OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损的解剖学修复作用

目的 研究OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损的解剖学修复作用.方法 建立15 mm的SD大鼠右侧坐骨神经缺损模型后,用OEC、SC、ECM以及自行制备的PLGA导管构成OEC-SC-ECM-PLGA桥接体进行修复,同时设OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组、PLGA组和自体神经移植组进行对照.术后1、3、6、9周OEC-SC-ECM-PLGA组、OEC-ECM-PLGA组和SC-ECM-PLGA组行细胞示踪检测,在术后9周各组行神经连接率、再生神经相对直径恢复率及超微结构检测.结果 OEC和SC可在桥接体内至少存活6周,SC的存活率高于OEC,两者沿神经纵轴呈梭形分布,并向桥接体近心端和远心端坐骨神经内迁移至少2.5 mm,OEC-SC-ECM-PLGA组的神经连接率、再生神经相对直径恢复率、有髓神经纤维密度、总神经纤维数及有髓神经纤维成熟度优于OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组和PLGA组,还未达到自体神经移植组水平.结论 OEC和SC可在缺损坐骨神经桥接体内存活,沿神经纵轴分布,并向桥接体两端坐骨神经内迁移.OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损具有显著的解剖学修复作用.     

人工组织神经修复狗坐骨神经缺损后的电生理学检测

目的：利用电生理学指标评价人工组织神经修复狗坐骨神经缺损后的效果。方法：以狗作为实验对象用人工组织神经辅加神经再生素、或自体神经桥接坐骨神经30mm缺损；在术后6个月时，采用在体引导坐骨神经干复合动作电位方法及肌电图的检测。结果：人工组织神经移植和自体神经移植相比再生的坐骨神经干复合动作电位传导速度或肌电图均无显著性差异（P＞0．05）。结论：人工组织神经具有良好的神经再生桥梁作用。     

人工组织神经移植物修复狗坐骨神经缺损后荧光素逆行追踪试验

目的：用荧光素逆行追踪试验了解人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接缺损坐骨神经后，神经再生修复的情况。方法：人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接狗缺损的30mm坐骨神经手术后6个月时，于原远端吻合口下10mm处注射快蓝（FB）；取脊髓及相应背根神经节，观察神经元被荧光素标记情况。结果：脊髓及背神根神经节中均出现不等的被FB标记的神经元胞体。结论：人工组织神经移植物能较好的修复长距离缺损的神经。     

HRP逆行示踪对人工组织神经移植物辅加NRF修复大鼠坐骨神经缺损的评价

目的：用HRP逆行示踪法评价人工组织神经移植物辅加神经再生素修复大鼠周围神经缺损的效果。方法：壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维组成人工组织神经移植物并辅加神经再生素，修复大鼠的坐骨神经缺损（10mm)。术后24周时，进行大鼠HRP逆行示踪试验。结果：脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被HRP标记的神经元胞体。结论：人工组织神经移植物辅加神经再生素对缺损的神经修复具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

人工组织神经移植物桥接狗坐骨神经缺损后的机体免疫功能反应

目的：观察机体免疫系统对人工组织神经移植物的反应。方法：将人工组织神经移植物桥接到狗的坐骨神经缺损处，并在术前和术后6个月时分别取血，进行淋巴细胞转化试验、E花环试验，同时光镜观察术后6个月时再生神经中白细胞浸润的情况。结果：人工组织神经移植物植入后未见排斥反应产生。结论：人工组织神经移植具有较好的生物相容性。     

人工组织神经移植物桥接狗缺损坐骨神经后腓肠肌内琥珀酸脱氢酶表达含量的变化

目的：了解人工骨组织神经移植植物辅加神经再生索桥接狗坐骨神经缺损后相应腓肠肌形态与酶的变化。方法:人工组织神经桥接修复狗的坐骨神经30mm缺损为实验组，自体神经桥接或神经缺损的为对照组I或II.术后6个月时取腓肠肌，按Nitro-BT法显示琥珀酸脱氢酶光镜标本。图像分析仪分析琥珀酸脱氢酶（SDH）染色后灰度值及腓肠肌截面积。结果：实验组腓肠肌SDH的灰度值及截面积均与对照组II有明显差别，而与对照组I无明显差别。结论：人工组织神经修复缺损神经后，重新支配靶器官，使腓肠肌萎缩明显减弱，琥珀酸脱氢酶活性的下降也明显减轻。     

