高效液相-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定红参中的精氨酸单糖苷（AF）及精氨酸双糖苷（AFG）含量

[目的] 建立一种同时测定人参加工品中精氨酸单糖苷（AF）和精氨酸双糖苷（AFG）含量的方法。[方法] 用Prevail^TM C¹⁸ column （4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱进行检测。流动相A：色谱乙腈,流动相B：5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟醋酸溶液。色谱条件为[0% A（0 min）;0% A（5 min）;15% A（8 min）;35%A（25 min）];流速0.8 mL/min;漂移管温度为115 ℃;气体流量3.2 L/min。[结果] AF和AFG的检测限分别为0.015和0.010 mg/mL;线性关系相关系数分别为,AF：0.999 7,AFG：0.999 9,表明线性关系良好。AF和AFG检测的精密度,重复性,稳定性以及回收率的相对标准偏差分别为0.43%&0.37%,0.43%&0.55%,0.43%&0.49%,0.45%&0.15%。AF和AFG检测的回收率分别为99.5%&100%,表明方法稳定。经检测,高丽红参,中国红参和生晒参中AF含量分别为0.74%,0.91%和1.14%,AFG含量分别为6.69%,5.12%和0.85%。[结论] 这种方法成功用于高丽红参,中国红参及生晒参中AF及AFG的检测;且红参中AF和AFG含量明显高于生晒参。该方法测定结果可靠,缩短了测定时间,较少杂质干扰。但因为本研究考察氨基酸种类较少,当衍生物种类较多时,仍需进一步考察其分离度。     

FQ—PCR法与IBT法在人巨细胞病毒检测中的价值比较

目的对荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒进行比较分析。方法分别应用FQ—PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMVDNA和血清HCMV IgM。结果42例小儿尿HCMVDNA阳性检出率为57．14％,血HCMV IgM阳性检出率为35．71％。前者的诊断阳性率高于后者（χ2=3．88,P〈0．05）,有统计学差异;42例成人尿HCMVDNA阳性检出率为14．29％,血HCMVIsM阳性检出率为71．43％。后者的诊断阳性率显著高于前者（χ2=28,P〈0．005）,有统计学差异;84例患者尿HCMVDNA阳性检出率为38．10％,血HCMVIgM阳性检出率为48．81％。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ2=1．96,P〉0．1）。结论FQ—PCR检测HCMVDNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

荧光定量聚合酶链反应与免疫印迹法检测人巨细胞病毒

目的比较荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒效果。方法分别应用FQ-PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMV DNA和血清HCMV IgM。结果 42例疑似人巨细胞病毒感染小儿尿HCMV DNA阳性检出率为57.14%,血HCMV IgM阳性检出率为35.71%。前者的诊断阳性率高于后者,差异有统计学意义（χ^2=3.88,P〈0.05）;42例成人尿HCMV DNA阳性检出率为14.29%,血HCMV IgM阳性检出率为71.43%。后者的诊断阳性率显著高于前者,差异有统计学意义（χ^2=28,P〈0.005）;84例患者尿HCMV DNA阳性检出率38.10%,血HCMV IgM阳性检出率48.81%。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ^2=1.96,P〉0.1）。结论 FQ-PCR检测HCMV DNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

肝素酶在胃癌组织中表达的临床意义探讨

目的:探讨肝素酶表达在胃癌发生、发展中的作用。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定42例胃癌和26例非癌组织中肝素酶的表达情况。采用χ2检验比较肝素酶的表达与胃癌临床病理特征之间的关系。结果:胃癌中肝素酶呈阳性表达26例(61.9%);非癌组织中呈弱阳性表达1例(3.8%)。RT-PCR和FQ-PCR的检测结果均相同。胃癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期肝素酶mRNA表达阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05);肝素酶表达与浆膜浸润、淋巴结转移或远端转移呈相关性(P<0.05)。结论:肝素酶可能促进胃癌浸润和转移,在胃癌的转移途径中,参与淋巴道转移而非血道转移。肝素酶可作为预测胃癌复发、转移的分子标志物之一。     

