Smurf2在梗阻性肾病小鼠肾小管上皮细胞转分化形成中的作用

目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制?方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组)?术后3?7?14 d处死小鼠?用常规病理染色法观察两组小鼠肾组织形态和肾间质纤维化程度;以免疫蛋白印迹及免疫组织化学染色法检测两组小鼠肾组织中Smurf2?E-钙黏蛋白(E-cadherin)??琢-平滑肌肌动蛋白(?琢-SMA)和纤维连接素(FN)的表达和分布?结果:与Sham组相比,UUO术后7 d小鼠出现部分肾小管扩张?萎缩和肾间质纤维化?同时,UUO术后肾组织中Smurf2??琢-SMA和FN表达呈时间依赖性升高,E-cadherin表达则明显下降?并且,Smurf2蛋白主要分布于肾小管上皮细胞核内;?琢-SMA分布于肾小管上皮细胞和肾间质中;FN则分布于肾间质中?相关回归分析表明:UUO术后小鼠肾组织内Smurf2表达与?琢-SMA(r = 0.765,P <0.001)和FN蛋白水平呈正相关(r = 0.773,P < 0.001);与E-cadherin表达呈负相关(r = -0.656,P < 0.001)?结论:梗阻性肾病小鼠肾组织中Smurf2可能通过诱导肾小管EMT形成促进肾间质纤维化的进展?     

整合素连接激酶在梗阻性肾病合并肾小管酸中毒中的表达

目的：观察整合素连接激酶（ILK）在梗阻性肾病合并肾小管酸中毒中的表达,探讨肾小管酸中毒在致肾间质纤维化中的作用。方法实验大鼠75只,其中假手术组大鼠25只,单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠50只。UUO大鼠于术后第7天分为肾小管酸中毒大鼠（UUO1组,n＝31）和非肾小管酸中毒大鼠（UUO2组,n＝19）,同时做肾功能与组织学检测,于手术后7、14、21、28 d时分批处死大鼠,免疫组织化学与 Western blot法测定肾组织中 ILK的表达。结果与 UUO2组比较,UUO1组光镜下炎症细胞浸润和间质纤维化程度更严重;假手术组仅有少量的 ILK蛋白表达,几乎无纤粘连（FN）蛋白的沉积,UUO2组 ILK蛋白表达及 FN蛋白的沉积增多,而 UUO1组较 UUO2组增多。结论在梗阻性肾病中,肾小管酸中毒可上调 ILK蛋白的表达与FN的沉积,加速肾小管间质纤维化。     

整合素连接激酶在糖尿病肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:观察整合素连接激酶(ILK)在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中的表达,探讨其与肾小管上皮细胞转分化(EMT)的关系.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=10)、糖尿病模型组(n=10)与糖尿病氯沙坦干预组(n=10)[氯沙坦20 mg/(kg·d)];分别于第8周、第16周每组各处死5只大鼠.留取左肾行HE和Masson染色,阅片并计算肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积;免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)与ILK的表达.结果:与正常对照组比较,糖尿病组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积明显增加(P＜0.01),肾小管上皮细胞α-SMA,Vimentin和ILK阳性表达面积明显增加(P＜0.01),ILK与α-SMA呈正相关(rs=0.621,P＜0.05);氯沙坦组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积较糖尿病组明显减弱,其肾小管上皮细胞的ILK,α-SMA与Vimentin表达均较糖尿病组明显减弱(P＜0.01).结论:糖尿病大鼠肾小管上皮细胞存在ILK高表达与EMT,二者之间可能有着重要联系;氯沙坦可下调肾小管上皮细胞ILK表达,阻抑EMT.     