大鼠嗅成鞘细胞培养不同分离方法对纯度的影响

目的通过对多种分离方法的比较获得较为理想的嗅成鞘细胞的分离措施。方法应用3种不同分离方法各取12份样本,对同一条件下培养10d的细胞纯度进行p75NGFR免疫细胞化学测定及统计分析;结果(1)3种不同分离方法取材平均活细胞率:传统分离法(组)为84.52%,直接挤压法(组)为97.33%,机械过滤法(组)为83.97%,直接挤压(组)法分散后的OECs活细胞数量最多(P<0.05);(2)3种分离方法取材、培养所获得的OECs纯度:传统分离法(组)为67.58%,直接挤压法(组)为91.23%,机械过滤法(组)为63.51%;直接挤压法(组)培养细胞纯度最高(P<0.05)。结论嗅成鞘细胞最佳分离措施为直接挤压法,应用直接挤压法可收获大量嗅成鞘细胞,对OECs进一步的基础研究以及将来的临床应用奠定了基础。     

GDNF基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的应用携带胶质细胞源性神经营养因子基因的逆转录病毒载体质粒(pLXSN-GDNF)对体外培养的雪旺细胞进行基因修饰,并结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)管构建神经移植复合体,用于大鼠坐骨神经缺损的修复,同时对其促轴突再生及神经元保护作用予以检测评价.方法 40只成年Wistar大鼠随机分为4组:A组(n=10) 细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;B组(n=10)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;C组(n=10) GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;D组(n=10)自体神经桥接组.损伤各组12周时应用神经电生理及甲苯胺蓝染色和透射电镜观测神经再生情况,辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术用于脊髓前角运动神经元再生评价.结果 12周时再生神经运动传导速度检测、甲苯胺蓝染色轴突形态计量学分析、透射电镜超微结构观察以及脊髓前角运动神经元再生评价结果提示:C组优于A、B组,而与D组相比无明显差异.结论雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足,而可能达到与自体神经移植相似的效果.     

嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

成年兔坐骨神经雪旺细胞的分离纯化培养

目的：探讨从成年新西兰兔坐骨神经分离培养获得大量雪旺细胞的有效手段,方法：利用成年免发生Wallerian变性的坐骨神经用植块法进行培养,通过相差显微活细胞计数和S－100细胞化学标记相结合鉴定了雪旺细胞增值和纯化程度。结果：通过上述方法获得大量雪旺细胞纯度达95％,并绘制其生长曲线,体外培养的雪旺细胞倍增时间为8d。结论：本方法能获得大量高纯度的雪旺细胞,为组织工程修复周围神经缺损打下基础。     

PLGA导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的观察多孔PLGA[poly（1actide-CO-glycolide）]导管修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法健康成年SD大鼠12只，分为自体神经移植组和PLGA导管组。两组动物分别人工造成右侧10mm的坐骨神经缺损后，PLGA导管组采用聚乳酸（polylactic acid，PLA）和聚羟基乙酸（polyglycolic acid，PGA）按75：25的比例制成多孔PLGA管修复坐骨神经缺损。自体神经移植组采用坐骨神经进行桥接。术后4、8、12周，分别行坐骨神经功能指数检测，术后12周行快蓝（Fast Blue）逆行示踪观察背根神经节（dorsal root ganglion，DRG）和脊髓神经元数目及行胫前肌湿质量测量；半薄和超薄切片观察再生纤维数目、直径及髓鞘厚度。结果坐骨神经功能指数比较，术后4周无显著性差异（P〉0．05），但8周和12周有显著性差异（P〈0．05），自体神经组优于PLGA管组。PLGA组DRG及脊髓中快蓝标记的神经元数目及胫前肌湿质量均不及自体神经组，差异有统计学意义（P〈0．05）；单位面积再生有髓纤维数目、直径和髓鞘厚度在PLGA管组与自体神经组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论单用PLGA导管对坐骨神经缺损有一定的修复效果，但不及自体神经。     

