大鼠腰神经根损伤后PGP9.5在运动终板再生修复过程中的形态表现

目的研究腰神经根损伤后,神经肌肉接头部神经再支配过程中的形态变化.方法采用免疫组织化学方法和激光共聚焦(Confocal laser scaning microscopy)技术,使用多克隆蛋白基因产物(PGP9.5)作为神经原标记,观察了大鼠L5神经根受压后10、20、30和60 d比目鱼肌神经肌肉接头部末梢神经变性及再生修复过程,运用α-bungarotoxin(α-BTX)萤光结合剂显示运动终板,NIH技术测定末梢神经与运动终板重叠面积.结果肌肉失神经支配后10天,神经肌肉接头部末梢神经大幅度消失,运动终板形态结构紊乱,随着神经再支配的进行,通过末梢外突起的延伸并与邻近的运动终板相连(终板间连接),在神经肌肉接合部形成一个多神经支配复杂的制作过程.结论神经再生修复过程中,神经纤维与后突触受体区域的变化有一个时空关系,同时PGP9.5免疫组织化学标记,结合激光共聚焦在正常与再生的神经肌肉接合部,能清晰地显示精致的神经末梢,因此,PGP9.5抗体可用于研究各种不同情况下肌肉神经支配、神经再支配和神经再生的重要工具.     

益气化瘀方对腰神经根损伤大鼠神经细胞黏附分子的作用

目的:探讨益气化瘀方对大鼠神经再生修复过程中神经肌肉接头部神经细胞黏附分子(neuralcelladhesionmolecule,NCAM)的作用。方法:大鼠L5神经根损伤后,予以益气化瘀方分别治疗10、20和30d。采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜技术,观察大鼠比目鱼肌神经肌肉接头部NCAM的分布变化。采用α金环蛇毒萤光结合剂显示乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor,AChR),NIH图像分析系统定量测定NCAM与AChR的重叠面积。结果:益气化瘀方组NCAM在神经肌肉接头部的聚集、出芽、延伸以及与AChR的重叠面积均明显优于模型组。结论:NCAM的表达与AChR的神经支配情况密切相关。益气化瘀方可促进神经的再生修复。     

益气化瘀方对大鼠腰神经根损伤后花生凝集素结合分子和施万细胞的作用

目的:研究大鼠Is神经根损伤后,益气化瘀方对神经肌肉接头部花生凝集素结合分子(peanut agglutinin-binding molecules,PNA-BMs)和施万细胞(Schwann's cell,Sc)的作用.方法:大鼠L5神经根损伤后,给与益气化瘀方治疗.于用药后第10、20、30、60天,采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜技术,观察PNA-BMs及作为Sc标记的S-100在大鼠比目鱼肌中的分布.使用NIH图像分析技术,定量测定PNA-BMs与S-l00的重叠面积.结果:被PNA识别的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在Sc延伸过程中起着重要的导向作用.益气化瘀方对Sc在神经肌肉接头部的聚集、出芽、延伸,以及与PNA-BMs的重叠面积均明显优于对照组.结论:益气化瘀方能明显促进ECM和Sc的生长,从而加速神经再生修复进程.     

腰神经根损伤后神经肌肉接头施旺细胞的作用和表现

目的 研究腰神经损伤后神经肌肉接头部施旺细胞在神经再支配过程中的作用及神经元纤维的关系。方法 采用免疫萤光双标记和激光共聚焦扫描技术,使用S-100多克隆抗体标记施旺细胞,抗神经元纤维蛋白（NF）单克隆抗体标记神经轴突,观察了大鼠L5神经根受压后10、20、30和60天比目鱼肌神经肌肉接头的变性及再生修复过程。运用a-bungarotoxin(a-BTX）萤光结合剂显示运动终板。结果 肌肉中的神经元纤维蛋白因失神经支配导致大幅度消失,随着神经再支配的进行又重新呈观。而位于运动终板及其周围的施旺细胞,共失神经支配期间先发出突起并形成一个精细的制作过程覆盖在神经肌内接头。再生期间,再生的神经轴突沿施旺细胞搭建的通道生长,此过程表现为再生轴突生长始终伴随并落后于施旺细胞的生长。随着神经再支配的逐渐完善,这个过程则逐渐消退。结论 神经再生修复过程中施旺细胞对神经出芽的启动和轴突的生长导向起着重要的作用。     