禁食前后小鼠胃黏膜NUCB2的变化

目的 观察禁食前后小鼠胃黏膜NUCB2表达的变化.方法 取正常饮食小鼠和禁食48 h的小鼠胃体黏膜组织,采用逆转录PCR检测NUCB2 mRNA表达的变化,Western blot方法检测NUCB2蛋白表达的变化.结果 与正常饮食小鼠比较,禁食48 h后小鼠胃黏膜NUCB2 mRNA水平无明显变化,但其蛋白质表达明显下降(t=9.59,P<0.01).结论 禁食48 h后小鼠NUCB2蛋白的变化是在翻译或翻译后水平上发生.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测对结核病的诊断价值

目的 探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)(Gene-xpert)检测对结核病的诊断价值.方法 随机选取我中心在2019年4月至2020年2月就诊的结核病患者共100例作为研究对象,将给予涂片抗酸染色法视为对照组,将给予实时荧光定量PCR检测视为研究组,研究观察2组患者的检出率、灵敏度和特异度、实时荧光定量PCR检测...     

乳腺癌组织中巨噬细胞移动抑制因子的表达研究

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子( MIF)在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况. 方法 运用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹分析( Western Blot)方法检测85例乳腺癌组织和相应的癌旁组织中MIF的表达情况. 结果 乳腺癌组织中MIF mRNA表达量为(3.18 ±1.19) ×10 -2 ,高于癌旁组织的(1.38 ±0.05) ×10 -2 ( P<0.05);Western Blot结果显示乳腺癌组织中MIF蛋白表达水平为(0.879 ±0.232),高于癌旁组织的(0.325 ±0.178)(P<0.05). 结论 MIF在乳腺癌组织中表达高于癌旁组织,其可能在乳腺癌发生发展过程中起重作用.     

AnnexinⅡ在4株人乳腺癌细胞中的表达及意义

目的:研究人乳腺癌细胞中Annexin Ⅱ基因的表达情况,阐明Annexin Ⅱ基因与乳腺癌细胞侵袭力的关系.方法:采用SYBR实时荧光定量PCR,Western Blot技术分别检测MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7共4株人乳腺癌细胞Annexm Ⅱ mRNA和蛋白的表达情况;免疫细胞化学检测AnnexinⅡ蛋白在4株人乳腺癌细胞中的定位;Millicell小室测定4株人乳腺癌细胞体外侵袭能力.结果:MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZB-75-30和MCF-7的Annexin Ⅱ mRNA表达量分别为0.67±0.21,0.38±0.03,0.05±0.03,(4.06±0.81)×10<'-5,任两组细胞间Annexin Ⅱ mRNA的表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-435S,MDA-MB-231,ZR-75-30和MCF-7的Annexin Ⅱ蛋白表达量:Western Blot结果分别为1.47±0.06,1.10±0.05,0.70±0.03,0.09±0.01:免疫细胞化学结果分别为3423±312,2767±147,2001±245.353±128;任两组细胞间AnnexinⅡ蛋白表达量差异均有统计学意义(P<0.05);MDA-MB-4355,MDA.MB-231,ZR-75-30和MCF-7的体外侵袭力分别为135.3±7.6,147.2±8.9,79.4±2.9,15.3±4.4,除MDA-MB-435S细胞与MDA-MB-231细胞无显著差异外,其余两组细胞侵袭力有显著性差异(P<0.05).结论:在所检测的4株人乳腺癌细胞中,AnnexinⅡ表达量与细胞体外侵袭力呈正相关.     

