黑素瘤抗原-3 基因及蛋白在非小细胞肺癌中的表达

目的 检测黑素瘤抗原-3(MAGE-3)mRNA及其编码的肿瘤抗原在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨以该抗原作为疫苗对NSCLC患者进行免疫治疗的可能性.方法 用RT-PCR方法和流式细胞术(FCM)对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-3 mRNA及蛋白的表达情况进行研究.结果 3种人肺癌细胞系均表达MAGE-3mRNA及蛋白;56例NSCLC标本中,30例表达MAGE-3 mRNA,26例表达MAGE-3蛋白,而相邻正常肺组织均不表达MAGE-3mRNA或蛋白.结论 MAGE-3 mRNA及蛋白在NSCLC中具有较高的表达频率,提示该抗原有望成为对NSCLC患者进行免疫治疗的适宜靶点.     

黑素瘤抗原-1基因在非小细胞肺癌中的表达

目的:检测黑素瘤抗原-1(MAGE-1) mRNA及其编码的肿瘤抗原在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨以该抗原作为疫苗对NSCLC患者进行免疫治疗的可能性.方法:用RT-PCR方法和流式细胞术(FCM)对3种人肺癌细胞系、56例NSCLC标本和相邻正常肺组织标本MAGE-1 mRNA及蛋白的表达情况进行检测.结果:MAGE-1 mRNA及蛋白在3种人肺癌细胞系均表达;56例NSCLC标本中,27例表达MAGE-1 mRNA,22例表达MAGE-1蛋白,而在相邻正常肺组织中均不表达.结论:MAGE-1 mRNA及蛋白在NSCLC中具有较高的表达频率,提示该抗原有望成为对NSCLC患者进行免疫治疗的适宜靶点.     

ELF3mRNA在淋巴结转移非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 ELF3(E74-like factor 3,ESE-1)是ETS家族的一员,研究发现其与多种肿瘤的发生和发展存在密切关系.本文主要通过研究ELF3mRNA在非小细胞肺癌组织和淋巴结中的表达,进而探讨ELF3与非小细胞肺癌组织及淋巴结转移之间的关系.方法 收集临床肺癌组织30例、对应淋巴结组织60例及20例正常肺组织和40例正常淋巴结组织,通过RT-PCR的方法来检测ELF3mRNA在非小细胞肺癌组织和淋巴结中的表达.结果 与正常肺组织和正常淋巴结组织相比,ELF3mRNA在非小细胞肺癌组织及对应淋巴结组织中表达均明显上调,两者之间均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ELF3基因的激活参与到非小细胞肺癌的发展过程中,并且其高表达与淋巴结转移存在一定关联性.     

Pim-3在非小细胞肺癌中的表达及临床意义探讨

目的探讨Pim-3在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义.方法选择非小细胞肺癌组织40例,同时选择肺脓肿及其他外伤肺切除的肺组织40例作为正常对照.采用免疫组化法检测肺癌组织和正常肺组织中的Pim-3阳性率,比较肺癌组织和正常肺组织中Pim-3的表达水平差异及不同病理特征肺癌组织中的Pim-3表达水平.流式细胞仪检测肺癌组织及正常肺组织中凋亡细胞的百分比.结果非小细胞肺癌组织中Pim-3的阳性率高达87.5%(35/40),明显高于正常肺组织中Pim-3的阳性率5%(2/40),P<0.05.非小细胞肺癌组织中细胞凋亡率明显低于正常肺组织(22%vs55.8%,P <0.05).结论 Pim-3的表达与非小细胞肺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、病理类型无关,与肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关.Pim-3高表达抑制非小细胞肺癌肿瘤细胞的凋亡,从而促进其发生与发展.     

