产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及耐药性观察

目的：调查大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况，观察其耐药性，指导用药。方法：应用复合纸片表型确证试验及双纸片协同试验，检测105株大肠埃希菌和47株肺炎克雷伯菌的ESBLs。体外抗生素敏感性试验应用肉汤数量稀释法。结果：大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs阳性率为17.1%和31.9％。确证试验检测 阳性率为21.7％，双纸片协同法阳性率为19.1%。产酶菌株对青霉素类、头孢菌素类及氨曲南的耐药率达66.7%-100.0%,明显高于非产酶菌株5.7％-59.8％。阳性菌株对氨基甙类、氟喹诺酮类、磺胺类的交叉耐药率达44.4％-93.3%。对头孢西丁和氨苄西林/舒巴坦的耐药率分别为33.3％-38.9％和61.1％-73.3%。所有受试菌对亚妥培南敏感。头孢噻肟为本地检测ESBLs最适底物。结论：及时、准确地检测ESBLs，合理使用抗菌药物，显得十分迫切和必要。     

临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：检测临床分离的临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株的发生率、耐药性、流行性以及酶的基因型别。方法：采用双纸片法、琼脂稀释法、PCR、脉冲场电泳对1999年复旦大学附属华山医院临床分离的559株肺克雷伯菌和427株大肠埃希菌进行检测。结果：肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产ESBL菌株的发生率分别为51％和23.6％,产ESBL菌株主要分布于ICU和神经外科病房,对大多数的β-内酰胺酶和非β-内酰胺类抗菌药物耐药;PFGE显示,产ESBL菌株（尤其是产ESBL肺炎克雷伯菌株）在ICU病房中存在同一菌株的克隆传播;PCR检测显示TEM型是最为常见的β-内酰胺酶型别,CTX-M型ESBL亦较为普遍。结论：产ESBL菌株在临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中较为普遍,而且为多重耐药菌株,在医院内中存在流行与传播。     

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶检测与分析

目的：掌握肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中超广谱β－内酰胺酶发生率及对多种抗生素耐药现状,比较三种检测方法。方法：按美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）1999年版推荐的纸片扩散法的筛选试验和试验,同时以非NCCLS推荐的双纸片协同法检测超广谱β－内酰胺酶。结果：超广谱β－内酰胺酶发生率肺炎克雷伯菌35．8％,大肠埃希菌34．1％。超广谱酶林对多种抗生素耐药率高。确证试验与协同试验相符率高。结论：本院肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌超广谱β－内酰胺酶发生率高,临床应慎用第三代头孢菌素和氨曲南。筛选法可疑株必须做确证试验。协同试验直观,便于观察,有一定的漏检率和误检率。纸片间距离问题不宜规定统一标准。     

尿路感染产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药特征分析

目的：分析尿路感染产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率及耐药特点。方法对2011～2012年尿路感染患者尿培养中分离到的细菌进行培养鉴定和药敏实验,并对产ESBLs耐药表型的菌株用双纸片法进行确证。结果1189株尿路感染菌株中分离到大肠埃希菌547株（46．0％）,肺炎克雷伯菌81株（6．8％）,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs检出率为64．4％和64．2％。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均对头孢替坦、亚胺培南、美洛培南敏感率较高（均超过90％）,产ESBLs肺炎克雷伯菌对呋喃妥因、头孢比肟和阿米卡星敏感率（分别为14．9％、41．7％、77．1％）显著低于产ESBLs大肠埃希菌（77．3％、66．8％、95．8％）,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论大肠埃希菌是尿路感染的主要致病菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs检出率均较高且具多重耐药特征。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌耐药性分析及对策

目的　了解临床肺炎克雷伯菌 (Kpn)、大肠埃希菌 (Eco)及其产超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL)菌株的耐药情况。 方法　应用Micro -Scan .autoSCAN - 4全自动微生物分析系统进行细菌分离、鉴定。药敏试验采用微量肉汤稀释法测定MIC。ESBL检测按照NCCLS1 999年推荐的标准进行确认试验。结果　分离出Kpn 2 1 4株 ,Eco 40 8株。ESBL阳性率 :Kpn为 2 6 .1 7% (56/ 2 1 4 ) ,Eco为 2 7.94% (1 1 4 / 4 0 8)。产ESBL菌株对氨苄西林、哌拉西林、氨曲南、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢他啶、头孢曲松等耐药率在 97.4%～ 1 0 0 % ,对所有头孢类抗生素的耐药性与非产ESBL菌株比较差异有高度显著性。结论　产ESBL菌株耐药严重 ,临床上治疗上述两种细菌感染的疾病时 ,使用抗生素应注意产酶株的发生及对 β-内酰胺类抗生素广泛耐药问题 ,同时医院应采取有效措施 ,控制ESBL院内的传播与流行     