HCV-RNA实时荧光定量的临床价值

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-RT-PCR)检测丙型肝炎病毒(HCV-RNA)在临床中的应用价值。方法用RFQ-RT-PCR检测325例肝炎病人标本,并同时采用ELISA检测抗-HCV,了解样本中HCV-RNA含量与抗-HCV的相关性。结果325份标本中有15例HCV-RNA含量高于1000拷贝/ml,18例抗-HCV阳性。经统计分析,两者有明显的相关性。结论RFQ-RT-PCR技术检测HCV-RNA特异性强,灵敏度高,具有良好的应用价值。     

小鼠游泳耐力实验系统的建立与红景天抗疲劳作用的验证

目的建立小鼠游泳耐力实验系统,挖掘评价小鼠游泳耐力的新指标,并用此系统验证红景天对小鼠耐力的影响。方法将计算机视频采集技术和图像分析技术应用于小鼠游泳耐力实验中,实时获取小鼠游泳信息,提取包括力竭时间、首次下沉时间、下沉总时间、首次连续下沉时间在内的多个耐力评价指标,客观精确地在线分析小鼠耐力数据;利用正常小鼠、红景天给药小鼠对系统的稳定性、可靠性进行实验研究。结果计算机记录数据与人工记录数据具有高度相关性,r0.95,系统稳定可靠。首次连续下沉时间与力竭时间的相关性系数r=0.974,其他新指标与力竭时间的相关性系数r0.9。红景天给药组较空白组,首次下沉时间和首次连续下沉时间显著性增加。结论该系统用于评价小鼠游泳耐力的指标客观、精确、灵敏,实现了视频采集、信息整合、数据分析、统计输出一体化,寻找到了与力竭时间高度相关的新指标-首次连续下沉时间。全套系统自动化、智能化程度高,为抗疲劳药物的筛选提供了一套可靠的实验系统。     

Effects of glucose and insulin on the H9c2 （2-1） cell proliferation may be mediated through regulating glucose transporter 4 expression

Background The change of glucose transporter 4 （GLUT4） expression could influence glucose uptake in the myocardial cells and then effect myocardial metabolism, which maybe one of the factor for the diabetes cardiovascular disease. This study aimed to explore the influence of glucose and insulin at different concentrations on H9c2 （2-1） cell proliferation and its GLUT4 expression in vitro, and evaluate the correlation between myocardial cells proliferation and GLUT4 expression. This might be helpful for understanding the relationship between glucose metabolism and cardiovascular disease. Methods According to glucose concentrations in culture medium, cultured H9c2 rat myocardial cells were divided into five groups： control group （NC, glucose concentration 5.0 mmol/L）, low glucose group （LG, glucose concentration 0.1 mmol/L）, high glucose group 1 （HG1, glucose concentration 10 mmol/L）, high glucose group 2 （HG2, glucose concentration 15 mmol/L）, high glucose group 3 （HG3, glucose concentration 20 mmol/L）. Then according to different insulin concentrations in culture medium, each group was further divided into two subgroups： normal insulin subgroup （INSc, insulin concentration 3.8 mU/L）, high insulin subgroup （INSh, insulin concentration 7.6 mU/L）. H9c2 （2-1） cells were cultured for 1, 2, 3 days, the proliferation of cells were assayed by cell counting Kit-8 assay, the expressions of GLUT4 mRNA and protein were detected with RT-PCR and Western Blotting technique, and the relation between myocardial cells proliferation and GLUT4 expression was evaluated.     

实时荧光定量PCR与酶联定量PCR技术在 HBV-DNA载量检测中的比较研究

目的:比较实时荧光定量PCR(RQ-PCR)与酶联定量PCR(ELQ-PCR)技术在检测HBV感染血清HBV-DNA载量的灵敏度,精确性.为乙型肝炎临床抗病毒治疗和评价药物疗效提供可靠的依据.方法:应用RQ-PCR方法检测212例(4组)HBV感染者血清,ELQ-PCR方法检测228例(4组)HBV感染者血清.结果:RQ-PCR和ELQ-PCR方法检测HBV-DNA,其阳性检出率分别为HBsAg,HBeAg,HBcAb-IgG( )组100%和82.61%;HBsAg,HBeAb,HBcAb-IgG( )组90.63%和73.21%;HBsAg,HBcIgG,HBcAb-IgM( )组80.00%和57.58%;HBsAg,HB-cAb-IgG( )组70.15%和51.43%.HBV-DNA载量的阳性检出率,经统计学处理有显著性差异(P＜0.05).结论:RQ-CPR方法检测HBV-DNA载量在实时监测,节时快速,高灵敏,高精确度等方面都更优于ELQ-PCR.     

