应用mycalolide B初步建立斑马鱼帕金森病模型

目的 应用mycalolide B(MB)建立斑马鱼帕金森病(Parkison's disease,PD)模型,观察斑马鱼行为学、形态学及多巴胺神经元的变化并进行系统评价.方法 同亲代斑马鱼单次产卵200 ～300枚,简单随机化分为7组:对照组(0.2％ DMSO)、MB10组(10 μg/L MB)、MB20组(20 μg/L MB)、MB40组(40 μg/L MB)、MB80组(80 μg/L MB)、MB160组(160 μg/L MB)、1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)组(200μmol/L MPTP),每组30枚胚胎,于浓度梯度下培养;统计存活率,分析行为学变化,利用激光共聚焦显微镜观察多巴胺神经元生长情况,并与MPTP组进行比较分析.结果 MB效应浓度33.4 ～ 50.3 μg/L时,成斑马鱼出现发育迟缓、脊椎畸形、心包水肿、平衡失态、震颤等;运动速率降低明显(P＜0.05);Vmat2-GFP标记的阳性细胞减少(P＜0.01);synuclein蛋白沉积(P＜0.05).结论 建立斑马鱼PD模型的MB效应浓度为33.4～50.3 μg/L;MB诱导的斑马鱼PD模型与MPTP模型相比,行为学、多巴胺神经元数量减少方面相似,且较不产生synuclein的MPTP模型更具模式学意义.     

高浓度葡萄糖对斑马鱼胚胎及多巴胺神经元发育的影响

目的 研究高浓度葡萄糖在斑马鱼胚胎早期发育中的作用以及对斑马鱼多巴胺神经元发育的影响.方法 实验分为3组:空白对照组,葡萄糖实验(25 mmol/L葡萄糖)组,甘露醇对照(25 mmol/L甘露醇)组.25 mmol/L葡萄糖溶液处理Vmat-GFP转基因斑马鱼胚胎,当胚胎发育到第3天时,激光共聚焦显微镜观察多巴胺神经元的发育,荧光定量PCR检测PD相关基因的表达.结果 与空白对照组、甘露醇组相比,25 mmol/L葡萄糖溶液处理胚胎后,胚胎发育迟缓,心脏畸形,多巴胺神经元荧光增强,端脑部位多巴胺神经元数量增加,PD(帕金森病)相关基因表达水平升高,其中parkin基因表达差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 25 mmol/L葡萄糖溶液对胚胎的发育具有毒性作用,但在胚胎发育的早期对多巴胺神经元具有营养作用.     

丹参酮ⅡA可激活Nrf2/ARE通路对帕金森病MPTP模型小鼠多巴胺能神经元起保护作用

目的:研究Nrf2/ARE通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)所致帕金森病(PD)动物模型发病机制中可能的作用,探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性坏死的可能机制,以及丹参酮ⅡA对Nrf2/ARE通路的影响和对多巴胺能神经元的保护作用。方法:将60只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、PD模型组和丹参酮ⅡA组,每组20只。PD模型组和丹参酮ⅡA组小鼠采用MPTP制备PD小鼠模型,丹参酮ⅡA组制备PD模型后腹腔注射丹参酮ⅡA。观察各组小鼠行为学表现,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、核转录因子(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PD模型组小鼠出现典型的PD样症状。在MPTP最后一次注射后48小时,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显下降,Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞数量和蛋白表达水平明显增加(P<0.01),在MPTP最后一次注射后7天,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平较对照组减少约45%和50%(P<0.01)。与PD模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠PD样症状减轻,在MPTP最后一次注射后48小时,中脑黑质区Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞数量和蛋白表达水平进一步升高(P<0.01),在MPTP最后一次注射后7天,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:Nrf2/ARE通路在急性PD模型DA能神经元内可能被激活,其可能通过上调NQO1的表达对黑质DA能神经元起到保护作用,丹参酮ⅡA可能通过激活Nrf2/ARE通路对小鼠多巴胺能神经元起到一定保护作用。     

