乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α表达影响的研究

目的 初步研究乏氧对人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α表达水平的影响.方法 将处于对数生长期的Tca8113细胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合气体的乏氧培养箱内培养,分别在乏氧培养1/2、1、3、6、12和24 h时取出.每个时间段均设常氧培养对照组(5%CO2、95%O2).采用RT-PCR技术检测不同培养条件下细胞HIF-1α mRNA的表达情况.结果 HIF-1α的表达在乏氧12 h明显升高并达最高峰,24 h时又下降至常氧水平.每个时间段乏氧组HIF-1α的表达均高于其相应的常氧对照组.结论 乏氧影响了人舌鳞癌Tca8113细胞HIF-1α基因的表达水平,肿瘤细胞通过上调HIF-1α基因的表达适应肿瘤乏氧的微环境,有利于肿瘤的发生与发展.     

乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响

[目的]探讨乏氧条件下紫杉醇对SPCA1肺癌细胞的影响及其机制。[方法]MTT法检测常氧和乏氧条件下紫杉醇对SPCA1细胞的毒性作用;流式细胞术检测紫杉醇对SPCA1细胞周期和凋亡的影响。采用定量RT-PCR和Western Blotting观察SPCA1细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、多药耐药基因-1（Mdr-1）mRNA和P-糖蛋白（P-gp）的表达变化。[结果]常氧和乏氧条件下,紫杉醇对SPCA1细胞的IC50分别为8．45μmol／L和18．17μmol／L（P〈0．05）,乏氧时紫杉醇诱导SPCA1细胞凋亡较常氧条件下明显减少（P〈0．05）,但乏氧对细胞周期无明显影响。乏氧能明显增加HIF-1α蛋白表达,但对Mdr-1mRNA和P-gp蛋白表达无明显影响。[结论]乏氧诱导SPCA1细胞对紫杉醇耐药,但Mdr-1可能不是乏氧诱导耐药的主要因素之一,乏氧条件下SPCA1细胞耐药可能还存在其他机制。     

辐射诱导乏氧HeLa细胞HIF-1α和DNA-PK相互调控机制的研究

目的初步探讨辐射效应诱导下乏氧人宫颈癌细胞系HeLa细胞乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）和DNA依赖蛋白激酶（DNA—PK）表达相关性及其调控机制。方法免疫印迹法检测乏氧状态下HeLa细胞接受射线照射后HIF-1α和DNA—PK（包括DNA—PKcs及Ku80）表达情况;运用靶向抑制HIF-1α或DNA—PKcs的小发卡样干扰RNA（shRNA）表达质粒分别转染乏氧HeLa细胞,经辐射诱导后检测不同时间点各自DNA—PKcs或HIF-1α表达的变化。结果乏氧HeLa细胞经辐射诱导后0、12、24、48h时间点检测到HIF-1α、DNA-PKcs和Ku80表达随时间增加逐渐增高,其中HIF-1a和DNA—PKcs的相对表达量呈正相关（r=0．816,P=0．041）;运用HIF1a—shRNA表达质粒明显抑制乏氧HeLa细胞内HIF-1α表达,检测到细胞经照射后12、24、48h时间点DNA-PKcs的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比差异均无统计学意义（P〉0．05）;而pDNAPKcs-shRNA表达质粒抑制DNA-PKcs表达后检测各时间点HIF-1α的表达与转染空白质粒的阴性对照组相比均明显减少（P〈0．05）。结论辐射诱导乏氧HeLa细胞内HIF-1α表达与DNA-PKcs的表达水平相关;通过抑制DNA-PKcs的表达能显著降低乏氧HeLa细胞HIF-1α表达水平,对HIF-1α的调控机制提出新的思路。     