大鼠坐骨神经结扎后降钙素基因相关肽的变化

目的 研究大鼠坐骨神经结扎模型的降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的时空变化规律,为探讨其在神经再生中的机制与作用提供实验依据.方法 SD大鼠随机分为假手术对照组和坐骨神经结扎组,实验组结扎后分别存活1 d到28 d,免疫组化结合图像分析技术观察CGRP在坐骨神经、背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)、脊髓分布和含量的变化.结果 结扎后1 d坐骨神经CGRP大量堆积,结扎近端多于远端,随后逐渐下降,近端至14 d基本消失,远端至7 d基本消失;结扎后7 d DRG CGRP开始下降,21 d达最低值,28 d仍低于正常;结扎后14 d脊髓后角CGRP下降,但后角免疫阳性面积未见明显变化;各时间点脊髓前角CGRP未见明显变化.结论 神经结扎后CGRP表达变化呈现一定的时空模式,可能与靶源性神经营养因子的缺乏有密切关系.     

An experimental study on nerve regeneration and spinal neurons after CO2 laser anastomosis of rat sciatic nerve

Objective: Many methods have been used in an attempt to seal the epineurium and to prevent axonal outgrowth.In this study, the rat sciatic nerves were repaired with CO2 laser, the nerve regeneration and the morphology of spinal anterior horn neurons were investigated. Methods: Seventy-two male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 6 groups of 12 rats. The animals were designed to observe the electrophysiology, the histopathology and the morphology of spinal anterior horn neurons. One of the rat sciatic nerve anastomosed with CO2 laser, the contralateral nerve was reconstructed by microsuture technique. At 2, 4, 6, 8 weeks postoperatively, neuromuscular functions, the regeneration of axons and neurons were evaluated by the electro-physiological and histopathological studies. The rats were killed at 4, 6 weeks postoperatively. Results: The recovery of toe spread and myodynamia in laser groups was better than that in suture groups (P＜0.05). The latency of foot withdraw caused by radiate heat and neuromuscular conduction velocity in laser groups were faster than that in suture groups (P＜0.05). The density of nerve fibers, percentage of axons passing through anastomotic area and numbers of neurons were better in laser groups than in suture groups. At 8 weeks postoperatively, the first grade dendrites of anterior horn neurons grew well. Their diameter, length, volume and total volume were much higher than that in control group. (P＜0.05, P＜0.01). Conclusion: CO2 laser repairing was effective in promoting the regeneration and the recovery of sciatic nerves in its earlypost-trauma stage. In addition, laser repairing was found to reduce regenerating axons misdirection and forming neuroma.     

丙酸睾酮对大鼠坐骨神经损伤的治疗作用

目的:探讨雄激素丙酸睾酮(TP)对坐骨神经损伤的治疗作用及其机制.方法:雄性Wistar大鼠60只,随机等分为实验(TP)组(雄激素治疗组)和对照组(生理盐水治疗组),每组30只.建立坐骨神经离断后缝合外膜的损伤模型,分别在术后第4周、12周比较实验组与对照组运动神经传导速度(MNCV)恢复率和腓肠肌复合动作电位波幅(CMAP)恢复率;取损伤远端神经,观察再生神经的组织学变化;透射电镜观察超微结构变化;计算再生有髓神经纤维计数恢复率.结果:术后第4周,TP组MNCV恢复率为(26.74±6.54)%,CMAP恢复率为(28.58±4.49)%,对照组MNCV恢复率为(19.71±4.34)%,CMAP恢复率为(18.95±5.51)%,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05);术后第12周,TP组MNCV恢复率为(54.31±12.89)%,CMAP恢复率为(71.24±4.05)%,对照组MNCV恢复率为(40.23±10.00)%,CMAP为(62.95±4.89)%,2组比较差异有统计学意义(P＜0.05);再生有髓纤维计数恢复率术后第4周TP组为(51.67±9.32)%,对照组为(34.04±10.86)%,差异有统计学意义(P＜0.05);术后第12周TP组为(84.03±3.84)%,对照组为(75.13±6.58)%,差异有统计学意义(P＜0.05).术后第4周、12周实验组再生神经纤维较对照组髓鞘致密,排列规则.结论:TP能促进周围神经再生和生理功能恢复.     

电针刺激穴位对大鼠神经损伤后自残及神经再生的影响

目的:探讨直流电针刺激对神经损伤后自残及神经再生的影响.方法:40只大鼠随机等分为直流电针穴位刺激组(A组)和对照组(B组).构建坐骨神经损伤模型后,A组给予电针穴位刺激,B组不作处理,观察并比较术后2组自残率、屈肌反射及标记细胞百分率.结果:术后2l d A组右后足趾自残率低于B组,脊神经节和脊髓前角标记细胞百分率高于对照组(P均＜0.001);A组右侧屈肌反射阈较左侧提高,B组刺激强度为(35±1)V时仍无屈肌反射.结论:电针穴位刺激能抑制神经损伤后自残并促进周围神经再生.     