线粒体丝氨酸蛋白酶抑制MPTP诱导小鼠帕金森病的研究

目的 探讨线粒体丝氨酸蛋白酶(HtrA2/Omi)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠中脑多巴胺能神经元的影响.方法 12月龄C57BL雄性小鼠随机分为生理盐水组(5只)、MPTP组(5只)和MPTP+HtrA2/Omi组(6只),MPTP+HtrA2/Omi组小鼠尾静脉注射腺相关病毒AAV9-HtrA2/Omi表达HtrA2/Omi.腺相关病毒AAV9-HtrA2/Omi注射2周后,MPTP组和MPTP+HtrA2/Omi组1次/d,连续2周腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,生理盐水组注射等量生理盐水.在MPTP注射前1周及注射后第1、2周对3组小鼠进行爬杆实验和转棒实验.在M PT P注射结束后,检测3组小鼠脑组织绿色荧光蛋白(GFP),检测HtrA2/Omi过表达情况;组织切片酪氨酸羟化酶(TH)免疫荧光检测中脑多巴胺能神经元;蛋白免疫印迹检测TH蛋白表达量;组织免疫荧光检测α突触核蛋白聚集.结果 MPTP导致小鼠出现行为学功能障碍,成功构建PD小鼠模型.过表达HtrA2/Omi可减轻因MPTP导致的多巴胺能神经元减少,减轻α突触核蛋白聚集,改善小鼠行为功能障碍.结论 过表达HtrA2/Omi可改善MPTP所致小鼠的PD症状.     

绿茶多酚对帕金森病小鼠多巴胺能神经元保护作用研究

目的探索绿茶多酚(GTPs)对神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺能神经元预防性保护作用及机制。方法采用C57BL/6J小鼠共60只,分为空白对照组、预防组、MPTP组和治疗组(n=15)。MPTP组以MPTP腹腔注射7d(30mg.kg-1.d-1);预防组同以上述剂量注射MPTP前3个月开始GTPs干预至MPTP处理后3个月;治疗组以相同MPTP处理后开始GTPs干预3个月;空白对照组:腹腔注射同体积的生理盐水,连续7d,饮水中未加入GTPs,余处理方法及时长同治疗组。免疫组织化学法观察黑质多巴胺能神经元计数,比色法观察中脑超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)反映氧化应激水平。结果预防组、MPTP组和治疗组黑质多巴胺能神经元数量显著减少(P<0.05),氧化应激水平明显升高(P<0.05)。结论预防性使用GTPs对PD小鼠的多巴胺能神经元具有高于治疗的保护作用,其机制可能为预先增强抗氧化应激能力,提高发生病理改变的阈值。     

HO-1对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的作用

目的探讨抑制血红素加氧酶-1(HO-1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、MPTP组及锌原卟啉(ZnPPIX)+MPTP组,每组6只。腹腔注射MPTP(30mg/kg)5d制备帕金森病小鼠模型,MPTP组于MPTP注射前4d行侧脑室注射9g/L氯化钠溶液2μL,连续8d;ZnPPIX+MPTP组于MPTP注射前4d行侧脑室微注射ZnPPIX(50μg/kg)2μL,共8d;对照组以等量的9g/L氯化钠溶液取代ZnPPIX和MPTP。应用Western blots法检测黑质内HO-1和酪氨酸羟化酶(TH)的表达水平。结果 ZnPPIX+MPTP组小鼠黑质内HO-1表达明显低于对照组和MPTP组,差异有显著性(F=6.844,q=5.943、4.444,P<0.05);MPTP组、ZnPPIX+MPTP组黑质区TH表达较对照组明显下降(F=5.095,q=4.303、4.030,P<0.05),ZnPPIX+MPTP组小鼠TH表达量与MPTP组比较差异无显著性(q=0.234,P>0.05)。结论抑制HO-1表达对MPTP致帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的损伤无明显作用。     