益气化瘀方对大鼠腰神经根损伤后脑源性神经营养因子表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤后神经根组织和比目鱼肌中脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF） 表达的影响。方法：SD雄性大鼠120只随机分为假手术组、模型组、弥可保（甲钴胺）组和益气化瘀方组,每组各30只。采用自制硅胶片压迫于大鼠腰椎（L4）右侧神经根背根节处建立损伤模型,分别给予生理盐水灌胃、弥可保注射液和益气化瘀方治疗。分别于治疗10、30和60d后处死大鼠,每组10只,取右侧受压神经根及比目鱼肌。采用透射电子显微镜观察受压神经根超微结构,酶联免疫吸附测定法检测压迫后神经根中BDNF蛋白表达,实时定量逆转录聚合酶链反应法检测比目鱼肌中BDNF mRNA的表达。结果：压迫损伤后各时间点模型组神经根中BDNF蛋白表达水平变化轻微,与假手术组相比,差异无统计学意义;益气化瘀方组BDNF含量在损伤后逐渐升高,60d时达到最高值,与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。与假手术组比较,模型组比目鱼肌中BDNFmRNA的表达在损伤后10d时显著升高（P〈0．01）,随后逐渐降低,至60d时降至正常水平（P〉0．05）;与模型组相比,损伤后10d时益气化瘀方组比目鱼肌中BDNF mRNA表达升高受到显著抑制,60d时表达显著升高（P〈0．01）。结论：益气化瘀方可以抑制神经根损伤早期靶器官中BDNF蛋白的升高,并可以促进神经损伤后期神经根及靶器官中BDNF的表达。     

益气化瘀方对腰神经压迫模型大鼠背根节神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤大鼠背根节神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响。方法：雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、弥可保组和益气化瘀方组,每组10只。造模各组用自制胶块压迫于大鼠右侧L;神经根背根节处,假手术组仅切开皮肤和椎旁肌。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,益气化瘀方组大鼠给予益气化瘀方煎剂灌胃,弥可保组大鼠肌肉注射弥可保。于造模10d后取右侧受压神经根,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测神经细胞的凋亡情况;分光光度法结合考马斯亮蓝法检测受压迫神经根caspase-3活性;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测神经根组织caspase-3mRNA表达变化。结果：腰神经根受压迫后背根节的神经细胞凋亡明显增加,模型组大鼠神经细胞的凋亡指数高于假手术组（P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可减少背根节神经细胞的凋亡,两组大鼠神经细胞的凋亡指数低于模型组（P〈0．05）。模型组大鼠神经根组织caspase-3活性和mRNA表达明显增高,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可降低造模后大鼠神经根组织caspase-3活性及其mRNA表达,二者与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：腰神经根压迫可导致受压神经根组织caspsae-3的过表达和神经细胞凋亡的增加。益气化瘀方可抑制神经根组织caspase-3的过表达,减轻背根节神经细胞的凋亡。     

腰神经根受压后花生凝集素结合分子在大鼠肌肉神经再生期的分布变化

目的　研究腰神经根损伤后 ,花生凝集素结合分子 (penutagglutinin bindingmolecules ,PNA BMs)在大鼠比目鱼肌神经肌肉接头部的分布变化。方法　采用组织化学方法和激光共聚焦扫描显微镜技术及能与细胞外基质中配糖体 (glycoconjugate)特异性结合的PNA染色 ,在腰神经根受压后 10 ,2 0 ,30 ,及 60天 ,观察PNA BMs在神经肌肉接头部的分布 ,运用α bungarotoxin(α BTX)荧光结合剂显示运动终板 ,NIH图象分析技术测定PNA BMs与运动终板重叠面积。结果　肌肉失神经支配后 10天 ,神经肌肉接头部PNA染色大幅度消褪或消失 ,乙酰胆碱斑呈卷曲 ,不规则 ,或崩解。随着神经再支配的进行 ,乙酰胆碱斑形态逐渐趋于正常 ,PNA染色强度及范围也逐渐回升 ,最终局限于运动终板区域内。结论　PNA BMs在神经肌肉接头部的分布变化与肌肉失神经支配及神经再支配密切关联。     