惠州市人乳头瘤病毒感染分型特点分析

目的：了解和分析广东省惠州市女性宫颈感染人乳头瘤病毒（ HPV）基因型的分布情况,为各级医疗机构、疾控中心制定HPV感染的治疗方案及防范措施、为我国HPV疫苗的研发和使用提供科学依据。方法利用实时荧光定量聚合酶链（ FQ-PCR）反应对从2014年1～7月在惠州市惠阳区人民医院和惠州市第二妇幼保健院进行体检的有性行为的女性共3673例进行HPV基因亚型检测,其中包括15种高危型（ HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82）及5种低危型（HPV6、11、42、43、44）。结果 HPV的总检出率为22.65％（832／3673）,其中高危型检出率为18.84％（692／3673）,低危型检出率为2.86％（1053／673）,混合型感染（感染型别多于两种及以上）检出率为0.95％（35／3673）。在20岁以下,21～25岁,26～30岁,31～35岁,36～40岁,41～45岁,46～50岁,50岁以上的不同年龄段HPV感染率分别为7.09％,15.51％,15.51％,19.35％,17.05％,11.67％,10.94％,2.88％。在感染HPV的832人中,高危型感染主要为16型（25.96％）,52型（15.26％）,18型（9.51％）,33型（7.93％）及56型（7.33％）。低危型感染以11型（6.37％）为主,混合型感染以16／58型（1.80％）为主。结论在惠州市HPV高危型感染主要为16,52,18,33和56型,低危型感染主要为11型,高危型的流行导致了混合型16／58,16／18等感染的增多。     

Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及其意义

目的探讨Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及意义。方法采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对正常足月妊娠妇女(对照组)30例、晚发型重度子痫前期30例及早发型重度子痫前期30例的Rho-GDI mRNA及蛋白进行测定。结果 Rho-GDI主要表达于蜕膜细胞的胞浆、胞核和少许间质。荧光实时定量PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证结果显示Rho-GDI mRNA及蛋白在正常妊娠组蜕膜组织中表达最高;早发型子痫前期组中次之;晚发型子痫前期中最低。正常组与早发组和晚发组比较,差异均有显著性(P<0.05),但早发组与晚发组间比较的差异无显著性(P>0.05)。结论 Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中表达下调,Rho-GDI可能通过调控滋养细胞浸润和血管平滑肌舒缩状态等环节参与了子痫前期的发生发展。     

实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价 

目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法,为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细
菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区,依据双歧杆菌的16SrRNA序列共设计3条引物,以常规PCR扩增出的16SrRNA部分基因片段制作标准品,应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品及待测样本进行分析,建立绝对定量的标准曲线,同时计算出待测样本双歧杆菌浓度;根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度;分析PCR产物熔解曲线评价反应特异性;重复检测梯度稀释的标准品,用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp,测序结果正确,成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品;生成的标准曲线R2=0.999,最低检测限度为每个反应1.48×102个拷贝;实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间每微升1.48×103~1.48×107个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94%、3.39%、3.54%、3.08%和3.34%。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数?g-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量PCR法敏感性高、特异性强,且重复性好,适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。     

发酵红参总皂苷对高糖培养大鼠心肌间质成纤维细胞的保护作用及其机制

目的:观察发酵红参总皂苷(FRGTS)对高糖培养的大鼠心肌间质成纤维细胞(cFb)增殖和胶原合成的作用,并阐明其作用机制.方法:采用胰酶消化和差速贴壁法分离提取1～3d龄SD大鼠cFb细胞,培养、传代后,取2～3代细胞用于实验;将细胞分成正常糖对照组(5.5 mmol·L-1 D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol·L-...     

