双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠Notch信号通路的双重调控作用

  目的：探讨双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Notch信号通路的调控作用。  方法：采用Lewis肺癌荷瘤鼠腹腔注射环磷酰胺300 mg/kg制成化疗骨髓抑制模型。荷瘤鼠随机分为空白组、模型组、治疗组,另设模拟接种的正常组,每组8只。治疗组在造模同时灌服双黄升白颗粒溶液0.4 ml/d,连续6 d;其他组均灌服生理盐水0.4 ml/ d,连续6 d。常规计数白细胞、红细胞、血小板数和骨髓有核细胞数,称取瘤重,荧光定量PCR法检测Notch信号通路中Notch1、Notch2、Notch3、Jagged、CSL的mRNA表达。  结果： 治疗组白细胞数、骨髓有核细胞数均高于模型组(P<0.05),Notch1、Notch2、Notch3、CSL在骨髓中的mRNA表达高于模型组(P<0.05),在肿瘤中的表达则低于模型组(P<0.05);各组红细胞、血小板、瘤重、Jagged mRNA表达未发现明显差异(P>0.05)。  结论：双黄升白颗粒治疗骨髓抑制的作用机制可能与调控Notch信号通路有关,且该调控作用具有双重特性,即在上调骨髓Notch信号通路主要基因表达的同时抑制肿瘤中部分基因表达。     

威麦宁对小鼠Lewis肺癌细胞周期的影响

目的复制小鼠Lewis肺癌模型,检测威麦宁的抑瘤率.方法采用流式细胞术分析、免疫组化法检测药物对模型鼠肿瘤细胞周期及对Cyclin D1表达的影响.结果威麦宁浓度在100、150、200、250 mg/(kg*d)时,对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为19.14%、33.59%、40.63%、51.56%, 药物对肿瘤的抑制作用具有剂量依赖性;药物可将肿瘤细胞阻滞在G0～G1期,并降低肿瘤细胞Cyclin D1的表达(P＜0.01).结论威麦宁可能是通过降低肿瘤细胞Cyclin D1的表达,将肿瘤细胞阻止于G0～G1期,使细胞不能进入S期进行DNA复制,从而抑制肿瘤的生长.     

丹参注射液对小鼠Lewis肺癌细胞周期素D1表达的影响

目的:观察丹参注射液对小鼠Lewis肺癌细胞周期素D1(Cyelin D1)的表达.方法:建立Lewis肺癌小鼠模型,用免疫组织化学方法检测丹参对肿瘤细胞Cyclin D1表达的影响,测肿瘤体积、瘤重.结果:生理盐水组Cyclin D1阳性表达率与丹参组和环磷酰胺组有显著性差异,而后两组差异无显著性.结论:丹参可抑制小鼠Lewis肺癌Cyclin D1的异常表达并抑制小鼠IJewis肺癌生长.     

苦参碱增强环磷酰胺抑制小鼠Lewis肺癌的生长作用

目的:研究苦参碱(Mat)的体内抗肿瘤活性及机制.方法:采用动物移植性肿瘤实验法,腋窝皮下接种Lewis瘤株,随机分为模型组,环磷酰胺(CTX)组,单用Mat 80,40,20 mg/kg不同剂量组,CTX联合Mat组.灌胃给药21 d后,计算平均抑瘤率,绘出肿瘤动态生长曲线,称小鼠体质量及各组肺、脾、肝、肾质量.应用放免法检测血清中表皮生长因子(EGF)含量.结果:单用Mat组对Lewis瘤株没有抑制作用(P>0.05).CTX联合Mat 80 mg/kg组,抑瘤率为56.78%,与CTX组抑瘤率42.69%相比较,抑瘤率升高,差异具有统计学意义(P<0.01).CTX联合Mat 80,20 mg/kg组血清中EGF浓度分别为(0.14±0.03),(0.11±0.02)mg/L,低于CTX组和模型组(P<0.01).结论:Mat可以增强CTX对小鼠Lewis肺癌的生长抑制作用,其町能机制与降低EGF有关.     

双黄升白颗粒在慢性丙型病毒性肝炎抗病毒治疗中升白细胞作用的临床研究

目的 探讨双黄升白颗粒预防性治疗慢性丙型病毒性肝炎干扰素抗病毒治疗所致白细胞计数减少的临床疗效。方法 选取2011年6月-2013年6月河南省中医院收治的慢性丙型病毒性肝炎患者62例,采用随机数字表法分为治疗组32例,对照组30例,分别于干扰素治疗开始同时服用双黄升白颗粒（15 g/次,3次/d）和利血生（20 mg/次,3次/d）,然后检测每组患者治疗前,治疗后2、4、8周外周血白细胞计数、中性粒细胞计数及骨髓抑制情况。结果 两组治疗前后白细胞计数和中性粒细胞计数比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;治疗方法与治疗时间存在交互作用（P＜0.05）;组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;时间间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组22例（73.3%）患者发生骨髓抑制,其中轻度14例、中度6例、重度2例|治疗组12例（37.5%）患者发生骨髓抑制,其中轻度9例、中度2例、重度1例。对照组骨髓抑制发生率高于治疗组（χ2=10.980,P=0.011）。结论 双黄升白颗粒预防性用药对于治疗干扰素所致白细胞计数减少较利血生效果好,同时所致骨髓抑制发生率更低,双黄升白颗粒是一种安全有效的预防干扰素所致白细胞计数减少的有效药物。     