原发性肾小球肾炎患者肾小管间质中整合素连接激酶的表达及意义

目的:检测不同间质纤维化程度的原发性肾小球肾炎患者肾组织中整合素连接激酶(ILK)的表达,观察ILK与肾间质纤维化程度之间的关系,探讨ILK在肾间质纤维化中可能的作用.方法:选取原发性肾小球肾炎患者肾活检标本88例,根据肾间质纤维化程度分为四组,采用免疫组化方法,检测各组标本ILK的表达,并将ILK的表达与间质纤维化程度和患者血尿β2微球蛋白水平进行相关分析.结果:ILK主要表达于病变肾小管上皮细胞,并且随间质病变的加重,表达量增加,范围增大.肾小管间质中ILK表达量与肾间质纤维化病变程度和患者血尿β2微球蛋白均呈正相关关系.结论:ILK可能参与了肾间质纤维化的形成.     

整合素连接激酶在人肾间质纤维化组织中的表达及意义

目的探讨在慢性肾脏病患者肾间质中ILK的表达和其在肾间质纤维化发生、发展中的意义.方法选择各型慢性肾脏病患者49例,按肾间质病理损伤程度对肾组织标本进行分组:正常对照组4例,轻度损伤组17例,中度损伤组16例,重度损伤组12例.用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测肾间质的ILK、TGFβ1、E-cadherin和FN表达面积,并将ILK表达水平与患者血清肌酐(SCr)进行比较.结果肾小管上皮细胞是间质中ILK的主要来源,ILK表达量与肾小管间质病变程度呈正相关(P<0.01).此外,ILK与TGFβ1和FN的表达量呈正相关(P均<0.01),而与E-cadherin的表达量呈负相关(P<0.01);ILK还与患者SCr升高水平呈正相关(P<0.01). 结论随着慢性肾小管间质病变程度加重,ILK的表达显著增加,因此它在肾间质纤维化形成中起重要作用.ILK作为TGFβ1的下游因子, 可能通过促进肾小管上皮细胞的转分化(EMT)和细胞外基质(ECM), 如FN等的合成增加,参与肾间质纤维化的发生.     

整合素连接激酶与人肾小管间质损伤的关系研究（摘要）

目的研究整合素连接激酶（integrin-1inked kinase,ILK）与人肾小管间质损伤的关系.方法采用非生物素免疫组化法和计算机图像分析系统对30例入选疾病组和5例正常对照组的ILK和α-SMA的表达水平进行检测,并结合临床资料及肾脏病理进行统计学分析。     

EGCG对梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化的干预作用及机制

目的 探讨表没食子儿荼素没食子酸酯(EGCG)对大鼠肾问质纤维化和肾小管上皮细胞转分化的作用及其机制.方法 雄性Wistar大鼠56只随机分为正常对照组(n=8)、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组(n=24,以单侧输尿管结扎制作肾间质纤维化模型)和EGCG治疗组(n=24,单侧输尿管结扎术后每日给予腹腔注射EGCG 5 ...     

中药单体及复方抗肾小管上皮细胞转分化的研究进展

<正>慢性肾脏病(chronic kidney disease, CKD)是一个不可逆的疾病进展过程,最终会发展为肾衰竭,进入终末期肾病。目前,CKD患者数量逐年增多,全球CKD患者达8%～16%,故CKD已成为全球公共健康问题,严重威胁人类健康^[1]。肾间质纤维化(rental interstitial fibrosis, RIF)是各种肾脏疾病发展过程中关键的病理基础,     

上调整合素连接激酶可抑制肾小管上皮细胞E-cadherin 表达

目的 研究上调整合素连接激酶（integerin-linked kinase,ILK） 对肾小管上皮细胞（human kidney tubular cells,HKC）E- 钙黏素（E-Cadherin） 表达的影响。肾小管上皮细胞转分化（epithelial-mesenchymal transition,EMT） 在肾间质纤维化中发挥重要作用。E-Cadherin 是维持肾小管上皮细胞极性的关键蛋白。ILK 是调控上皮细胞转分化的重要蛋白,其作用机制目前还不清楚。方法 本研究中我们将ILK 转染到HKC 中过表达,然后用RT-PCR、Western blot 及免疫荧光方法观察了ILK 对E-Cadherin 表达及糖原合成激酶-3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β） 活性的影响。进一步用磷酸化下游底物GSK-3β 抑制剂SB415286 观察对E-Cadherin 表达的影响。结果 ILK 过表达可以明显抑制E-Cadherin 表达, 增加GSK-3β 活性。用GSK-3β 抑制剂处理后可以下调E-Cadherin 的表达。免疫荧光显示ILK 过表达可使上皮细胞发生极性改变,E-Cadherin 表达下调。表明ILK 上调可通过激活GSK 抑制E-Cadherin 表达,进而诱导肾小管上皮细胞出现转分化表型。     

