肺癌相关成纤维细胞的异质性及研究进展

癌相关成纤维细胞(CAFs)是构成肿瘤微环境的主要细胞成分之一,具有促进肿瘤的血管新生、肿瘤浸润和侵袭、肿瘤上皮间质转化等作用.近年来单细胞转录组学、细胞代谢和重编程等技术更加深入地阐明了CAFs异质性及调节肿瘤细胞的机制.本文就CAFs的异质性特点、炎症及代谢紊乱特征,以及靶向TME治疗等领域的进展作一综述,旨在介绍肺癌TME CAFs研究的最新进展,从而为肺癌治疗提供新的理论基础.     

肿瘤相关成纤维细胞的来源和分子机制

肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）不仅在细胞外基质的沉积,而且在肿瘤的生长、进展和转移中发挥重要作用.正常成纤维细胞、上皮细胞,内皮细胞和间质干细胞被认为是CAFs的主要来源.本文对CAFs的来源、分子机制和可能的潜在治疗靶作一综述.     

成纤维细胞与成纤维细胞激活蛋白在结肠癌中的研究进展

肿瘤发生、发展是一个错综复杂的生物学过程,不仅是实质细胞本身的恶性转变,还有赖于肿瘤微环境的作用。肿瘤微环境一般由间质细胞、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)和血管构成,其中成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)是主要的间质细胞,在微环境中与癌细胞接触,相互作用,转化为癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)。近年来,肿瘤中CAFs的研究备受关注,这些细胞在上皮肿瘤的恶性转变中发挥着不可忽视的作用。成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation proteih,FAP)是活化的成纤维细胞表面上的特异性表达分子,与肿瘤的生长及侵袭密切相关。现就NFs、FAP在结肠癌中的特点、具体作用及机制综述如下。     

肿瘤相关成纤维细胞在甲状腺癌增殖、侵袭与治疗中的作用

甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤之一。肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）是甲状腺癌肿瘤微环境中重要的细胞成分，其细胞起源、表型和功能均具有异质性。CAFs和肿瘤细胞之间的相互作用不断促进肿瘤的进展。CAFs可以通过改变胞外基质（extracellular matrix,ECM）结构功能、促进上皮向间充质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）和增强细胞因子分泌释放等方式，直接或间接促进甲状腺癌的发生发展。根据甲状腺癌中CAFs的特点目前已提出了一些可能的治疗策略。现结合文献对CAFs与甲状腺癌进展的研究进展进行综述。     

口腔癌相关成纤维细胞侵袭特性研究

目的采用体外重建基底膜细胞侵袭实验,研究口腔癌相关成纤维细胞（Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs）侵袭力,用免疫组织化学法,观察CAFs对相关蛋白的表达。探讨CAFs在口腔鳞癌中的病理意义。方法采用组织块贴壁法培养颊部正常成纤维细胞（Normal Fibroblasts,NFs）和癌相关成纤维细胞CAFs,利用包被matrigel的transwell小室模拟天然基底膜的结构,利用培养基浓度梯度差诱导细胞穿膜并计数穿膜细胞数量,比较CAFs和NFs的侵袭力差异。采用免疫组化法,比较CAFs和NFs对基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprotease-2,MMP-2）和成纤维细胞激活蛋白（fibroblast activation protein,FAP）表达差异。结果 CAFs穿膜的细胞数量显著高于NFS（P〈0.05）,差异具有统计学意义。CAFs对MMP-2和FAP的蛋白表达阳性,NFs表达为阴性。结论口腔CAFs的体外侵袭能力明显高于NFs,且能特异性地分泌MMP-2和FAP蛋白。这提示肿瘤间质的侵袭特性可随着上皮癌变而同步激活,CAFs参与肿瘤细胞外基质的重建,与肿瘤侵袭转移有关。     

一种改良宫颈癌相关成纤维细胞原代培养方法的建立

目的:通过对比并改良常见的原代(CAFs)细胞培养方法,建立一种成功率较高的宫颈癌相关成纤维细胞(CAFs)原代培养的方法。方法:取确诊为宫颈癌患者的活检或手术标本,通过对消化时间、重悬液量及培养基血清浓度进行改良原代细胞培养,观察细胞生长状况,并比较其与传统组织块贴壁法和酶消化法的细胞生长率。运用时间差酶消化及反复贴壁法进行分离纯化后,用免疫荧光的方法对宫颈癌相关成纤维细胞的纯度进行鉴定。结果:改良培养法消化时间为30min,血清浓度为20%时成功率最高(66.67%)。反复运用时间差酶消化及反复贴壁法可以得出纯度较高的宫颈癌相关成纤维细胞。结论:本研究成功建立了一种成功率较高的宫颈癌相关成纤维细胞改良培养方法,为后期探讨CAFs在肿瘤形成、进展中的作用打好实验基础。     

TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响.方法 应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况.结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加.与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色.     