LPS对小鼠巨噬细胞HIF-1α表达的影响

目的观察在体外常氧条件下，LPS的刺激是否影响巨噬细胞HIF-1α的表达及其机制。方法收集Balb／c小鼠的腹腔巨噬细胞并分组进行体外培养，刺激组给予LPS、对照组给予PBS并作用10h后。采用RT-PCR法检测HIF-1α、VEGF基因的表达水平，应用细胞免疫化学染色法检测HIF-1α蛋白的表达水平。结果LPS刺激组HIF-1α基因表达无明显改变，但HIF-1α蛋白表达显著增加且VEGF基因表达上调（均P〈0．01）。结论常氧条件下，LPS刺激下的巨噬细胞可以在转录后水平上调HIF-1α蛋白的表达，并可通过上调靶基因VEGF的表达参与急性炎症反应。     

乏氧和低糖条件下SPCA1肺癌细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA的表达变化

【目的】观察乏氧和低糖对SPCA1细胞凋亡的影响及乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)的表达变化。【方法】乏氧低糖处理后用流式细胞术检测SPCA1细胞凋亡率,Western Blotting检测HIF-1α蛋白表达,Northern Blotting检测Glut-1 mRNA表达水平。【结果】乏氧和/或低糖处理后48 h,乏氧高糖组SPCA1细胞凋亡指数(10.2±1.6)%,显著高于常氧高糖组(3.4±1.1)%(P<0.01),乏氧低糖组(32.6±4.7)%显著高于常氧低糖组(4.6±1.4)%(P<0.01)。常氧条件下SPCA1细胞不表达HIF-1α蛋白,Glut-1 mRNA仅轻微表达,但在乏氧和低糖条件下HIF-1α蛋白和Glut1 mRNA表达明显增加。【结论】乏氧低糖条件下SPCA1细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA表达增加,提示SPCA1肺癌细胞通过增加糖代谢以适应乏氧和低糖。     

化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210的表达

目的探讨不同浓度CoCl2对人肝癌细胞SMMC-7721乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）和miR-210表达的影响以及RNA干扰HIF-1α基因对miR-210表达的影响。方法采用Western blot法检测不同浓度CoCl2培养24 h后SMMC-7721细胞HIF-1α蛋白表达变化,实时定量PCR检测miR-210相对表达量。脂质体介导靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF转染SMMC-7721细胞后,乏氧培养24、48和72 h,分别采用Western blot法和实时定量PCR检测细胞HIF-1α蛋白表达变化和miR-210相对表达量。结果 50和100μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量与0μmol/L组相比,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;150和200μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量均显著高于0μmol/L组（P〈0.05或P〈0.01）。转染质粒pGenesil-HIF后乏氧培养24、48和72 h,细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量显著低于阴性干扰组（均P〈0.01）。结论化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210表达明显上调,RNA干扰HIF-1α基因可明显下调乏氧细胞miR-210表达。     

S180肉瘤乏氧诱导因子-1α与微血管密度表达水平的相关性

目的观察乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和微血管密度(MVD)在S180肉瘤中的表达水平,并探讨两者间的相关性。方法建立昆明种小鼠S180肉瘤模型23个。待肿瘤生长至1～2cm时完整切取肿瘤组织,用免疫组化技术分别测定肿瘤组织的HIF-1α和MVD的表达情况。结果所有S180肉瘤组织的HIF-1α表达为7%～70%(中位数为21%),而MVD的表达为3～40条(中位数为10条);HIF-1α与MVD的表达成线性正相关(t=7.048,P<0.001)。结论S180肉瘤组织中均有HIF-1α和MVD不同程度的表达,并且两者间存在显著的正相关性。进一步证实了HIF-1α在高表达的情况下通过促进血管内皮生长因子的高表达而刺激肿瘤血管的生长。     

乏氧诱导因子-1α在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的观察鼻咽癌原发灶标本中乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达水平,并判断其在预测鼻咽癌预后中的价值。方法用免疫组化技术检测59例鼻咽癌原发病灶标本中HIF-1α的表达情况。同时随访这些患者的治疗结果。结果HIF-1α的表达位于肿瘤细胞核内,67.8%的标本有HIF-1α阳性表达;HIF-1α阳性表达提示远处转移率高,总生存率和无病生存率低。但对局部区域控制率无影响。结论大部分鼻咽癌患者的原发病灶呈现HIF-1α阳性表达,其表达水平对判断鼻咽癌患者的预后有重要价值。     