Wnt信号通路在非小细胞肺癌组织中的活化

目的探讨Wnt-2、β-catenin和TCF-4在非小细胞肺癌组织中的表达特点及其与肺癌临床组织分型、分化程度以及与淋巴结转移的相关性。方法应用免疫组化SP方法检测45例非小细胞肺癌组织、10例癌旁正常组织中Wnt-2、β-catenin和TCF-4的表达情况;应用RT-PCR及Western blot技术分别检测这三个指标在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 （1）Wnt-2、β-catenin和TCF-4在非小细胞肺癌组织中表达阳性率分别为64.4%、75.6%和80%,β-catenin和TCF-4在低分化和中高分化间存在差异（P〈0.05）,β-catenin在淋巴结转移组间存在统计学差异（P〈0.05）;（2）定位于Wnt信号通路中的三个关键因子Wnt-2、β-catenin和TCF-4之间表达具有相关性。结论Wnt-2、β-catenin和TCF-4在非小细胞肺癌中异常高表达,提示其代表的Wnt信号通路活化。     

Cox-2和HNF-3β在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨环氧化物酶-2(Cox-2)和肝细胞核因子-3β(HNF-3β)在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测Cox-2和HNF-3β在60例非小细胞肺癌和50例癌旁正常肺组织中的表达情况。结果60例非小细胞肺癌中Cox-2和HNF-3β阳性率分别为78.33%(47/60)和18.00%(9/60),50例癌旁正常肺组织Cox-2和HNF-3β阳性率分别为35.00%(21/50)和84.00%(42/50)。Cox-2在非小细胞肺癌与癌旁正常肺组织中的阳性率比较,前者明显高于后者,HNF-3β的阳性表达率反而明显低于癌旁正常肺组织,Cox-2和HNF-3β蛋白表达呈负相关(P<0.05);Cox-2高表达和HNF-3β低表达与非小细胞肺癌TNM临床分期、病理类型、有无淋巴结转移及患者生存期呈显著相关(P<0.05)。结论 Cox-2和HNF-3β在非小细胞肺癌的发生、发展过程中起了重要作用,推测Cox-2和HNF-3β蛋白表达可共同作为非小细胞肺癌早期诊断、预后评估的生物学标志物。为进一步研究非小细胞肺癌的发生发展机制,探寻新的靶向治疗途径提出指导意义。     

非小细胞肺癌Bax蛋白表达及其与细胞凋亡和增殖的关系

①目的　探讨非小细胞肺癌Bax蛋白表达与细胞凋亡和增殖的关系。②方法　采用免疫组化SABC法 ,检测 4 3例非小细胞肺癌及 2 0例癌旁正常肺组织石蜡包埋标本Bax蛋白及增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 ;以PCNA标记细胞增殖指数 (MI)检测其增殖活性 ;用TUNEL法检测细胞凋亡 ,并计算细胞凋亡指数 (AI)。③结果肺癌组织Bax蛋白的表达显著低于癌旁正常肺组织 (χ2 =5 .6 5 3,P <0 .0 5 ) ;肺癌组织中AI和MI均明显高于癌旁正常肺细胞 (t′ =8.2 79、9.6 2 0 ,P <0 .0 0 1) ;Bax蛋白表达阳性的肺癌组织细胞AI明显高于Bax表达阴性细胞 (t=2 .6 17,P <0 .0 5 )。④结论　肺癌组织Bax蛋白表达下调 ,细胞增殖及凋亡均较活跃 ;Bax蛋白的过度表达具有促进肺癌细胞凋亡作用     

APE1在非小细胞肺癌中的表达特点及其与预后的关系

目的 探讨脱嘌呤/嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease, APE1) 在非小细胞肺癌中的表达特点及其与患者预后的关系.方法 应用免疫组化方法检测103例非小细胞肺癌组织和36例正常肺组织中APE1的表达情况,按染色强度将其分为低表达组和高表达组,并分析APE1在非小细胞肺癌表达情况与临床病理及患者预后的关系.结果 正常肺组织及肺癌组织均有APE1表达,但正常肺组织以细胞核表达为主,肺癌组织主要在细胞质表达;APE1的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移及组织类型无明显关系;生存分析显示APE1的表达强弱与患者的预后明显相关.结论 APE1蛋白表达增强与定位的改变与肺癌发生及发展有关,APE1基因表达增强可能是非小细胞肺癌患者预后不良的指标之一.     

