应用微阵列芯片分析结肠癌组织中miRNA差异性表达

目的 分析结肠癌与正常结肠黏膜的微小RNA(miRNA)表达谱差异.方法 收集结肠癌组织和癌旁正常结肠黏膜共12对,抽提、纯化RNA,加入荧光标记后与miRNA寡核甘酸基因芯片(Affymetrix公司)杂交,应用SAM软件进行数据分析,对有显著差异的miRNA进行实时荧光定量PCR验证,采用靶基因分析软件分析miRNA功能.结果 has-miR-182、has-miR-17、has-miR-106a、has-miR-93、has-miR-200c、has-miR-92a、has-let-7a、has-miR-20a等8个miRNA在肿瘤组织中显著上调[中位假基因验出率(FDR)＜5%],has-miR-195、has-miR-143、has-miR-145等3个miRNA显著下调(FDR＜5%).结论 结肠癌与正常结肠黏膜之间存在明显的miRNA差异表达,这些miRNA的差异性表达可能与结肠癌的发病、侵袭、转移相关.     

慢性心力衰竭患者血浆miRNA表达谱分析

目的：对慢性心力衰竭(CHF)患者的血浆miRNA进行二代测序,探讨CHF患者血浆中miRNA的表达差异。方法收集2013年7月至2015年6月间在北京大学深圳医院治疗的40例CHF患者和10例健康对照个体,应用第二代高通量测序技术对其血浆miRNA进行测序,寻找差异表达的miRNA。另收集同期CHF患者和健康对照个体各96例,用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应对差异表达的miRNA进行验证。结果与健康对照者相比,高通量测序显示在CHF患者的血浆中miR-184、miR-651-5p、miR-130b-5p、miR-203a-3p、miR-548e-3p和miR-106a-5p的表达水平存在显著上调,miR-31-5p和miR-5091的表达水平存在下调,逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆miRNA的表达差异与高通量测序的结果相符。结论 CHF患者的血浆miRNA与健康个体的表达谱存在差异,差异表达的miR-184、miR-651-5p、miR-130b-5p、miR-203a-3p、miR-548e-3p、miR-106a-5p、miR-31-5p和miR-5091或许与CHF的发生有关。     

高通量测序分析miRNAs在胃癌新鲜组织与石蜡包埋组织中的表达

目的 利用二代测序技术对FFPE标本进行高通量测序及相关的生物信息学分析,探讨miRNAs在来源于石蜡包埋胃癌组织(FFPE)中的标本检测的可靠性,探讨其临床意义.方法 选取2015年和2016年2例胃癌患者手术切除同一组织的FFPE和新鲜冰冻标本,从标本中提取RNA并分离构建small RNA文库,采用Illumina测序平台测序的方法对其进行高通量测序,统计各已知miRNAs家族序列的表达量,构建已知miRNAs表达谱,对标本miRNAs进行Spearman相关性分析,评估miR-NAs表达量的差异变化情况.结果 新鲜冰冻标本中提取的总RNA质量较高,RNA保存度完整,显示28S是18S的1.3～1.4倍,从石蜡组中提取的RNA,结果显示有不同程度的降解,28S和18S的波峰不明显,miRNAs表达谱在冰冻和FFPE标本中,Spearman相关系数分别为0.90争0.86,两者miRNAs表达量较一致,具有相关性.结论 FFPE中的miRNAs仍然保持一定的完整性,且可通过二代测序进行肿瘤标本检测.     