酸性成纤维细胞生长因子预防失神经支配肌运动终板退变的形态学及电生理研究

目的 本研究旨在探讨运动神经损伤后运动终板退变的预防方法。方法 SD大鼠30只，等分成3组。处理组切断右侧腓总神经，修复神经，酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）纤维蛋白凝胶载体植入失神经支配的胫前肌神经区周围的肌间隙，设立对照。观察6周，进行形态学及电生理检查。结果 采用aFGF纤维蛋白凝胶载体组，运动终板结构基本正常，肌肉无明显萎缩；对照组运动终板明显退变或消失，肌肉明显萎缩；采用aFGF纤维蛋白凝胶载体组低频重复电刺激（RNS）衰减率明显低于对照组。结论 aFGF纤维蛋白凝胶载体可以有效保护失神经支配肌运动终板．防止肌肉萎缩．促进神经肌肉接头功能的恢复。     

腰神经根损伤后神经细胞黏附分子在神经肌肉接头部的表达

目的 研究大鼠腰神经根损伤后，神经细胞黏附分子(N—CAM)在神经肌肉接头部的表达。方法 采用免疫组织化学方法和激光共聚焦显微扫描技术(Confocal laser sea—ning microscopy)，观察了大鼠胚胎期，出生后14d，成年期以及L5神经根受压后10、20和30d，大鼠比目鱼肌神经肌肉接头部N—CAM的分布变化。结果 大鼠胚胎期，肌管的表面和神经肌肉接头部N—CAM呈强烈着染，在发育过程中其浓度逐渐减退，至成年肌肉时几乎消失。而当肌肉失神经支配后可导致N—CAM重新再现。结论N—CAM在肌肉中的表达是通过神经支配状况调节的。     

慢性阻塞性肺疾病模型大鼠骨骼肌功能失调的原因分析

目的研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌肌纤维分型和骨骼肌神经肌肉接头处运动终板的变化,以进一步了解COPD患者骨骼肌功能失调的原因。方法利用熏香烟法制造COPD大鼠模型(COPD组),并设置健康对照组。取大鼠股四头肌做冰冻切片,进行琥珀酸脱氢酶染色及乙酰胆碱酯酶染色,比较两组大鼠Ⅰ、Ⅱa和Ⅱb型肌纤维的构成比、骨骼肌横截面积以及神经肌肉接头运动终板的差异。结果COPD组大鼠股四头肌中Ⅰ型和Ⅱa型肌纤维的构成比分别为0.163±0.042和0.217±0.044,明显低于对照组的0.222±0.032和0.270±0.024(P值均<0.01);Ⅱb型肌纤维的构成比为0.621±0.082,明显高于对照组的0.508±0.053(P<0.01)。COPD组大鼠股四头肌横截面积为(0.445±0.1 72)cm~2,明显小于对照组的(0.589±0.243)cm~2(P<0.05);神经肌肉接头单位面积内运动终板数为(27.41±19.34)个/Cm~2,明显少于对照组的(57.99±39.62)个/cm~2(P相似文献   

益气化瘀方及其拆方对大鼠椎间盘纤维环细胞凋亡相关因子的作用

目的:研究益气化瘀方及其拆方药理血清对大鼠诱导凋亡椎间盘纤维环细胞bcl-2、Bax及半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8)表达的影响.方法:用细胞免疫化学和积分光密度分析等方法比较分析益气化瘀方及其拆方益气方、化瘀方药理血清,以及胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1, IGF-1)对抗-Fas抗体(anti-Fas antibody)诱导凋亡大鼠椎间盘纤维环细胞bcl-2、Bax及caspase-8表达的影响.结果:益气化瘀方、益气方、化瘀方及IGF-1血清处理组与凋亡模型组相比,bcl-2表达升高,Bax及caspase-8表达降低,均有统计学意义(P<0.01);益气化瘀方组与益气方、化瘀方组比较,Bax表达明显降低,有统计学意义(P<0.05).结论:益气化瘀方及其拆方可以调控大鼠椎间盘纤维环细胞内Bax、bcl-2和caspase-8表达,其延缓椎间盘退变的机制可能与调控细胞的凋亡相关因子有关.     