香青兰总黄酮对帕金森病模型小鼠黑质DAT和VMAT2蛋白表达的影响

目的:探讨香青兰总黄酮(total flavones of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对帕金森病(Parkinson’s disease, PD)模型小鼠中脑黑质内多巴胺转运蛋白表达的效果。方法:C517BL/6J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)制备PD动物模型,多种行为学实验方法评价动物运动功能;尼氏染色观测黑质区多巴胺能神经元的数量;RT-PCR和Western blot检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)、囊泡单胺转运蛋白2(Vesicular monoamine transporter 2,VMAT2)和多巴胺转运蛋白(Dopamine transporter, DAT)的表达情况。结果:行为学检测表明,TFDM组显著增加小鼠的运动距离(P<0.05),显著增加小鼠的下落潜伏期(P<0.05),明显减少小鼠的爬杆时间(P<0.05);MPTP腹腔注射明显减少了黑质内多巴胺能神经元的数量,TFDM显著的提高了PD模型小鼠黑质内多巴胺能神经元数量;RT-PCR结果显示,TFDM组的TH、VMAT2和DAT的mRNA表达均显著增高(P<0.05);TFDM组TH、VMAT2和DAT蛋白表达均明显上调(P<0.05)。结论:TFDM可能通过上调VMAT2和DAT蛋白的表达,减少DA能神经元丢失,进而改善PD模型小鼠运动功能障碍。     

TLR4抗体对MPTP诱导的亚急性帕金森病小鼠的神经保护作用

目的 研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)单克隆抗体对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠的神经保护作用.方法 将48只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、MPTP组和TLR4抗体+MPTP组,每组16只.连续7天腹腔注射MPTP制作亚急性PD小鼠模型.用小鼠滚筒协调运动测试仪评价小鼠的运动协调能力,记录运动跌落潜伏期,免疫组织化学法检测各组小鼠中脑酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)(+)多巴胺能神经元、TLR4(+)细胞及CD11b(+)小胶质细胞的表达情况,显微镜观察载玻片并拍照,用Image Pro Plus图像处理软件进行细胞计数并比较各组间的差异.结果 3组小鼠中脑TH(+)多巴胺能神经元计数、TLR4(+)细胞数目和CD11b(+)细胞数目差异具有统计学意义(P均<0.001),对照组小鼠TH(+)多巴胺能神经元数目最多,MPTP组多巴胺能神经元数目最少,TLR4抗体+MPTP组居中;MPTP组小鼠TLR4(+)细胞数目和CD11b(+)细胞数目最多,TLR4抗体+MPTP组次之,对照组最少,组间比较差异有统计学意义(P均<0.001).结论 TLR4特异性抗体可逆转MPTP造成的小胶质细胞激活和多巴胺能神经元损伤,是临床PD治疗方案的新选择.     

染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨染料木黄酮对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及染料木黄酮预处理组.用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT) 基因的表达水平.应用高效液相色谱法检测纹状体(Str)内DA及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)含量.结果 MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低,染料木黄酮预处理组可逆转上述改变(F=20.31、13.19,P<0.01).MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少,应用染料木黄酮后可逆转上述改变(F=63.58、16.12,P<0.01).结论 染料木黄酮对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用.     

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响

目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.     

二至丸治疗斑马鱼骨质疏松模型效益观察及破骨细胞自噬机制

目的?观察二至丸对泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型的治疗疗效,并明确其对破骨细胞分化的自噬调控机制。方法?选取正常培养3?d后活力较好的斑马鱼幼鱼,用25?μmol/L泼尼松龙建立斑马鱼骨质疏松症模型,造模2?d后分组,分为空白组、模型组、依替磷酸二钠(ED)组(300?mg/L)、墨旱莲组(50?μg/mL)、女贞子组(50?μg/mL)和二至丸组(100?μg/mL)。4?d后,用0.2%钙黄绿素进行染色,拍照并统计斑马鱼脊椎骨荧光面积;实时荧光定量PCR检测斑马鱼成骨分化基因碱性磷酸酶（ALP）、骨形态发生蛋白2b（Bmp-2b）、Runt相关转录因子2（Runx2）和破骨分化基因组织蛋白酶K（CTSK）、活化T细胞核因子（NFATC-1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的表达。培养RAW264.7细胞至80%~90%密度后分为空白组、LPS诱导组(10?μg/L)、二至丸诱导组（100?μg/mL）、墨旱莲诱导组(50?μg/mL)和女贞子诱导组(50?μg/mL)。经LPS诱导细胞破骨分化及药物干预4?d后,实时荧光定量PCR检测RAW264.7细胞TRAP、CTSK、NFATC-1和自噬相关基因5（ATG5）,泛素结合蛋白62（p62）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和酵母ATG6同源物（Beclin）的mRNA表达。结果?与空白组比较,模型组椎骨荧光面积显著减少（P<0.01）,成骨标志基因表达显著降低（P<0.05~0.01）,破骨标志基因表达显著升高（P<0.05~0.01）;与模型组比较,ED组、女贞子组及二至丸组均显著改善了斑马鱼骨质疏松症（P<0.01）,且二至丸组显著优于墨旱莲组及女贞子组（P<0.01）。qPCR显示相较于空白组,模型组成骨分化标志物表达显著降低（P<0.05~0.01）,破骨分化标志物表达显著升高（P<0.05~0.01）。与模型组比较,ED组、墨旱莲组、女贞子组及二至丸组成骨标志基因表达显著升高（P<0.05~0.01）,二至丸组破骨标志基因表达显著降低（P<0.01）。体外研究显示,LPS诱导的细胞破骨分化基因CTSK、TRAP和NFATC-1及自噬相关基因mTOR、ATG5、Beclin、p62表达均升高（P<0.01）,二至丸组、墨旱莲组、女贞子组均可显著降低破骨分化基因和自噬相关基因的表达（P<0.05~0.01）。结论?二至丸可显著改善斑马鱼骨质疏松模型的临床症状,其机制可能与通过降低自噬相关基因表达从而抑制破骨细胞分化有关。      