荷脑胶质瘤裸鼠~(99m)Tc-HL91乏氧显像与HIF-1α表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤99mTc-HL91乏氧显像特征以及与乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的相关性。方法将10只荷人脑胶质瘤裸鼠分别于腹腔注射99mTc-HL91 2、4、6h后行全身平面显像,计算感兴趣区内肿瘤组织与头部组织放射性计数比值（T/NT）,免疫组织化学方法检测肿瘤组织HIF-1α的表达水平。结果99mTc-HL91乏氧显像各时相肿瘤显影均较清晰,2、4、6h的T/NT值分别为1.415±0.25,1.855±0.20,1.818±0.19,各时相间T/NT值比较差异均有显著性（P〈0.05）。99mTc-HL91显像的T/NT值（4h）与HIF-1α的表达水平呈正相关（r=0.833,p〈0.05）。结论脑胶质瘤组织对乏氧显像剂99mTc-HL91有较好的摄取与滞留,各时相肿瘤显影清晰,其中以4 h的T/NT值为最高。99mTc-HL91乏氧显像的T/NT值与HIF-1α的表达水平呈正相关。     

胆囊癌中微淋巴管密度与HIF-1α表达的相关性

目的 研究分析微淋巴管密度(micro-lymphatic vessel density,MLVD)和缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在胆囊癌组织中的表达情况及相关性.方法 用免疫组织化学方法检测胆囊癌组织MLVD和HIF-1α的表达情况,分析两者在胆囊癌组织中表达的相关性.结果 胆囊癌组织中MLVD和HIF-1α的表达明显高于在慢性胆囊炎组织中的表达,差异均有统计学意义 (t=4.033和χ2=22.323,P<0.01).胆囊癌组织中MLVD和HIF-1α的表达呈正相关(r＝0.573,P<0.05).结论 胆囊癌组织中存在HIF-1α的高表达,HIF-1α与胆囊癌组织MLVD呈高度正相关.     

动物肿瘤模型乏氧水平的核素显像和乏氧诱导因子-1α的表达测定

目的探讨肿瘤乏氧诱导因子1α(HIF1α)表达及乏氧显像剂99TcmEC甲硝唑(metronidazole,MNZ)SPECT显像对检测肿瘤乏氧(缺氧)程度的可行性,以及两种检测方法的相关性。方法建荷S180肉瘤的昆明小鼠和荷Lewis肺癌的C57/BL6两种肿瘤模型各12个,分别对两种荷瘤小鼠进行99TcmECMNZ的SPECT乏氧显像,显像结束后完整切取肿瘤组织,用免疫组化技术测定肿瘤HIF1α表达。结果S180肉瘤注射99TcmECMNZ后3hT/M(肿瘤放射性计数/对侧肌肉放射性计数)值为1.93～4.46(3.04±0.74),而HIF1α的表达为31.2%～60.8%(中位数为50.4%),两者间存在线性相关(t=2.732,P=0.021);Lewis肺癌T/M值为1.42～2.06(1.78±0.22),而HIF1α的表达则为0.1%～1.75%(中位数为1.1%),两者间无明显相关性(t=1.161,P=0.272)。S180肉瘤和Lewis肺癌的T/M值之间和HIF1α的表达之间均存在显著性差异(t′=5.69,P<0.01;t′=9.49,P<0.05)。结论99TcmECMNZ的SPECT乏氧显像和HIF1α的检测可用于判断不同类型的肿瘤和同一类型肿瘤之间的乏氧程度和差异。     

肿瘤组织内活性氧与乏氧诱导因子-1α的研究进展

氧是需氧生物必不可少的基本物质,需氧细胞在物质能量过程中,如果氧未被完全还原成水,可产生氧自由基,这些氧自由基可转变成一些非自由基氧活性物质,由于功能上的相似性,这些物质被统称为活性氧（reactive oxygen species, ROS）,ROS对细胞功能如生长、转化、凋亡、癌变和衰老发挥重要的作用。     