G蛋白偶联受体激酶3在非小细胞肺癌组织中表达上调并促进HCC827细胞迁移

目的观察G蛋白偶联受体激酶3(GRK3)对人非小细胞肺癌细胞HCC827迁移能力的影响。方法运用Real time-PCR技术检测32例非小细胞肺癌及配对癌旁肺组织中GRK3转录水平的表达量并比较两者表达差异。构建慢病毒介导的shRNA-GRK3稳定细胞株,应用Transwell小室分析GRK3对非小细胞肺癌HCC827细胞迁移能力的影响。结果 32例非小细胞肺癌中GRK3 mRNA表达水平ΔCt为11.09±1.04,在正常肺组织中ΔCt为21.87±1.33,非小细胞肺癌组织中GRK3基因表达水平显著高于配对癌旁肺组织(P<0.05)。体外细胞Transwell迁移实验结果显示,下调GRK3的表达可显著抑制非小细胞肺癌HCC827细胞的迁移能力,shRNAGRK3组与Negative Control组、亲本细胞组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GRK3在非小细胞肺癌组织中异常高表达,可促进非小细胞肺癌HCC827细胞迁移,可能在非小细胞肺癌进展中发挥重要作用。     

STAT3与WWOX在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：研究STAT3与WWOX在非小细胞肺癌及肺正常组织中的表达及两者之间的关系。方法：应用免疫组织化学S-P法,检测STAT3、WWOX在40例非小细胞肺癌组织、20例正常肺组织中的表达情况,并分析其与各临床病理指标之间的关系。结果：①STAT3在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于肺正常组织（P〈0.01）,WWOX在非小细胞肺癌组织中的表达明显低于肺正常组织（P〈0.01）。②STAT3在腺癌组织中的表达明显高于鳞癌（P〈0.01）,WWOX基因的表达与淋巴结转移相关（P〈0.01）,在有淋巴结转移的肺癌组织,其表达更少或缺失。③STAT3蛋白与WWOX在非小细胞肺癌中的表达呈负相关（P〈0.01）。结论：①非小细胞肺癌中有组成性激活的STAT3信号通路,提示STAT3信号通路在非小细胞肺癌发生、发展中发挥重要作用;②STAT3与WWOX在非小细胞肺癌中的表达呈负相关。     

乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用

目的：观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0．5g／L、1g／L、5g／L、10g／L、15g／L、20g／L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变。结果：乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0．412,r=0．339．P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0．753,P均=0．000)关系、5g／L乌苯美司作用48h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变。结论：乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长。     

Vav3 在小细胞肺癌组织中的表达及 对细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨Vav3 在小细胞肺癌（SCLC）组织中的表达及对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 选 取SCLC 患者87 例及同期因肺外伤行手术治疗的正常肺组织50 例作为对照组,免疫组织化学（免疫组化）检 测SCLC 和对照组组织中Vav3 蛋白的表达,培养人小细胞肺癌H446 细胞并分为siRNA-Vav3 组、siRNA- 对 照序列组和空白组,实时荧光定量PCR 技术检测各组细胞中Vav 3 基因表达,划痕实验检测各组细胞迁移能 力,Transwell 法检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果 SCLC 组织中Vav3 蛋白阳性表达率为81.6%,高于对照 组的14.0%（χ2=17.739,P =0.000）;SCLC 组织中Vav3 蛋白表达与临床分期、远处转移和生存状态有关（P = 0.024、0.016 和0.014）;Vav3 蛋白阳性表达组患者平均生存时间23.14 个月,而阴性表达组则为44.89 个月,差 异有统计学意义（χ2=6.280,P =0.012）;siRNA-Vav3 组细胞中Vav3 mRNA 相对表达量低于siRNA- 对照序列 组和空白组（P=0.000）;siRNA-Vav3 组细胞24 h 后划痕愈合率低于siRNA- 对照序列组和空白组,siRNAVav3 组迁移细胞数低于siRNA- 对照序列组和空白组（P =0.000）;siRNA-Vav3 组侵袭细胞数低于siRNA- 对 照序列组和空白组（P =0.000）。结论 Vav3 蛋白在SCLC 组织中呈高表达,且与患者预后相关,特异性沉默 SCLC 细胞中Vav3 基因可抑制细胞迁移和侵袭能力。     