人参皂苷Rg1和IGF-Ⅰ对帕金森病小鼠DA能神经元作用

目的观察人参皂苷Rg1、胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）及二者合用对小鼠黑质纹状体系统多巴胺（DA）能神经元的神经保护作用。方法 C57BL/6去卵巢（OVX）小鼠50只,采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）方法制备帕金森病（PD）模型小鼠,随机分为对照组、MPTP组、Rg1组（10mg/kg腹腔注射）、IGF-Ⅰ组（0.5g/L侧脑室注射）、Rg1＋IGF-Ⅰ组,每组10只。应用高效液相色谱法检测各组纹状体内DA的含量,免疫组织化学染色法检测黑质内酪氨酸羟化酶免疫阳性（TH-IR）神经元数目。结果 MPTP组纹状体内DA含量、黑质TH-IR神经元数目较对照组明显降低,差异有显著性（F=21.23、45.45,q=11.67、14.24,P〈0.01）。Rg1组、IGF-Ⅰ组及Rg1＋IGF-Ⅰ组纹状体DA含量、黑质TH-IR神经元数目较MPTP组明显升高,差异有显著性（q=5.66～17.91,P〈0.01）;Rg1＋IGF-Ⅰ组与Rg1组、IGF-Ⅰ组比较,差异有显著性（q=4.37～8.74,P〈0.05）。结论 Rg1、IGF-Ⅰ及二者合用均能够对抗MPTP对黑质纹状体系统DA能神经元的毒性作用,且Rg1与IGF-Ⅰ合用具有协同作用。     

白藜三醇对人脐静脉内皮细胞增殖及NO表达的影响

目的观察白藜三醇对正常状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HU—VECs）磷酸化蛋白激酶B（P—Akt）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（P-NOS）及一氧化氮（NO）表达的调节作用,探讨白藜三醇对HUVECs增殖的影响及可能机制。方法实验分组：DMEM高糖（〈4．5mg／L）培养基培养组（正常组）、白藜三醇组（分为0．2、1、5、10、20μmol／L5个剂量亚组）、白藜三醇＋LY294002组、LY294002组（阻断剂组）。其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,P13-K）抑制剂。应用CCK-8法检测细胞增殖情况;Westernblot检测各组细胞内蛋白激酶B（Akt）、P—Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、P-eNOS蛋白的表达;硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO的浓度。结果①白藜三醇组1、5μmol／L2个剂量亚组与正常组相比细胞增殖增加（P〈0．01）,5μmol／L亚组与0．2、10、20μmol／L亚组相比细胞增殖增加（P〈0．01）;白藜三醇20μmol／L对细胞增殖有抑制作用（P〈0．01）。②与对照组比较,白藜三醇组P-Akt（P〈0．01）、P-eNOS（P〈0．05）蛋白表达增加;与白藜三醇组比较,白藜三醇＋LY294002组P-Akt、P-eNOS蛋白表达降低（P〈0．01）。③与对照组比较,白藜三醇组NO表达增加（P〈0．05）;与白藜三醇组比较,白藜三醇＋LY294002组NO表达降低（P〈0．01）。结论白藜三醇可能通过P13-K／Akt／eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO表达的增加,从而促进内皮细胞增殖。     