miRNAs参与养血柔肝法治疗骨关节炎的生物信息学分析

目的 分析miRNAs在养血柔肝法“养血软坚胶囊”治疗骨关节炎中的生物学信息.方法 将40只SD大鼠进行前交叉切除(ACLT)造模成骨关节炎模型,模型验证造模成功后,随机分为模型组(n=20)和中药组(n=20).模型组不干预,中药组予大鼠灌胃饲养,药物采用养血柔肝法中成药养血软坚胶囊.4周后取材,提取关节软骨组织的RNA,制备文库,通过数据预处理、测序错误率分布检查、测序数据过滤、差异表达的miRNAs的鉴定、差异表达的miRNA的靶基因的鉴定、差异表达的miRNA的靶基因的功能分析、网络图构建等步骤,对差异表达的miRNAs进行数据分析.并RT-PCR验证所得结果.结果 中药组与模型组并共有35个miRNAs表达有差异.其中7个上调(共调控了1174个靶基因),28个下调(共调控了2216个靶基因);对差异miRNAs的靶基因进行蛋白互作网络分析(PPI)后,通过连接度最高的几个节点,获得了19个重要的靶基因.关节软骨中,中药组rno-miR-199a-5p、mo-miR-140-3p的表达高于模型组,中药组rno-miR-300-3p、mo-miR-9a-3p的表达低于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 养血柔肝法中药“养血软坚胶囊”可以调控骨关节炎大鼠模型的miR-199a-5p,miR-140-3p,miR-300-3p和miR-9a-3p等miRNAs.     

急性单核细胞白血病全基因组微小RNA的表达谱分析

目的研究急性单核细胞白血病（AMoL）全基因组的微小RNA（miRNA）表达谱。方法应用Illumina高通量测序技术对10 例AMoL 患者和10 例非恶性血液病患者骨髓样本的miRNA 表达水平进行检测,分析两者的表达差异,并通过茎环引物实时荧光定量PCR（Stem-loop qPCR）技术对部分Illumina 测序结果进行验证。结果两组样本共发现差异表达的miRNA 285个,其中,199 个miRNA 在AMoL组呈表达上调,86 个miRNA呈表达下调。6 个miRNA 的Stem-loop qPCR 验证结果与其测序结果具有相同的变化趋势。结论miR-126-3p 和miR-29b-3p 可作为潜在的分子靶点用于AMoL发病机制的进一步研究。     

喉鳞状细胞癌相关microRNA的筛选及功能鉴定

目的 采用生物信息学技术及第二代RNA测序技术检测喉鳞状细胞癌相关microRNA,通过筛选及功能鉴定,为喉癌特定且有意义的靶向基因治疗提供依据.方法 临床收集3组经术后病理证实为喉鳞状细胞癌患者的喉癌与癌旁组样本,并应用第二代RNA测序技术检测喉癌及癌旁组织中miRNA的表达情况.采用生物信息学技术,对差异表达miRNA进行分层类聚分析及筛选;随机选取1种差异的表达的miRNA(miR-106a-5p),采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证miR-106a-5p在30例喉癌及癌旁组织中的表达水平.结果 3组喉癌及癌旁组织样本经第二代RNA测序,共检测到1624种miRNA;经过火山图及聚类分析共得到显著差异表达的miRNA 44种,其中表达上调21种,表达下降23种;经过qRT-PCR结果显示,miR-106a-5p在30例喉癌组织样本中表达水平(5.71±1.65),显著高于癌旁组织(2.66±0.87),差异具有统计学意义(P<0.05).结论 通过生物信息学方法筛选出喉癌差异表达miRNA,其中miR-106a-5p在喉癌组织的表达水平明显高于癌旁组织,与第二代测序结果一致.     