肾小管上皮细胞转分化在糖尿病肾病发生中的作用

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的主要微血管并发症,是终末期肾病(ESRD)的最常见病因,也是一类以进行性肾脏纤维化为特征的疾病.     

Role of protein kinase C in advanced glycation end products-induced epithelial-mesenchymal transition in renal proximal tubular epithelial cells

The role of protein kinase C （PKC） activation in advanced glycation end products （AGEs）-induced epithelial-mesenchymal transition in renal proximal tubular epithelial cells was investigated. HKC cells were divided into three groups： normal group, AGE-BSA group （100 mg/L AGE-BSA） and AGE-BSA＋PKC inhibitor （10 μmol/L chelerythrine chloride） group. PKC activity was measured by PKC assay kit. The expression of Vimentin, and phosphorylated β-catenin was detected by using Western blotting, and the content of TGF-β1 was examined by ELISA method. The intracellular disposition of Vimentin was observed by fluorescence microscopy. As compared with normal group, PKC activity was increased significantly in AGE-BSA group. The expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 was enhanced significantly in AGE-BSA group. The expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 was significantly blocked by chelerythrine chloride. High expression of Vimentin, phosphorylated β-catenin, and TGF-β1 induced by AGE-BSA may be mediated via the activation of PKC signal transduction pathway.     

脂氧素A4抑制结缔组织生长因子诱导的肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶

目的:结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)可诱导人肾小管上皮细胞HK-2表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK),本研究观察脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)是否调节CTGF对合成ILK的作用,并探讨其作用机制。方法:对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞株),用不同浓度的LXA4预刺激,再加入CTGF共同孵育;或单用CTGF刺激HK-2细胞。应用RT-PCR和Westernblot方法测定ILKmRNA和蛋白表达,应用Westernblot法测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44mitogen-activated protein kinase,p42/44MAPK)(也称为ERK1/2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3-K)。结果:CTGF刺激使HK-2细胞ILKmRNA表达和蛋白合成增加,磷酸化ERK1/2、磷酸化PI3-K的表达增加。LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化。结论:LXA4可抑制CTGF引起的HK-2细胞表达ILK,其机制依赖于抑制...     

ILK在cGVHD狼疮样小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的观察整合素连接激酶(ILK)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾脏中的表达,探讨其在狼疮肾炎肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法建立cGVHD狼疮样小鼠模型,将小鼠分成正常对照组(A组)、12周模型组(B组)和16周模型组(C组),每组6只。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、western blot、免疫组织化学法分别检测ILK、E-钙粘蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白在肾组织中的表达。结果RT-PCR和west-ern blot方法分别检测到B、C两组小鼠肾组织ILK、α-SMA mRNA和蛋白表达较A组升高(P均<0.01),E-钙粘蛋白表达降低(P均<0.01)。ILK蛋白和mRNA表达与α-SMA表达呈正相关(r分别为0.83,0.86,P均<0.01),与E-钙粘蛋白表达呈负相关(r分别为-0.84,-0.89,P均<0.01)。免疫组化结果表明,与A组相比,B、C两组小鼠肾小管及间质均可见ILK、α-SMA蛋白显著表达,而E-钙粘蛋白的表达显著减少。结论cGVHD狼疮样小鼠肾组织中ILK蛋白及mRNA表达明显上调,可能通过介导肾小管上皮-间充质细胞转分化而参与了狼疮肾炎肾间质纤维化的进程。     