肝再生磷酸酶3对肾透明细胞癌细胞A-498的影响

[目的]研究肝再生磷酸酶3 (phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3)对肾透明细胞癌(clear cell renal cell cancinoma.CCRCC)细胞A-498的影响.[方法]本实验以肾透明细胞癌细胞A-498为实验对象,采用siRNA干涉的方法下调A-498中PRL-3表达水平,以不做任何处理为空白对照组,脂质体加随机序列的siRNA为阴性对照组,脂质体加siRNA处理组为实验组,之后通过RT-PCR及Western blotting方法检测siRNA干涉效率,绘制细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡以观察下调PRL-3对A-498细胞的影响.[结果]同阴性对照组相比,本实验所设计的siRNA能够下调PRL-3在A498细胞中的表达,其中siRNA2干涉效率更高,细胞生长曲线显示自siRNA转染60h开始,下调PRL-3能够抑制细胞的生长(P＜0.01),流式细胞仪检测发现转染72h后,下调PRL-3的表达可以促进A-498细胞G1期阻滞,S期减少,凋亡增加(P＜0.05).[结论]下调PRL-3能够明显抑制A498细胞的增殖,PRL-3很可能成为肾透明细胞癌基因治疗的新靶点.     

肾上腺髓质素对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响

目的观察肾上腺髓质素（AM）对体外培养的人上皮性浆液性卵巢癌细胞株（CAOV3细胞）增殖的影响。方法将CAOV3细胞进行体外培养,以不同浓度的AM（1-52）（1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L）分别处理CAOV3细胞24小时、48小时、72小时,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞的增殖率。结果在AM（1-52）浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L时均可促进CAOV3细胞增殖（P〈0.05）,随着AM（1-52）浓度的增高及作用时间的延长细胞的增殖率呈增高趋势（P〈0.05）。结论AM能促进CAOV3细胞的增殖。     

BNIP3在肾透明细胞癌中的表达及其与HIF-1α、VEGF的相关性研究

目的探讨促凋亡蛋白BNIP3在原发性肾透明细胞癌中的表达及其与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性。方法联合应用组织芯片技术和Envision二步免疫组化技术检测104例肾透明细胞癌及48例癌旁正常肾组织中BNIP3、HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平,并分析肾癌中BNIP3表达与HIF-1α、VEGF的相关性。结果 BNIP3、HIF-1α及VEGF在肾透明细胞癌中的阳性表达率分别为36.5%、61.5%和69.2%,在癌旁正常肾组织中的阳性表达率分别为12.5%、8.3%和12.5%。在BNIP3阳性和阴性表达组中,HIF-1α、VEGF的阳性率之间差异无统计学意义(P>0.05),VEGF阳性组与阴性组中HIF-1α的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05),且两者之间的表达有相关性。结论 BNIP3在透明细胞癌中有所表达,但多数为低表达,且与HIF-1α和VEGF的表达无相关性。     

Caspase-3与肝癌细胞凋亡

参与肝癌细胞凋亡的信号传导及调控因素很多。目前认为caspase-3蛋白酶在凋亡的信号传导中起重要作用。caspase-3的活化过程极为复杂，受多种因素调控，存在不同的活化途径，而且不同的活化途径存在着相互串话(crosstalk)。诸多调控细胞凋亡的因素可通过caspase-3蛋白酶起作用，caspase-3的抑制剂通过抑制caspase-3的活化和降低caspase-3的活性，而抑制肝癌细胞凋亡。     