PM2.5诱导大鼠肺组织miRNAs表达谱失调及相关信号通路变化研究

目的 探讨PM2.5诱导大鼠血清miRNAs表达谱失调及相关信号通路变化。方法 将40只6周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和PM2.5干预组［低剂量组(2.5 mg/kg)、中剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20 mg/kg)］，每组10只。麻醉满意后，PM2.5干预组大鼠分别经气管内滴注PM2.5混悬液2.5、10、20 mg/kg，对照组注射50 μL生理盐水，每3 d一次，连续干预70 d。实验结束后处死大鼠，收集肺组织进行病理学检查，并进行miRNA的RNA-seq 高通量测序。培养人支气管上皮细胞16 HBE，用100 μg/mL浓度的PM2.5处理16 HBE细胞24～48 h，模拟慢性暴露。利用miR-296-5p inhibitor及其阴性对照转染16 HBE细胞12 h后，进行PM2.5干预。Western blot检测Notch信号通路的改变。结果 与对照组比较，PM2.5干预组大鼠肺组织差异表达 miRNAs有67个，其中上调48个，下调的19个，表达量差异倍数高于5倍的有 4 个，即miR-296-5p、miR-27a、miR-182、miR-92a-1-p5，其中miR-296-5p上调了7.85倍，是表达差异最大的miRNA。与对照组比较，经PM2.5干预后，细胞中的Notch1蛋白、HES1蛋白表达量降低，Beclin1蛋白、cleaved-Caspase3蛋白表达量升高(P＜0.05)；与miRNA阴性对照组相比较，转染miR-296-5p inhibitor后，细胞中的Notch1蛋白，HES1蛋白、Beclin1蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05)。结论 暴露于PM2.5环境中，大鼠肺组织中miRNAs的表达谱发生了紊乱，以miR-296-5p的表达失衡最明显，且miR-296-5p的表达失衡可通过Notch信号通路发挥效应，影响肺上皮细胞功能。     

肾移植术后急性排斥反应期外周血中miRNA表达

目的:研究肾移植术后急性排斥反应期外周血中miRNAs的表达.方法:选取10个肾移植术后确诊发生急性排斥反应期的病例为观察组,均经肾穿刺病理证实,每个病例在急性排斥反应发生时抽取外周血;同期选取10例肾移植术后恢复良好、病情稳定患者抽取外周血作为对照组;Trizd法分离总RNA,采用miRCU-RYTMArray microarraykit试剂盒进行miRNA芯片杂交,经SAM软件选取差异表达有统计学意义的miRNA.结果:与对照组比较,在急性排斥反应患者外周血检测发现,miRNA芯片检测出4个miRNA(miR142-5p,miR146b-5b,miR155,miR223)表达上调,2个miRNA(miR125b,miR324-3b)表达下调.结论:外周血miRNAs表达水平改变可作为判断急性排斥反应发生的检测指标.     

膀胱尿路上皮癌患者血液中微小RNA的表达

目的:通过对膀胱肿瘤患者和非肿瘤患者的血液中微小RNA(microRNA)表达谱的检测,寻找特定的异常表达微小RNA,探讨血液中微小RNA作为膀胱尿路上皮癌早期诊断标记物的价值。方法:将确诊为膀胱尿路上皮癌的6例患者纳入此项研究,另外抽取7名非肿瘤患者血液作为对照组。提取血液中的小分子RNA(smallRNA),并通过高通量测序技术获取膀胱尿路上皮癌患者及对照组血液中微小RNA表达谱,然后利用SPSS17.0的t检验对上述高通量结果进行分析,找出实验组与对照组之间存在差异表达的微小RNA。结果:高通量测序筛选出一部分膀胱尿路上皮癌患者与对照组血液中存在差异表达的微小RNA,其中5个微小RNA上调(hsa-miR-378g、hsa-miR-942、hsa-miR-106a-5p、hsa-miR-142-3p和hsa-miR-374a),另外有许多微小RNA下调。结论:在膀胱尿路上皮癌和非肿瘤人群之间,血液中部分微小RNA的表达可能存在差异。     

脑缺血再灌注损伤后小分子RNA的分析

目的 检测假手术和脑缺血再灌注大鼠脑组织小分子RNA的差异表达。方法 选取假手术组(F)和脑缺血再灌注组(B)大鼠海马脑组织,提取小分子RNA,应用Solexa高通量测序技术进行深度测序,通过信息分析获得miRNA的表达情况。结果 F组和B组分别获得6833331和6407399个序列, 平均长度均为22nt。将原始数据与miRbase、Genbank和Rfam(9.1)数据库进行比对和分类注释。在F组和B组,miRNA总数分别占小分子RNA总数的76.77%和75.22%,两组间共有32种差异表达的miRNA,预测出新的候选miRNA 130条。结论Solexa测序是一种快速、全面地研究和发现小分子RNA的重要手段,筛选出的差异表达及候选miRNA可能参与脑缺血再灌注的发展。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.