肺岩宁对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织中核小体构象调控因子H3-K56、Rtt109、Asf1及E2F1表达的影响

目的:恶性肿瘤细胞具有异常的细胞周期.前期体内实验证实肺岩宁具有干预细胞周期G1/S检测点信号通路的作用,本研究进一步探讨肺岩宁对S期核小体构象调控因子表达的影响.方法:将60只小鼠随机分成正常组、模型组、顺铂组和肺岩宁组,每组15只.右腋部皮下注射Lewis细胞构建C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型.观察各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用流式细胞术检测细胞周期时相分布和增殖指数,实时聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测各组小鼠肺癌移植瘤细胞的核小体构象调控因子H3-K56、Ty1转座基因调节因子109(regulator of Ty1 transposition 109,Rtt109)、细胞反沉默功能因子1(antisilencing function 1,Asf1)、腺病毒E2启动子结合转录因子1(E2F1)mRNA和蛋白的表达.结果:肺岩宁组和顺铂组的瘤质量显著低于模型组(P＜0.01),抑瘤率分别为27.92％和42.50％.肺岩宁组癌细胞的增殖指数明显低于模型组和顺铂组,S期分布比例最少(P＜0.01).肺岩宁组H3-K56、Rtt109、Asf1、E2F1 mRNA和蛋白的表达较模型组显著下调(P＜0.05).结论:肺岩宁可能是通过影响核小体构象调控因子的表达干预异常细胞周期来发挥抗肺癌细胞生长增殖作用.     

穴贴扶正升白膏对化疗模型小鼠白细胞及骨髓的影响

用环磷酰胺 (Cyclophosphamide,CY)建造小鼠白细胞减少模型 ,自拟穴贴扶正升白膏 (主要药物 :人参、当归、丁香、肉桂、冰片、姜汁 )对模型进行穴位涂敷 ,检测外周血白细胞及分类计数、股骨髓有核细胞总数及骨髓细胞分类 ,证实穴贴扶正升白膏可减轻化疗药物所致的骨髓抑制 ,为本疗法的临床应用提供理论依据     

肺岩宁对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织中核小体构象调控因子H3．K56、Rttl09、Asfl及E2F1表达的影响

目的：恶性肿瘤细胞具有异常的细胞周期。前期体内实验证实肺岩宁具有干预细胞周期G,／S检测点信号通路的作用,本研究进一步探讨肺岩宁对S期核小体构象调控因子表达的影响。方法：将60只小鼠随机分成正常组、模型组、顺铂组和肺岩宁组,每组15只。右腋部皮下注射Lewis细胞构建C57BI．／6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型。观察各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用流式细胞术检测细胞周期时相分布和增殖指数,实时聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测各组小鼠肺癌移植瘤细胞的核小体构象调控因子H3-K56、Tyl转座基因调节因子109（regulatorofTyltransposition109,Rttl09）、细胞反沉默功能因子1（antisilencingfunction1,Asfl）、腺病毒E2启动子结合转录因子1（E2F1）mRNA和蛋白的表达。结果：肺岩宁组和顺铂组的瘤质量显著低于模型组（P〈0．01）,抑瘤率分别为27．92％和42．50％。肺岩宁组癌细胞的增殖指数明显低于模型组和顺铂组,S期分布比例最少（P〈0．01）。肺岩宁组H3-K56、Rttl09、Asfl、E2F1mRNA和蛋白的表达较模型组显著下调（P〈0．05）。结论：肺岩宁可能是通过影响核小体构象调控因子的表达干预异常细胞周期来发挥抗肺癌细胞生长增殖作用。     

37例肺鳞癌中细胞周期蛋白D1的表达及其与预后的关系

目的：研究肺鳞癌中细胞周期蛋白D1的表达及其与预后的关系。方法：采用免疫组化S－P法检测37例肺鳞癌组织中细胞周期蛋白D1的蛋白质表达水平，并研究其与临床及预后参数的关系。结果：细胞周期蛋白D1阳性组肿瘤直径100％大于3cm,肺门淋巴结转移率为52．6％，3年病死率为78．9％；阴性组肿瘤直径大于3cm者为61．6％，肺门淋巴结转移率为16．7％，3年病死率为38．9％，三者组间均有显著差异（P＜0．05）。结论：肺鳞癌中细胞周期蛋白D1的表达与年龄、性别、吸烟及组织学分级无关，与肿瘤大小、淋巴结转移及3年病死率有关。细胞周期蛋白D1参与肺鳞癌的发生、发展，其表达可作为独立的预后指标。     