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶及耐药性监测

目的 :对本院 2 0 0 1年 7月至 2 0 0 2年 5月收集到的 2 0 0株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLS阳性菌进行研究 ,了解超广谱 β -内酰胺酶的三种检测技术及其产ESBLS耐药现状。方法 :对2 0 0株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌用VITEKAMS32测定ESBLS ,同时用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐纸片筛选法和确认法进行对照监测。结果 :仪器法、确认法、纸片筛选法检测ESBLS菌株阳性率分别为 18.97%、18.5 8%、16 .4 1% ,产ESBLS菌对大多数抗生素的耐药率显著高于非产ESBLS菌 ,且多重耐药显著 ,但对泰能均敏感。结论 :ESBLS菌阳性率高 ,耐药性强 ,耐药谱广 ,临床检验室应重视对其选择准确快速的检测方法     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶菌的产生及耐药性分析

超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的产生和传递是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因之一，而ESBLs主要存在于大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中.为了解我院ESBLs的产生及耐药情况，我们对从标本中分离得到的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌作了ESBLs检测及分析，报道如下.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的：了解临床大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及产超广谱内酰胺的情况以及对常用抗生素的耐药现状,为临床合理用药提供依据。方法：从临床送检标本中分离出200株用ATB-New微生物分析仪及配套试条进行菌种鉴定,药敏试验采用K-B法,按美国临床实验室标准化委员会制定的标准判定结果。结果：200株细菌产ESBLs菌株61株（30.5%）。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率分别为37.2%、18.3%。亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星是治疗ESBLs菌引起感染的有效抗生素。结论：坚持细菌耐药性监测,对指导临床合理有效地应用抗菌药物,积极控制感染有重要意义。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型及流行病学分析

目的：研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产质粒型AmpC酶株的比率、酶的基因型及其流行病学状况。方法：收集本院、福建省立医院两家医院2004年9月至2005年3月的67株耐头孢西丁不重复大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，用酶提取物三维试验检测高产AmpC酶；抽提高产AmpC酶株质粒。用聚合酶链式反应（PCR）及产物序列分析确定质粒AmpC酶和β内酰胺酶的基因型；质粒转化试验定位耐药基因；ERIC—PCR指纹图确定产酶株间的同源关系。结果：福州两家医院耐头孢西丁菌中产质粒型AmpC酶的发生率，大肠埃希菌分别为16．7％和10．5％。肺炎克雷伯菌则分别为8％和0。2株肺炎克雷伯菌产DHA-1型、4株大肠埃希菌产CMY-2型、1株大肠埃希菌产CMY-22型质粒Am—pC酶；5株产CMY型AmpC酶的大肠埃希菌还分别同时产CTX—M-14、CTX—M-27、TEM-144和TEM-1型β内酰胺酶。7株菌中，1株肺炎克雷伯菌和3株大肠埃希菌可将头孢西丁耐药性转移给受体菌。7株产酶菌ERIC—PCR指纹图显示，2株肺炎克雷伯菌来自相同克隆，其余菌株来自不同克隆。结论：福州地区发现产DHA-1型AmpC酶肺炎克雷伯菌和产CMY-2型及CMY-22型AmtpC酶大肠埃希菌。CMY-22型AmpC酶和TEM-144型B内酰胺酶是国内外首次报道，GenBank登陆号为DQ256079和DQ256080。     

227株产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的 了解阳江地区产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌耐药状况。方法 用纸片扩散法做药敏试验。按NCCLS（1999年）标准进行确证试验来检测确认ESBLs。结果 从145株大肠埃希菌检出产ESBLs40株，占27．6％，82株肺炎克雷伯菌检出产ESBLs29株，占35．4％，其中院内感染29株。69株产ESBLs菌除对亚胺培南100％敏感外，对三代头孢菌素、青霉素类及氨曲南（单环β-内酰胺类抗生素）高度耐药。耐药率达100％，对四代头孢菌素（头孢吡肟）耐药率也在40％以上，产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对庆大霉素、阿米卡星、磷霉素的耐药率有差别，分别为100％和86％、37．5％和82.7％、42．5％和86．2％．对加酶抑制剂抗生素CFS（头孢哌酮／舒巴坦）耐药率也不同，为20.0％和10．3％。结论 阳江市产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对临床常用抗生素耐药严重，亚胺培南是治疗产ESBLs菌感染的最有效抗生素，其次是头孢哌酮／舒巴坦。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmPC酶和ESBLs的检测及耐药性