阳离子脂质体介导神经营养因子-3在大鼠雪旺细胞中的表达

目的观察阳离子脂质体转染神经营养因子-3（Neurotrophin-3,NT-3）基因在大鼠雪旺细胞（schwann cell,SC）的表达和提高SC细胞分泌NT-3的能力。方法采用阳离子脂质体介入法,将脂质体转染酶介导的NT-3转染至SC细胞,以转染后及未转染作为实验组和对照组,于转染后1、2、4、8周用ELISA双抗体夹心法测定NT-3蛋白的表达,采用DNA酶切鉴定转染后NT-3的DNA,免疫组化S-100染色法检测转染前后SC纯度。电镜下观察转染后SC细胞结构。结果转染后2、4、8周NT-3蛋白表达量与转染前比较差异有统计学意义（P〈0.05）。转染后NT-3的DNA酶切鉴定结果与NT-3基因片段相符。转染前后SC纯度分别为（94.1±2.3）%及（95.8±2.1）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 NT-3基因可转染培养的SC并高效表达。SC作为受体细胞易于获取并能在体外大量培养繁殖,能较长时间稳定大量表达所携带基因而不衰减。     

3D-CRT联合DC-CIK细胞治疗高原地区复发性小细胞肺癌的疗效观察

目的：探讨三维适型放疗（3D‐CRT ）联合树突状细胞‐细胞因子诱导的杀伤细胞（DC‐CIK ）回输治疗高原地区复发性小细胞肺癌（SCLC）的临床疗效,以及对血管内皮生长因子（VEGF）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响。方法选取2012年5月至2014年4月青海省第五人民医院肿瘤放疗科收治的复发性SCLC患者85例,按随机数字表法分为对照组（41例）与观察组（44例）,分别给予单纯3D‐CRT治疗,3D‐CRT联合DC‐CIK细胞治疗,比较两组的疗效、不良反应发生率、治疗前后VEGF及N S E水平,并观察治疗前后两组各项肝、肾功能指标变化。结果观察组的有效率（65．9％）及疾病控制率（79．5％）均高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。两组治疗4、8周后,血清VEGF、NSE水平及疼痛评分均下降,差异均有统计学意义（P＜0．05）;治疗8周后,观察组VEGF、NSE水平及疼痛评分均低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。两组各项不良反应发生率比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。两组治疗前及治疗后各项肝、肾功能指标水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论3D‐CRT联合DC‐CIK细胞生物治疗高原地区复发性 SCLC的疗效更明显,且对放（化）疗不良反应及肝、肾功能无明显影响。     

钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖影响的研究

目的探讨不同浓度钒化钠(sodium vanadate,SV)对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖作用的影响。方法将培养的NIH3T3细胞给予不同浓度及时间的SV刺激,以噻唑蓝(MTT)比色法检测小鼠成纤维NIH3T3细胞增殖及增殖抑制情况。结果与对照组比较,0.1μM对细胞增殖无影响(P>0.05);1.0、5.0、10.0μM SV可以促进细胞增殖,而200μM SV抑制其增殖(P<0.01),不同处理时间变化趋势一致;100μM SV对细胞作用随处理时间不同而不同。结论SV对NIH3T3细胞增殖作用因处理剂量和时间不同而呈现差异。     

AsI_3-Tu与RNA诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的探讨新型砷剂配合物碘化砷-硫脲(AsI3-Tu)与RNA联用对HL-60细胞凋亡的影响。方法应用四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖,倒置显微镜观察细胞形态学变化、凯氏定氮法测定细胞蛋白质的含量、流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果①1-16/μmol/LAsI3-Tu对HL-60细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。②RNA能增强AsI3-Tu对HL-60细胞增殖的抑制作用。结论AsI3-Tu能有效诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡,RNA与AsI3-Tu联合应用能增强AsI3-Tu的作用。