Study of apoptosis pattern of dopaminergic neurons and neuroprotective effect of nicotine in MPTP mouse model

Objective：To investigate the apoptosis of dopaminergic neurons and the protective effect of nicotine in 1-methyl-4-phenyl- 1, 2,3,6-tetrahydropyridine （MPTP）-induced mouse model of Parkinson＇s disease. Methods：The mouse model of Parkinson＇s disease were formed by MPTP （30 mg/kg/d×7, i.p. ）; and the loss and apoptosis of dopaminergic neurons was observed by Tyrosine Hydroxylase（TH） and TUNEL stains.In ＂Nicotime plus MPTP＂ group, mice were pretreated with nicotine before MPTP injection. The putative protective effect of nicotine was analyzed. Results：The number of TH-positive cells decreased during MPTP treatment. Apoptotic neurons began to appear after three injections of MPTP and peaked on the 8th day. In the MPTP-intoxicated mice treated with nicotine, the loss of TH-positive cells was significantly less than that of MPTP- treated group （30 mg/kg/d×7）（P 〈 0.05）. Conclusion：The chronic treatment of MPTP can induce the apoptosis of dopaminergic neurons in substantia nigra, and nicotine might have a neuroprotecitve effect on dopaminergic neurons against MPTP toxicity.     

白藜芦醇对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25～35))诱导的原代培养大鼠皮层神经元损伤的作用研究

目的研究白藜芦醇(Res)对β-淀粉样蛋白(Aβ_(25～35))诱导的原代培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用及可能的作用机制。方法用原代培养SD大鼠皮层神经元,分为实验组(a,b,c,d),治疗组(e,f,g,h)和空白对照组,实验组分别暴露浓度为5,10,20,40μmol/LAβ_(25～35);治疗组为神经元首先被给于5,10,20,40μmol/LRes作用24h,后再给于20μmol/LAβ_(25～35),孵育24h,倒置显微镜下观察神经元形态学的变化,用四唑盐(MTT)比色试验检测神经元存活和生长情况,应用比色法测定吸光值检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量。结果Aβ_(25～35)在终浓度为20μmol/L时神经元形态有明显的变化,细胞立体感减弱,胞体内空泡形成,细胞突起内可见黑色颗粒状物;细胞的存活能力明显下降,与对照组相比较有显著性差异(P<0.05);Res在终浓度40μmol/L时,能明显提高细胞的存活能力。Aβ_(25～35)可以明显升高细胞培养上清液中MDA含量,降低GSH的含量;Res可使细胞培养上清液中MDA含量下降,GSH含量增加。结论Aβ_(25～35)诱导了原代培养皮层神经元变性、死亡,增加了神经元的脂质过氧化,Res可通过抑制脂质过氧化对皮层神经元起到保护作用。     

DADS上调miR-200b抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭

目的 探索miR-200b和二烯丙基二硫(DADS)相关的抑瘤机制,为揭示DADS抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的内在分子机制提供理论依据.方法 采用qRT-PCR分别检测不同浓度的DADS对Y79细胞miR-200b表达的影响,DADS分别设置六种浓度:0 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L和400 μmol/L.MTT和Transwell侵袭实验分别检测DADS和miR-200b对Y79细胞生长及侵袭能力的影响,将实验设置成五个组,即miRNA阴性对照组(瞬时转染scramble 40μmol/L);miR-200b组(瞬时转染miR-200b-mimics 40μmol/L);DADS阴性对照组(DMSO 10μmol/L,即mock组);DADS组(DADS 200μmol/L)和DADS+miR-200b组(瞬时共转染miR-200b-mimics 40μmol/L)和DADS (200μmol/L).结果 DADS可上调Y79细胞中miR-200b的表达,且其呈剂量依赖性(P<0.05);在MTT实验中,miR-200b组的OD值(0.549±0.057)较miRNA阴性对照组(0.737±0.135)明显降低;DADS组的OD值(0.508±0.064)较DADS阴性对照组(0.722±0.145)明显降低;而DADS+miR-200b组的OD值(0.362±0.081)较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组降低最为显著(P<0.05),即DADS可以通过上调miR-200b抑制Y79细胞的增殖能力.在Transwell侵袭实验中,外源性的高表达miR-200b组(105±13)较miRNA阴性对照组(162±12)能够显著抑制Y79细胞的穿膜细胞数,DADS组(102±13)较DADS阴性对照组(154±8)能够显著降低Y79的穿膜细胞数,且DADS+miR-200b组(77±8),细胞穿膜细胞数较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组减少最显著(P<0.05),即DADS通过上调miR-200b抑制Y79细胞侵袭.结论 DADS通过上调miR-200b的表达抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长及侵袭.     