益气化瘀盆炎汤治疗慢性盆腔炎气虚血瘀证临床观察

目的：观察益气化瘀盆炎汤治疗慢性盆腔炎气虚血瘀证的临床疗效。方法：将60例患者随机分为益气化瘀盆炎汤组（试验组）30例和奥硝唑胶囊组（对照组）30例。两组临床观察时间均为4周,均以患者的体征、中医证候、舌象、脉象作为观察指标,于治疗前和治疗后分别对两组患者进行临床疗效观察和对比。结果：据综合疗效判定：试验组总有效率为93.3%;对照组总有效率为76.7%,差异具有显著统计学意义（P〈0.01）。临床证候学表明：慢性盆腔炎（气虚血瘀型）的临床症状经益气化瘀盆炎汤治疗后能够得到有效改善,且在体征积分、中医证候积分、总积分比较上治疗组均优于对照组（P〈0.05）。结论：益气化瘀盆炎汤治疗气虚血瘀型慢性盆腔炎疗效确切。     

益气健脾化瘀方与5-Fu协同抑制胃癌转移的机制研究

目的 观察益气健脾化瘀方协同5-氟尿嘧啶（5-Fu）对小鼠胃癌肺转移的抑制作用,并通过肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)表型转化探讨其可能的作用机制。方法 30只615小鼠随机分为空白对照组、模型组、5-Fu组、益气健脾化瘀方(YQJPHY)组、5-Fu+益气健脾化瘀方(5-Fu+YQJPHY)组。除空白对照组外各组小鼠尾静脉注射MFC细胞建立小鼠胃癌肺转移模型。给药2周后取材,观察肿瘤浸润肺组织情况,计算肺转移抑制率,流式细胞术测定TAMs及M1、M2比例,免疫组化观察M2的表达,qPCR与Western blot检测N-cadherin、snail、slug的表达。结果 5-Fu+YQJPHY组肺转移灶结节及肿瘤浸润最少,抑制率最高（68.42%）,明显高于其它组（P<0.05）;较5-Fu组,5-Fu+YQJPHY组M1表达上升,M2表达明显下降,CD206表达减弱（P<0.05）,N-cadharin、snail、slug表达水平最低（P<0.05）。结论 益气健脾化瘀方与5-Fu联用有明显的协同抑制小鼠胃癌肺转移瘤的效果,其机制可能与促进诱导M2型TAMs向M1型转变,从而抑制肿瘤细胞的上皮间质转化（EMT）有关。      

益气化瘀补肾方对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞ColⅠ与ColⅡ mRNA表达的影响

目的:观察益气化瘀补肾方含药血清对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞ColⅠ、ColⅡmRNA表达的影响。方法:选择脊髓型颈椎病患者经手术摘除的椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清。将传代第1代的退变椎间盘细胞接种于96孔酶标板中,分为6组,分别予低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度的益气化瘀补肾方含药血清及相应浓度生理盐水血清DMEM培养液培养。通过实时荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅡmRNA的表达。结果:不同浓度的益气化瘀补肾方血清对椎间盘细胞增殖有明显的促进作用;与生理盐水组比较,益气化瘀补肾方不同浓度含药血清干预后椎间盘细胞ColⅡmRNA表达水平上调、ColⅠmRNA表达水平下调,尤以中浓度更为明显(P<0.01)。结论:益气化瘀补肾方可能通过影响椎间盘组织胶原的变化而发挥防治脊髓型颈椎病椎间盘退变的作用。