目的了解急性阑尾炎患者阑尾残端脓液分离出大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和ESBLs的情况及耐药性。方法采用纸片扩散确证法检测ESBLs，酶提取物三维试验方法检测AmpC酶。结果180株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中检出单产ESBLs43株、单产AmpC酶17株、同时产AmpC酶和ESBLs 10株，检出率分别为23．9％、9．4％和5．6％；产酶菌株对15种抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论阑尾残端脓液分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

儿童医院和社区获得性肺炎大肠埃希菌产ESBLs率和耐药性分析

目的分析医院获得性肺炎(HAP)和社区获得性肺炎(CAP)患儿分离大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检出率和对不同抗菌药物的耐药性。方法分别采用双纸片协同试验和药物敏感试验检测400株大肠埃希菌株产ESBLs检出率和耐药性。结果 HAP患儿分离株产ESBLs率明显高于CAP患儿分离株(P<0.01)。不产ESBLs株对14种抗菌药物耐药率明显低于产ESBLs株。亚胺培南对所有菌株敏感,HAP患儿分离株对其余13种抗菌药物耐药率均高于CAP患儿分离株。结论大肠埃希菌产ESBLs率和对多数抗菌药物耐药率都很高,其中HAP患者更严重;应加强监测,合理使用抗菌药物,减少医院感染。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分型及耐药分析

[目的]了解大连市中心医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药基因型及耐药情况。[方法]收集该院2005年11月-2006年2月连续不重复产ESBLs大肠埃希菌40株,采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的表型确认方法进行筛选。在此基础上,分别用针对TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ型β-内酰胺酶基因的六对特异性引物对每株细菌进行聚合酶链反应（PCR）,毛细管电泳方法检测所有产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因。应用K-B纸片扩散法检测产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素的耐药性。[结果]毛细管电泳结果显示,40株产ESBLs大肠埃希菌中,仅携带一种基因型的分别为SHV型1株（2.50%）,CTX-M-Ⅰ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅱ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅲ型2株（5.00%）,CTX-M-Ⅳ型4株（10.00%）。有18株（46.15%）同时携带两种或两种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型共同存在;药物敏感试验结果显示,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素均表现出较高的耐药性,对碳青霉烯类药物（亚胺培南和美洛培南）的耐药率最低。[结论]该院产ESBLs大肠埃希菌近期流行的主要基因型别为CTX-M型,而且多基因携带情况常见;碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物。     

产ESBL大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性特点

目的了解某综合医院产ESBL大肠埃希菌(ESBL-EC)和肺炎克雷伯菌(ESBL-KP)耐药性的变迁。方法分析该医院2010-2011年临床微生物室上报医院感染控制科ESBL-EC及ESBL-KP对常用抗菌药物的耐药性变迁数据。结果碳青霉烯类亚胺培南-西司他丁对ESBL-EC及ESBL-KP保持完全敏感,头孢西丁及阿米卡星对ESBL-EC及ESBL-KP均有良好的敏感性(>80%),头孢他啶及头孢吡肟耐药率逐年下降,但ESBL-EC及ESBL-KP对大多数β-内酰胺类药(氨苄西林,哌拉西林,替卡西林,头孢唑林,头孢曲松,头孢噻肟,头孢哌酮)完全耐药。含酶抑制剂对ESBL-EC保持了较优的敏感率(>92%),对ESBL-KP敏感性则降低(头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦敏感率分别介于50%～89%与67%～92%之间)。左氧氟沙星的耐药率维持在高位(对ESBL-EC耐药率介于57%～81%之间,对ESBL-KP耐药率介于16%～41%之间)。结论根据药敏试验结果选择用药是提高临床抗感染治疗成功率及延缓细菌耐药的基本原则之一。碳青霉烯类目前仍然是治疗ESBL-EC及ESBL-KP的首选药物,含酶抑制剂及四代头孢类药头孢吡肟加阿米卡星依然是较优的选择。     

219株大肠埃希菌耐药性分析及产ESBLs酶的检测

目的分析近年来本院临床分离大肠埃希菌的耐药状况以及ESBLs酶和AmpC酶的检出情况,为临床合理使用抗生素提供可靠的实验依据。方法收集本院2004年1月-2008年12月5年间各种临床标本中分离的大肠埃希菌219株,应用API细菌鉴定系统进行鉴定,并用K-B法进行药敏实验,同时,运用CLSI推荐方法检测ESBk酶和AmpC酶。结果大肠埃希菌对泰能、哌拉西林／三唑巴坦、头孢吡肟、头孢他啶敏感,耐药率分别为5.02％、24.66％、21.46％、26.27％,对阿莫西林、氨苄西林、复方新诺明、妥布霉素、氧氟沙星的耐药率均〉70％。结论临床分离大肠埃希菌耐药率和耐药性逐渐增强,临床应结合药敏结果合理使用抗生素,减少其耐药菌株的扩散,产ESBLs和AmpC酶大肠埃希菌的检出应引起临床高度重视。     