STAT1在梗阻性肾组织中表达及与肾纤维化之间关系的研究

目的探讨信号转导和转录激活因子1（STAT1）在梗阻性肾病发病过程中的作用。方法应用免疫组化方法检测12例正常肾组织和47例梗阻性肾组织中STAT1、纤维连结蛋白（FN）和Ⅳ型胶原的表达;并分析STAT1表达与梗阻肾纤维化之间关系。结果梗阻肾组织中STAT1、FN和Ⅳ型胶原的表达均分别高于正常肾组织中各自的表达（P〈0.05）。梗阻肾组织中STAT1表达与FN表达、Ⅳ型胶原表达密切相关（P〈0.05）,而且随着肾纤维化程度加重,STAT1表达也增多（P〈0.05）。结论STAT1活性增强与梗阻性肾病的病理生理过程有关,特别在肾纤维化过程中发挥重要作用。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在梗阻性肾病肾小球中的表达及姜黄素对其的影响

目的:探索在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病变进程中,血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在肾小球中的表达变化及姜黄素对其的影响。方法:采用右侧输尿管接扎术诱导大鼠UUO模型,将54只大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组3组,每组18只。术后第3、7及14 d分别随机处死各组中的6只大鼠,检测血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)。应用免疫组化技术检测肾小球中SGK1蛋白的表达。结果:模型组大鼠肾小球中的SGK1蛋白的表达第3 d开始上调,第7 d和14 d继续升高。与模型组相比,姜黄素组BUN、SCr的改变不明显,但肾小球中的SGK1蛋白表达均显著下降。结论:随UUO肾病变发展,肾小球中SGK1持续高表达,进一步提示SGK1在梗阻性肾病的肾小球纤维化病变进程中起重要作用。姜黄素能抑制肾小球中SGK1的表达,从而抑制肾小球的纤维化。     

miR-155在血管紧张素II诱导的肾小管上皮-间充质转化中的作用及其机制

目的：阐明miR-155在血管紧张素II（Ang II）诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化（EMT）中的作用并探究其调控机制。方法：将体外培养的NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组、Ang II组、NC miRNA处理组、miR-155 inhibitor处理组、溶剂对照组和蛋白激酶B（AKT）激动剂处理组,予相应处理。CCK8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测EMT相关蛋白、TGF-β蛋白表达水平以及AKT磷酸化水平,qPCR检测miR-155表达水平,免疫荧光染色检测Collagen I蛋白荧光强度。结果：随着Ang II浓度增加,细胞增殖能力、TGF-β以及EMT相关蛋白表达水平显著增加,miR-155表达水平显著上调（均P＜0.05）。与Ang II组相比,miR-155 inhibitor处理组miR-155表达水平、EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著降低（均P＜0.05）;与miR-155 inhibitor处理组和溶剂对照组相比,AKT激动剂处理组EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著上调（均P＜0.05）。结论：miR-155可通过调控AKT信号通路促进Ang II诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。     

细胞外信号调节蛋白激酶在梗阻性肾组织中的表达及其意义

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）在梗阻性肾病的分子发病机制中作用。方法 应用免疫组化方法检测ERK和增殖细胞核抗原（PCNA）在47份梗阻性肾组织中表达，并分析ERK表达与梗阻肾纤维化之间相关关系。结果 梗阻肾的肾小管和间质中ERK表达均高于正常的，但仅间质中两者表达差异有显著性（P〈0．05）。间质中ERK表达与梗阻肾纤雏化程度密切正相关（P〈0．05），而肾小管中两者相关差异无显著性（P〉0．05）。梗阻肾的肾小管和间质中ERK强表达者的PCNA指数均分别显著高于ERK弱表达者（P〈0．01）。结论 ERK活性增强促进细胞增殖增多、从而参与梗阻挂肾病的发病过程，尤其在肾纤维化过程中起着重要作用。