细胞凋亡在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用

目的：研究细胞凋亡在新生儿缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）中的作用。方法：结扎新生７ｄ龄大鼠左颈总动脉后吸８％浓度氧２ｈ制成ＨＩＢＤ模型,应用苏木素－伊红（ＨＥ）染色、原位缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）、ＤＮＡ电泳分析综合研究新生大鼠ＨＩＢＤ后脑细胞的死亡形式。结果：缺氧缺血（ＨＩ）后０ｈＨＥ染色即发现左侧纹状体有一些神经元呈凋亡早期的改变;ＨＩ后１８ｈＴＵＮＥＬ染色在左脑皮质及纹状体见到阳性凋亡细胞;ＨＩ后２ｄＤＮＡ电泳见到ＤＮＡ梯形带;ＨＩ后２～３ｄ凋亡达高峰;持续至少２１ｄ。结论：３种方法均表明细胞凋亡为ＨＩＢＤ后神经元的主要死亡形式,也是加重脑损伤的一个因素。     

新生儿缺氧缺血性脑病海马细胞凋亡的实验研究

目的：探讨新生儿缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）中海马迟发性神经元死亡现象，研究其凋亡的作用机理。方法：通过ＨＩＥ的动物模型，应用ＤＮＡ电泳、电镜、原位末端标记技术等手段，分别对缺氧３ｈ完成后１、４、１８、２４、４０、７２ｈ及７ｄ组和对照组海马凋亡细胞形态、密度、时间进行观察比较。结果：光镜、电镜显示细胞皱缩、染色质边集、出现凋亡小体，ＤＮＡ电泳图谱显示梯状形态，原位标记显示海马各区标记阳性的细胞，定量比较显示ＨＩＥ后４０ｈ点海马细胞凋亡最明显，其中ＣＡ１区持续至７ｄ以后。结论：在ＨＩＥ中细胞死亡存在着凋亡作用；未成熟脑对缺氧缺血存在迟发性的损伤反应     

缺氧缺血性脑病新生猪的肾脏损害

为探讨新生儿在缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）状态下肾脏的病理及功能损害，采用新生猪制作缺氧缺血性脑病模型。结果发现新生猪经２小时缺氧缺血后，在脑组织出现类似新生儿ＨＩＥ病理损害的同时，肾脏出现肿胀，包膜下出血，肾小管上皮细胞肿胀，管腔变窄，少数上皮细胞坏死脱落，肾小管基膜完整，血清尿素氮及肌酐明显升高（Ｐ＜０．０２５及Ｐ＜０．０５），表明在ＨＩＥ状态下新生猪已出现肾脏的病理及功能损害，但损害程度较轻，解除缺氧７２小时后，上述损害基本恢复正常。     

缺氧缺血性脑病新生猪的肾脏损害

为探讨新生儿在缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）状态下肾脏的病理及功能损害，采用新生猪制作缺氧缺血性脑病模型。结果发现新生猪经２小时缺氧缺血后，在脑组织出现类似新生儿ＨＩＥ病理损害的同时，肾脏出现肿胀，包膜下出血，肾小管上皮细胞肿胀，管腔变窄，少数上皮细胞坏死脱落，肾小管基膜完整，血清尿素氮及肌酐明显升高，表明在ＨＩＥ状态下新生猪已出现肾脏的病理及功能损害，但损害程度较轻，解除缺氧７２小时后，上述损害基本恢     

大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与坏死的研究

用凝胶电泳及原位末端标记研究大鼠脑缺血再灌流后神经元的凋亡与坏死。采用可逆性大脑中动脉阻塞２小时,再灌流０．５～４８小时,造成脑缺血再灌流模型（３０只）,用ＨＥ、原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）和琼脂糖凝胶电泳观察神经元的改变。结果：缺血损伤区位于视前区、纹状体和皮质,再灌流０．５小时,视前区的缺血损伤区有较多的凋亡细胞,而皮质、纹状体仅有散在的凋亡细胞。再灌流３～６小时,凋亡细胞数量增多,并可见坏死细     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑细胞凋亡的研究

目的　利用大鼠缺氧缺血性脑损伤动物模型 ,观察缺氧缺血性脑损伤后不同时间细胞形态变化及细胞的死亡形式 ,为缺血缺氧性脑病提供实验和理论依据。方法　 7日龄SD大鼠 6 6只 ,随机分为对照组、假手术组和实验组 (缺氧缺血不同时间 ) ,实验组动物采用阻断左侧颈总动脉后置于含 8%O2 的低氧环境中 ,建立缺氧缺血性脑损伤动物模型。用HE、硫堇及TUNEL染色技术在光镜下观察脑组织的病理改变。结果　大鼠缺氧缺血后 3h时脑细胞即有水肿 ,6h时发现有局灶性坏死 ,12、2 4和 48h可发现大量坏死神经细胞 ;在缺氧缺血后 3h细胞凋亡出现 ,之后凋亡细胞数目明显增加。凋亡出现在细胞坏死之前。结论　新生鼠缺氧缺血性脑损伤后 ,细胞死亡有凋亡和坏死两种形式。     