大肠埃希菌中共存两种携带ampC和/或超广谱β-内酰胺酶基因的质粒

目的：探讨从临床分离的大肠埃希菌（E．coli）中，由质粒编码的ampC和／或超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因质粒携带方式。方法：三维实验证实产AmpC酶的42株E．coli，用E．coliC600作为接合受体菌，采用头孢曲松和头孢他啶／头孢噻肟／棒酸两步淘筛法，进行对第三代头孢菌素耐药性的传递实验：用PCR法扩增质粒编码的ampC和ESBLs基因、三维酶实验和抗生素敏感实验对供体菌和接合子进行对比。结果：接合实验显示，有37侏供体菌对第三代头孢菌素的耐药性可传递，传递频率为10^-7～10^-5。其中23株菌仅传递了ESBLs耐药性，3株菌仅传递AmpC耐药性，11株菌传递了AmpC／ESBLs两种耐药性11株菌中，7株菌的AmpC／ESBLs耐药性携带在同一质粒上；另有4株菌各得到两种接合子，其中2株均得到携带ESBL耐药性和AmpC／ESBLs耐药性的2类接合子，2株均得到携带AmpC耐药性和ESBL耐药性的2类接合子结论：在同时表达AmpC和ESBLs两种酶的E．coli中，有些菌不能通过接合传递实验将两种耐药性分开传递，有些可分开传递。当AmpC和／或ESBLs耐药性基因在同一细菌中南2个质粒携带时，可在接合实验中得到两种不同的接合子。     

儿童患者中检出产ESBLs大肠埃希菌的耐药性和基因分型

目的了解本地区儿童患者临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药基因型别和耐药性的变化情况。方法收集自儿童患者分离鉴定的大肠埃希菌株1327株，通过K-B法作药敏试验，采用美国NCCLS1999年推荐的抑制剂增强纸片法确认产ESBLs株，并对ESBLs进行初步基因分型。结果检出产ESBLs菌株702株，检出率为52．9％，产ESBLs大肠埃希菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为55．5％。95．0％；PCR初步分型结果，单独携带TEM型基因的占56．7％，单独携带SHV型基因的占15．0％，携带两种基因的占25．8％。结论产ESBLs大肠埃希菌检出率逐年上升，具有多重耐药的特点；产ESBLs大肠埃希菌主要携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因，其中绝大部分产TEM型β-内酰胺酶。     

大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸耐药机制的研究

目的探讨大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸的耐药特点和机制,从而为临床合理用药及减少耐药的发生和耐药基因传播提供实验研究依据。方法将对氨苄西林／舒巴坦耐药的大肠埃希菌544株,随机选取276株进行阿莫西林／克拉维酸纸片的筛查,对筛出的耐药菌株采用琼脂对倍稀释法进行MIC值测定和PCR扩增分析。对符合耐酶抑制剂β-内酰胺酶耐药表型的大肠埃希菌进行TEM型β-内酰胺酶基因的克隆表达。采用多重PCR技术对耐阿莫西林／克拉维酸大肠埃希菌进行TEM、SHV、OXA型三种β-内酰胺酶的筛查。结果TEM型46株,SHV型1株,0xA型6株,TEM型和SHV型均阳性1株,TEM型和OXA型均阳性5株。产TEM型β-内酰胺酶中TEM-1型最常见,耐酶抑制剂TEM型β-内酰胺酶（IRT）未发现。结论TEM-1型广谱酶的高产是华西医院大肠埃希菌对阿莫西林／克拉维酸耐药主要机制,本研究首次在西南地区发现OXA-1,是造成耐药的重要原因。     

ChromID ESBLs显色培养基的临床应用评价

目的评价超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)显色培养基对患者标本中携带ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等细菌的快速筛选作用。方法将患者的肛拭子标本接种ESBLs显色培养基,对平板上生长的细菌做鉴定和双纸片增效确认实验。结果显色平板为紫红色的菌株中大肠埃希菌为98.3%,且100%为ESBLs确证阳性;显色平板为绿色的菌株中仅73.3%为肺炎克雷伯菌,90.1%为ESBLs确证阳性。119株中有24株无色细菌和5株棕色细菌,其中2株ESBLs确证为阴性。结论 ChromID ESBLs显色培养基能快速检测筛选ESBLs阳性的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌,对控制院内感染、指导临床合理使用抗菌药物有积极意义,但是鉴定到种需加以生化反应,ESBLs株必须附加试验进行确定。