蛋白激酶A调节亚基1α在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：研究蛋白激酶A调节亚基1α(cAMP-dependent protein kinase type I-alpha regulatory subunit,PRKAR1α)mRNA及蛋白在非小细胞肺癌中的表达并分析其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学测定79例非小细胞肺癌癌组织及癌旁正常肺组织内PRKAR1α mRNA和蛋白的表达情况,结合相关临床资料进行统计学分析。结果：PRKAR1α在非小细胞癌、肺腺癌、肺鳞癌的阴性表达率分别为58.2%,77.8%,32.4%。与癌旁正常肺组织相比,PRKAR1α在肺腺癌组织内mRNA及蛋白水平呈现低表达,差异有统计学意义(P<0.05);而肺鳞癌组织PRKAR1α mRNA及蛋白水平与正常癌旁肺组织相比差异无统计学意义(P>0.05)。与肺鳞癌相比,肺腺癌PRKAR1α阳性表达率明显下降(P<0.001);与TNM分期I~II比较,III~IV PRKAR1α阳性表达率明显降低(P=0.025);有淋巴结转移者PRKAR1α阳性表达率低于无淋巴结转移者(P=0.011)。不同年龄、性别、肿瘤分化及大小、是否吸烟组间PRKAR1α阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论：PRKAR1α在非小细胞肺癌不同组织病理学分型中具有差异表达;在肺腺癌内呈现低表达,与肺癌分期、淋巴结转移相关,可能成为临床诊断、治疗肺腺癌新的分子靶标。     

大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞M期阻滞及其机制研究

目的:探讨大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞M期阻滞作用及其机制。方法:以MTT比色法检测人胃癌细胞系SGC-7901细胞的增殖抑制率;采用免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜检测等技术,比较药物处理前后M期细胞占总细胞数百分比的变化,观察细胞微管结构及细胞周期蛋白B1(cyclin B1)在胞内分布的变化,并做荧光定量分析cyclin B1在用药前后量的改变。结果:大蒜素抑制SGC-7901细胞的24h IC50为7.2μg/ml,72h IC50为20μg/ml;经大蒜素处理后,M期细胞占总细胞数的30.61%,明显高于对照组的4.69%(P<0.05)。经大蒜素处理后细胞变小变圆,微管结构消失,胞质模糊;而对照组细胞形态正常,微管结构清晰完整。经大蒜素处理后,胞质中cyclin B1表达升高,并向核内聚集,cyclin B1荧光定量明显高于对照组(P<0.01)。结论:大蒜素可以促进微管解聚,可以提高促成熟因子(MPF)的重要成份cyclin B1在细胞内的表达并促进其向核内转移,使细胞周期阻滞于M期。大蒜素可以作为一种新的作用于M期的抗肿瘤药物应用于临床。     

肺复康对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤及细胞周期的影响

目的:观察肺复康对Lewis肺癌模型小鼠肿瘤及细胞周期的影响。方法:复制Lewis肺癌小鼠模型,将60只造模后的小鼠随机分成6组,每组10只,造模后次日开始给药,分别采用肺复康大中小剂量、紫杉醇以及肺复康联合紫杉醇对其进行治疗,观察小鼠的生存状态及肿瘤生长抑制率,通过流式细胞术分析Lewis肺癌移植瘤细胞周期。结果:肺复康大剂量组肿瘤生长抑制率为36%,高于肺复康小剂量组和中剂量组。与紫杉醇合用,肿瘤生长抑制率为60%,与模型对照组比较有较显著性差异(P<0.01)。细胞周期分析表明肺复康将肿瘤细胞阻滞于G1期。结论:肺复康能明显改善小鼠生存状态,并对Lewis肺癌移植瘤有显著抑制作用,其抗肿瘤作用可能与调控肿瘤细胞周期及诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的影响

目的：观察肺岩宁（Feiyanning,FYN）方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。 方法：建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组（肺岩宁加化疗组）。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。 结果：肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组（P〈0．05）,而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）． 结论：肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。     

人膀胱癌荷瘤鼠中shRNA沉默△Np63基因对肿瘤的抑制和 cyclin D_1表达的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默ΔNp63基因的表达,研究其对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型的抑瘤作用,同时检测ΔNp63基因被抑制后对细胞周期素D1(cyclin D1)表达的影响。方法建立人膀胱癌裸鼠皮下移植模型,构建ΔNp63基因特异性shRNA(short hairpin)表达质粒,将表达质粒转染荷瘤鼠瘤体。将符合实验条件的15只裸鼠分为3组:ΔNp63-shRNA组、Control-shRNA组与生理盐水组,每组5只。观察各组肿瘤生长情况、瘤组织超微结构的改变,检测ΔNp63基因和蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)和cyclin D1蛋白表达的变化。结果转染质粒8周后,ΔNp63-shRNA组与生理盐水组瘤体积有显著性差异(P<0.01),抑瘤率为74.44%,Control-shRNA组与生理盐水组体积无显著性差异(P>0.05)。病理结果显示ΔNp63-shRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞核分裂象减少,可见大量肿瘤细胞坏死和凋亡、炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示ΔNp63-shRNA组ΔNp63基因表达降低。免疫组化结果显示ΔNp63、PCNA、cyc-lin D...