乏氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用

目的探讨乏氧诱导因子1α（HIF-1α）抑制剂YC-1对乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射增敏作用及其作用机制。方法选择脑胶质瘤SHG44细胞株,分别在常氧（20%O2）、乏氧（1%O2）12 h和24 h、乏氧＋YC-112 h和24 h这5种不同条件下培养,采用Western blot检测HIF-1α的表达水平;细胞克隆形成实验绘制细胞存活曲线以观察其放射敏感性;利用剂量分割法绘制亚致死性损伤修复曲线以观察其修复能力。结果脑胶质瘤SHG44细胞株在乏氧12 h和24 h与常氧培养相比,HIF-1α的表达水平显著升高,放射敏感性下降,其氧增强比分别为1.22和1.37,进一步统计分析发现其亚致死性损伤修复能力升高,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;而当在乏氧12 h和24 h培养的同时加用YC-1时,HIF-1α的表达水平则显著降低,放射敏感性升高,其增强因子均为1.27,进一步统计分析也发现其亚致死性损伤修复显著降低,且在间隔8、10、12 h照射时,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论 YC-1能明显提高乏氧脑胶质瘤SHG44细胞株的放射敏感性,其机制可能与YC-1能抑制细胞的亚致死性损伤修复能力有关。     

食管鳞状细胞癌组织中乏氧诱导因子-1α蛋白和mRNA的表达

目的:探讨食管鳞痛组织中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其临床意义.方法:分别采用免疫组化及RT-PCR技术检测46例食管鳞癌组织和46例正常食管黏膜组织中HIF-1α蛋白及mRNA的表达情况,并分析2者的表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系.结果:食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白阳性染色主要位于癌细胞胞质/核内,阳性率为41.3%(19/46),而正常食管黏膜组织中均呈阴性表达.食管鳞癌组织中HIF-1α mRNA的表达水平(1.17±0.25)高于正常食管黏膜组织(0.35±0.12)(t=13.942,P<0.001).46例食管鳞癌组织中HIF-1αmRNA高表达(高于癌组织中的平均水平)者为24例(52.2%).食管鳞癌组织中HIF-1α mRNA表达水平与HIF-1α蛋白表达阳性率呈正关联(rp=0.474,P<0.01).食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白的表达与肿瘤的浸润深度(χ2=6.624,P=0.010)和淋巴结转移有关(χ2=7.404,P=0.007),HIF-1α mRNA表达水平与肿瘤的组织学分级(χ2=0.321,P=0.571)、淋巴结转移(χ2=0.708,P=0.400)、浸润深度(χ2=2.333,P=0.127)及临床分期(χ2=0.067,P=0.800)均无关.结论:食管鳞癌组织中HIF-1α在蛋白水平的表达对临床更具有指导意义.     

LPS对小鼠腹腔巨噬细胞HIF-1α表达的影响及其机制的研究

目的:探讨在体外常氧环境下脂多糖(LPS)对小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响及其可能的机制。方法:分别以LPS单独或联合NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶、一氧化氮合酶抑制剂L-NMMA作用于BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1αmRNA的变化,用免疫细胞化学法检测HIF-1α蛋白和血管内皮生长因子蛋白(VEGF)的变化。结果:LPS作用于小鼠巨噬细胞10h后,HIF-1αmRNA无明显变化,HIF-1α蛋白和VEGF蛋白明显增加(P<0.01),NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶和一氧化氮合酶抑制剂L-NMMA均可降低LPS对HIF-1α蛋白和VEGF蛋白表达的诱导作用(P<0.05)。结论:LPS可通过转录后途径上调HIF-1α的表达,HIF-1α蛋白的表达又可进一步诱导其靶基因VEGF的表达。     

