖抑制作用,对抑制集落形成和诱导凋亡作用不明显;相同剂量的三七总皂苷联用阿糖胞苷后,对K562细胞的增殖抑制、集落形成和凋亡有明显的增强.[结论]三七总皂苷联用阿糖胞苷对白血病细胞K562有明显的抗肿瘤作用,提示三七总皂苷可提高白血病细胞对化疗药物的敏感性,为临床用三七总皂苷抗白血病的辅助治疗提供依据.     

8-硝基白杨素诱导HL-60细胞生长抑制和凋亡

目的:研究8-硝基白杨素(8-nitrochyrsin,NOChR)对HL-60细胞生长和凋亡的影响。方法:MTT法检测HL-60细胞增殖活性;台盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;PI染色流式细胞术分析细胞周期和凋亡率。结果:NOChR呈浓度依赖性对HL-60细胞增殖具有抑制作用;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;PI染色流式细胞术结果表明以浓度依赖方式诱导HL-60细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期。结论:NOChR具有诱导HL-60细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G1期阻滞相关。