腺病毒介导的神经生长因子基因治疗大鼠坐骨神经损伤的疗效研究

目的观察腺病毒介导神经生长因子（Ad-NGF）基因治疗对大鼠坐骨神经损伤修复的疗效。方法取SD大鼠16只,切断右侧坐骨神经并缝合,随机分为Ad-NGF治疗组、神经生长因子（NGF）局部注射组、空腺病毒载体组和生理盐水（NS）局部注射组。术后第31天行坐骨神经功能指数及神经电生理测定,Western blot检测神经生长因子蛋白质表达水平。结果腺病毒介导神经生长因子较其余3组可显著增加局部NGF蛋白质表达水平,改善坐骨神经功能指数和神经传导速度。结论腺病毒介导神经生长因子基因治疗可有效促进大鼠坐骨神经损伤后修复。     

IGF-1对大鼠坐骨神经再生早期的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1对大鼠坐骨神经再生早期的影响.方法 建立大鼠坐骨神经切割伤模型,通过硅胶管进行桥接,实验组于再生室内注入胰岛素样生长因子-1,对照组注入等量生理盐水,于术后3、5、7、9、11 d取材,用SABC免疫组化法检测轴突再生情况以及雪旺细胞数目、形态和排列方式的变化.结果 ①雪旺细胞:在对照组,术后3 d,断端间隙内仅可见少量雪旺细胞,术后7 d,雪旺细胞数量明显增多,术后11 d,整个间隙内的雪旺细胞排列呈有序的条索状.在实验组,术后3 d,雪旺细胞即明显增多,以后各相同时相点雪旺细胞数目均明显高于对照组.②再生轴突:在对照组,术后5 d,轴突开始长出,术后7 d轴突快速增长,至第11天,再生的轴突已长过5 mm的间隙到达神经远端.在实验组,术后3 d轴突即开始长出,9 d就快到达远端.结论 胰岛素样生长因子-1能促进轴突延伸和雪旺细胞增殖,明显促进坐骨神经再生.     

大鼠坐骨神经Wallerian溃变的分子机制研究

目的：运用基因芯片和蛋白芯片技术及生物信息学分析,系统分析大鼠坐骨神经损伤后远端神经组织wallerian溃变的差异表达基因和蛋白,从基因和蛋白水平探讨wallerian溃变的分子机制。方法：建立大鼠损伤坐骨神经远端Wallerian溃变模型,利用表达谱基因芯片和抗体蛋白芯片,进行表达趋势分析、功能分析、京都基因与基因组百科全书信号通路分析。通过生物信息学方法全面系统分析,大鼠坐骨神经损伤后远端Wallerian溃变的基因和蛋白表达变化。结果：在Wallerian溃变和再生过程中,共有6076个基因差异表达和23种表达趋势,有93个蛋白差异表达,108种信号通路参与形成Wallerian溃变的信号调控网络。结论：大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变过程中,有大量基因的表达变化和多种关键因子的调控,本研究为进一步阐明wallerian溃变的分子机制提供了基本数据,为经典的Wallerian溃变学说增添了新的内容。     

壳聚糖/聚羟基乙酸移植物桥接大鼠坐骨神经5mm缺损的研究

目的:探讨壳聚糖/PGA移植物桥接大鼠坐骨神经5mm缺损后神经再生的进程。方法:雌性SD大鼠24只,体重200±20g,随机分为3组,每组8只。行壳聚糖/PGA移植物桥接大鼠坐骨神经5mm缺损模型,实验分1W,2W,3W 3个时间点,分别于各时间点灌注取材,采用免疫组织化学染色方法观察坐骨神经再生的进程。结果:壳聚糖/PGA移植物桥接大鼠坐骨神经5mm缺损,1W时长入约1 500μm,2W时再生纤维已接近远端桥接处,长入距离约5 000μm,同时远端溃变的碎屑已基本清除;3W时可见部分再生神经纤维已完全通过神经移植物生长至损伤远端,同时可观察到局部有髓鞘蛋白P0的表达。