局部晚期宫颈癌细胞中乏氧诱导因子-1α表达及其与预后的关系

目的 观察宫颈鳞癌细胞中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况及其与预后的关系.方法 通过治疗前检测119例宫颈鳞癌患者HIF-1d的表达情况,并分析阳性、阴性表达组放化疗疗效并研究其与宫颈癌预后的关系.结果 119例中晚期宫颈鳞癌患者中HIF-1α表达阳性者86例(72.3％),表达阴性者33例(27.7％).Ⅱ、Ⅲ期患者表达阴性者的有效率(94.7％、85.7％)高于表达阳性者(87.8％、75.6％),差异有统计学意义(P=0.032,P=0.041);表达阴性者(89.4％、78.5％)2年局控率高于表达阳性者(75.5％、70.2％),差异有统计学意义(P=0.021、P=0.035);表达阴性者2年生存率(100％、85.7％)高于表达阳性患者(91.2％、72.9％),差异有统计学意义(P=0.034、P=0.041).结论 大部分中晚期宫颈鳞癌细胞HIF-1α表达阳性,对于Ⅱ、Ⅲ期患者HIF-1α表达阳性与不良预后相关.     

趋化因子受体-4和乏氧诱导因子-1α双抑制对MCF-7细胞的影响

目的 同时抑制乳腺癌细胞株表达的趋化因子受体-4(CXCR4)和乏氧诱导因子-1α(HIF-1α),并考察其对乳腺癌细胞株MCF-7的影响.方法 应用RNA干扰策略,通过优化siRNA序列和改造U6启动子,构建能够在乳腺癌缺氧微环境特异性表达的增强型启动子5HRE-U6(△U6p),并能同步沉默CXCR4和HIF-...     

沉默乏氧诱导因子-1α基因对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因对CoCl2诱导的乏氧人肝癌细胞SMMC-7721放射敏感性的影响及其机制。方法利用分子生物学技术构建靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF,脂质体介导转染SMMC-7721细胞后进行乏氧培养,分别采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,克隆存活实验检测细胞放射敏感性的变化。结果酶切鉴定和测序证实重组质粒pGenesil-HIF构建正确,转染质粒后乏氧培养24 h,SMMC-7721细胞HIF-1α基因的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和阴性干扰组（P〈0.05或P〈0.01）;乏氧培养24 h、48 h和72 h后,HIF-1α干扰组细胞增殖活性明显低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.01）;乏氧培养48 h和72 h后HIF-1α干扰组细胞凋亡百分率明显高于对照组（P〈0.01）;乏氧培养72 h后HIF-1α干扰组SMMC-7721细胞放射增敏比为1.45。结论 RNA干扰HIF-1α基因可增强乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的放射敏感性,其机制可能与RNA干扰HIF-1α基因抑制乏氧细胞增殖和诱导凋亡有关。     

HIF-1α在类风湿性关节炎组织中的表达及其相关性研究

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在类风湿性关节炎(RA)组织中的表达及其相关性作用。方法 通过组织形态学和免疫学等手段检测,观察Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠模型的关节组织中HIF-1α蛋白的表达情况。结果 Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α,第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关。结论H1F-1α在RA组织中的表达,与炎症严重程度呈正相关,提示HIF-1α对RA的发生发展密切相关,为RA的临床治疗提供了新的思路。     

rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA在乏氧条件下对MiaPaCa2细胞Glut-1表达的影响

目的：以重组腺相关病毒（rAAV）为载体介导以HIF-1α为靶点的小干扰RNA,在厌氧培养条件下作用于MiaPaCa2人胰腺癌细胞．观察其对糖代谢反应关键酶--葡萄糖转运体-1（Glut-1）表达的影响。方法：构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF。将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF-1α分别转染对数生长的MiaPaCa2人胰腺癌细胞,在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、RT-PCR、Western Blot法观察其对MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA、蛋白以及Glut-1 mRNA、蛋白表达的影响。结果：Real-Time PCR和Western Blot检测发现。rAAV-siHIF-1α能够抑制MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达。RT-PCR和Western Blot检测发现,rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2细胞Glut-1 mRNA和蛋白的表达。结论：rAAV-siHIF-1α能抑制MiaPaCa2人胰腺癌细胞糖代谢关键酶Glut-1表达的作用。