肿瘤相关成纤维细胞来源外泌体ciRS-7经miR-7/IGF1R轴促进胰腺癌细胞糖酵解

目的：探讨肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）来源外泌体ciRS-7对胰腺癌细胞糖酵解代谢的影响。方法：采用超速离心法提取CAFs外泌体,并通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测外泌体中ciRS-7的表达及胰腺癌细胞糖酵解关键酶mRNA的表达;构建含ciRS-7 野生及突变序列的荧光素酶检测报告质粒,在胰腺癌细胞中验证ciRS-7与miR-7的关系;蛋白质印迹（Western blot）法检测IGF1R/AKT蛋白表达。结果：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中表达上调（P ＜0.05）;CAFs释放的外泌体促进胰腺癌细胞糖酵解和增殖（P ＜0.05）;敲降胰腺癌相关成纤维细胞ciRS-7的表达,其外泌体可抑制胰腺癌细胞糖酵解相关基因的表达（P ＜0.05）;ciRS-7在胰腺癌细胞中经miR-7/IGF1R/AKT通路促进癌细胞糖酵解（P ＜0.05）。结论：ciRS-7在胰腺癌相关成纤维细胞的外泌体中高表达,下调ciRS-7具有抑制胰腺癌细胞糖酵解的作用。     

肿瘤相关成纤维细胞促肿瘤转移和放射抵抗的相关研究进展

肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中的主要细胞类型,其生物学特性具有来源、表型和功能异质性,通过产生和分泌各种趋化因子和促进上皮间充质转化,从而促肿瘤生成、增殖、侵袭和转移。CAFs可介导肿瘤干细胞支持肿瘤产生及增殖,促使肿瘤细胞放疗抵抗。CAFs还可通过旁分泌外泌体,增强肿瘤的生长和能诱导放疗抵抗。大分割放疗应用于CAFs,可诱导CAFs表达衰老表型发生变化,促肿瘤能力下降,为临床肿瘤的放疗带来新契机。     

干扰素-γ消除肿瘤相关成纤维细胞介导非小细胞肺癌细胞辐射抵抗的实验研究

目的探讨干扰素-γ消除肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）介导的非小细胞肺癌细胞辐射抵抗的效果。方法从2020年12月至2021年6月温州市中心医院胸外科行根治性切除的15例肺癌患者临床标本中提取CAFs,通过流式细胞术、HE染色、免疫组化对分离出的CAFs进行鉴定。将肺腺癌细胞A549和肺鳞癌细胞H460置于直线加速器中辐射。采用Transwell和CAFs细胞上清液培养两种方法对CAFs与辐射后的A549和H460共培养,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡占比,CCK-8法检测肿瘤细胞活性;高效液相色谱法检测CAFs细胞上清液中谷胱甘肽（GSH）、半胱氨酸、胱氨酸水平;Westernblot检测CAFs细胞内胱氨酸转运蛋白xCT、肿瘤细胞内DNA损伤修复蛋白γH2AX、信号传导及转录激活蛋白1（STAT1）表达情况。结果CAFs与辐射后肿瘤细胞共培养后,辐射后肿瘤细胞凋亡占比下降,细胞活性增加;CAFs提高了肿瘤细胞内GSH水平,而干扰素-γ降低CAFs细胞上清液中GSH、半胱氨酸水平,提高胱氨酸水平,进而减少肿瘤细胞活性;干扰素-γ下调xCT在CAFs中表达,干扰素-γ作用后CAFs组的肿瘤细胞中γH2AX表达相应增加,CAFs细胞内STAT1获得激活并使其成为磷酸化STAT1。结论CAFs通过释放GSH来诱导非小细胞肺癌细胞对辐射抵抗,而干扰素-γ则下调xCT在CAFs中表达,进而消除其介导的辐射抵抗。