胰高血糖素样肽-1类似物对帕金森病模型小鼠运动及多巴胺能神经元的影响

目的 研究胰高血糖素样肽-1类似物（Val8） GLP-1-Glu-PAL对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质区多巴胺能神经元的保护作用.方法 取10～12周健康雄性C57/BL6小鼠56只,采用随机数字表法随机分为对照组（Control组）,模型组（MPTP组）,单纯注药组（Val8组）与治疗组（MPTP＋Val8组）.MPTP组腹腔注射MPTP （30 mg/kg＆#183;d）,同时Control组给予等体积0.9％生理盐水,Val8组腹腔注射（Val8） GLP-1-Glu-PAL（25 nmol/kg）,MPTP＋Val8组注射完MPTP后1h后注射（Val8） GLP-1-Glu-PAL,连续8d.每天药物注射完2h后进行游泳实验及转棒实验以观测小鼠行为变化.第8天行为学测试完1h后处死小鼠,免疫组化法检测小鼠黑质致密部酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）阳性细胞数.结果 MPTP成功诱导了帕金森病模型,第1天到第8天,MPTP组与Control组相比,小鼠的游泳评分[（1.715±0.143）分]及掉落潜伏期[（68.048±7.823）分]明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而黑质致密部TH阳性细胞也明显减少（P＜0.01）;MPTP＋Val8组小鼠的游泳评分[（1.120±0.143）分]及掉落潜伏期[（20.546±7.823）分]则优于MPTP组,差异有统计学意义（P＜0.05）,并且TH阳性细胞数显著增多（P＜0.01）.结论 （Val8） GLP-1-Glu-PAL对MPTP所致的帕金森病小鼠黑质区多巴胺能神经元具有保护作用.     

白藜芦醇对体外培养的大鼠皮层神经元谷氨酸神经毒性的干预作用

目的：研究白藜芦醇（Res）对体外培养皮层神经元的影响;探索谷氨酸对皮层神经元的损伤作用及Res对抗谷氨酸损伤的机制.方法：体外培养新生大鼠大脑皮层神经元,实验组加入20μmol/L的Res,在不同时间点观察Res对培养的皮层神经元的作用,应用MTT法检测神经元存活率作为反应指标;通过在培养基中加入谷氨酸造成皮层神经元兴奋毒性损伤模型,加入最适剂量的Res,观察Res对上述损伤的作用;通过培养细胞形态学观察、MTT法测定存活细胞数及Bax免疫细胞化学染色检测指标来反映谷氨酸对神经元的损伤作用,同时观察Res对抗损伤的机制.结果：20μmol/LRes对体外培养的皮层神经元的存活率无明显影响;谷氨酸对皮层神经元产生强烈的兴奋毒性,导致大量神经元死亡,MTT结果表明神经元存活率明显下降;免疫组化染色表明谷氨酸可诱导神经元大量表达Bax,促进神经元凋亡;Res可对抗谷氨酸损伤而保护神经元,它可减轻谷氨酸的神经元兴奋毒性,提高神经元的存活率,同时抑制谷氨酸引发的Bax表达上调.结论：适宜剂量的Res对体外培养的皮层神经元无毒副作用,对神经元的存活率无影响,Res可以通过调节Bax的表达对抗谷氨酸兴奋毒性而保护神经元.