实时荧光定量PCR检测肝癌细胞多药耐药相关蛋白MRP2、MRP3及MRP5 mRNA的表达

目的 研究多药耐药相关蛋白2(MRP2)基因及MRP3、MRP5基因在正常肝脏细胞系L-02、肝癌细胞系BEL及肝癌耐药细胞系BEL/ADM的表达差异,并探讨其在肝癌耐药中的意义.方法 分别提取L-02、BEL及BEL/ADM细胞的总RNA,利用实时荧光定量PCR法检测MRP2、MRP3、MRP5基因的表达水平.结果 MRP2基因在BEL/ADM细胞中的表达量明显高于在L-02、BEL细胞中的表达(P=0.000),而其在L-02、BEL两种细胞中的表达没有显著性差异(P=0.468);MRP3、MRP5基因表达量在L-02、BEL、BEL/ADM三种细胞中均有显著性差异(P=0.000).结论 MRP2可能参与了肝癌的内在性耐药,而MRP3、MRP5可能与肝癌的获得性耐药有关.     

褪黑素对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用

目的 探讨褪黑素对实验性糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法 将实验动物随机分为正常对照组（C组）、糖尿病组（D组）及糖尿病褪黑素治疗组（M组）。给予褪黑素治疗4周。检测血糖、血肌酐、肾脏肥大指数（肾重／体重），放免法测定24h尿白蛋白排泄量，对肾脏标本进行光镜观察，用图像分析仪测量各组大鼠平均肾小球面积、平均肾小球体积。同时用实时荧光定量RT-PCR法对糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达进行半定量分析。结果 褪黑素治疗组较糖尿病组24h尿白蛋白排泄量、肾脏肥大指数均明显下降（P〈0.05）。实时荧光定量RT-PCR检测糖尿病大鼠肾脏皮质TGF-β1 mRNA表达明显高于正常对照组，为C组的9．2倍，给予褪黑素治疗后，糖尿病大鼠TGF-β1 mRNA表达水平下降3．95倍，但仍明显高于正常对照组（P〈0.01）。肾小球平均面积、平均肾小球体积M组显著低于D组（P〈0.01）。结论 褪黑素可抑制糖尿病大鼠肾脏皮质TGF-β1mRNA表达，减少糖尿病大鼠的尿白蛋白，减轻及延缓肾小球硬化，发挥保护肾脏的作用。     

VEGF、c-Met、MMP-9在大肠癌中的表达及意义

目的探讨VEGF、c-Met、MMP-9在大肠癌组织中的表达及意义。方法分别采用RT-PCR法、W estern印记法、免疫组织化学法测定MMP-9、VEGF、c-Met在大肠癌组织及旁边正常组织的表达情况。结果大肠癌组的MMP-9明显高于正常对照组,两组相比较有显著差异(p<0.05)。大肠癌组的VEGF W estern印记光密度值明显高于正常对照组,两组相比较有显著差异(p<0.05)。c-Met表达方面,正常对照组50例标本中,其阳性表达率为12.0%;大肠癌组50例标本中其阳性表达率为74.0%。比较两组的阳性表达率有显著差异(p<0.05)。结论VEGF、c-M et和MMP-9参与了大肠癌临床病情进展和发病机制。     

两种游离DNA检测方法的比较研究

目的：对比评价人血清游离DNA的分支DNA（bDNA）检测和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测方法。方法：收集44例人血清标本,分别运用bDNA技术和荧光定量PCR检测其游离DNA浓度,对2种方法检测结果做分析比较。同时采用bDNA技术分别检测其中10例血清和血浆游离DNA含量。结果：bDNA技术的检测结果和荧光定量PCR具有较高的相关性（r=0.7077,P〈0.0001）;血清较血浆具有较高的游离DNA的水平。结论：bDNA操作简便且结果可信,适用于人群大规模筛查游离DNA水平。