大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与坏死的研究

用凝胶电泳及原位末端标记研究大鼠脑缺血再灌流后神经元的凋亡与坏死。采用可逆性大脑中动脉阻塞２ 小时,再灌流０．５～４８ 小时,造成脑缺血再灌流模型（３０ 只）,用ＨＥ、原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）和琼脂糖凝胶电泳观察神经元的改变。结果：缺血损伤区位于视前区、纹状体和皮质,再灌流０．５ 小时,视前区的缺血损伤区有较多的凋亡细胞,而皮质、纹状体仅有散在的凋亡细胞。再灌流３～６小时,凋亡细胞数量增多,并可见坏死细胞,１２小时达高峰,持续到２４ 小时,并可见凋亡细胞各种形态,凋亡细胞主要位于缺血损伤区内界,坏死细胞也增多。４８小时完全坏死区周围有成群的凋亡细胞。电泳显示涂片状背景上有明显的ＤＮＡ带。细胞凋亡参与缺血再灌流所致的神经元损伤,凋亡细胞与坏死细胞并存,细胞凋亡使梗塞区面积扩大。     

新生儿缺氧缺血性脑病海马细胞凋亡的实验研究

目的：探讨新生儿缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）中海马迟发性神经元死亡现象，研究其凋亡的作用机理。方法：通过ＨＩＥ的动物模型，应用ＤＮＡ电泳、电泳、原位末端标记技术等手段，分别对缺氧３ｈ完成后１、４、１８、２４、４０、７２ｈ及７ｄ组和对照组海马凋亡细胞形态、密度、时间进行观察比较。结果：光镜、电镜显示细胞皱缩、染色质边集、出现凋亡小体，ＤＮＡ电泳图谱显示梯状形态，原位标记显示海马各区标记阳性的细胞，定量比     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑细胞VEGF的表达与凋亡的关系

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与脑细胞凋亡的关系.方法 利用新生7日龄Wistar大鼠制备HIBD模型.应用HE染色、电镜、原位缺口末端标记(TUNEL)法及免疫组织化学法研究HIBD时脑细胞凋亡情况、VEGF蛋白的表达及两者的关系.结果 HE染色、TUNEL染色及透射电镜结果均证实,新生大鼠HIBD时凋亡是神经细胞主要的死亡形式.与坏死共存,且凋亡的发生先于坏死.免疫组化检测结果发现,VEGF蛋白在正常大鼠脑的各个部位都有表达,缺氧缺血(H1)大鼠VEGF表达明显增强,HI后即刻VEGF表达增强,1d时迭高峰,3d后逐渐减弱;HI后病变严重的皮质、纹状体中心VEGF表达减弱,在病变较轻部位表达较强,海马也存在不均匀分布的VEGF阳性细胞,尤其CAECA3区域可见较多的阳性细胞散在分布.表明HIBD时脑组织中VEGF的表达除与HI后的时间有关外,还与病变严重程度有关.结论 迟发性的细胞凋亡是HIBD加重及病损区扩展的重要因素.VEGF可能参与了HIBD的发病过程,VEGF出现在凋亡细胞较多的部位,表明其可能与脑细胞凋亡密切相关.     

乌司他丁对缺氧缺血性新生鼠的脑保护作用

目的探讨乌司他丁对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的作用。方法选7日龄新生Wistar大鼠70只制备HIBD模型。乌司他丁治疗组大鼠分别于术后即刻、术后8h、16h腹腔注射乌司他丁1次,术后24h处死。取脑组织迅速称重,固定,切片行HE和TUNEL染色,测定凋亡细胞数,对皮层脑细胞变性坏死和胶质细胞增生行病理量化评分。结果治疗组在脑重增加值及左、右脑重差值、凋亡细胞数和病理量化评分明显低于缺氧缺血组和丹参组(P<0.01或P<0.05);各治疗组之间上述指标无显著性差异(P>0.05)。结论乌司他丁可减轻缺氧缺血后脑细胞水肿、脑细胞变性、坏死及凋亡,对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

大鼠创伤性脑损伤后诱导型NOS阳性表达与神经细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤(TBI)后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和神经细胞凋亡的关系。方法：将健康SD大鼠随机分为假手术组、伤后24h组、伤后72h组、伤后168h组。采用iNOS免疫组化技术，研究大鼠创伤性脑损伤后iNOS的表达变化及其细胞定位，采用凋亡细胞原位缺121末端标记法(TUNEL)，观察大鼠在创伤性脑损伤后不同时点的神经细胞凋亡情况。结果：大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区iNOS活性明显升高，伤后72hiNOS阳性表达最明显，伤后168h仍有表达。大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区神经细胞凋亡明显增多，伤后72h增多最明显，可持续168h。结论：TBI后损伤区周围皮质和伤侧海马的iNOS阳性细胞呈高表达并与神经细胞的凋亡呈同步变化，推测iNOS的表达可能参与了TBI后的继发性神经细胞凋亡。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后细胞凋亡与自由基损伤机制研究

目的:探讨新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后细胞凋亡与自由基损伤机制的研究。方法:7日龄SD大鼠72只,随机分成6组:①正常对照组;②HIBD后0h组;③HIBD后24h组;④HIBD后48h组;⑤HIBD后72h组;⑥HIBD后7d组。制备HIBD模型后0,24,48,72h,7d后处死大鼠,取脑并检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;并作HE和Tunel染色光镜下检测各组脑细胞凋亡数。结果:HIBD后各组脑组织SOD,MDA水平及脑细胞凋亡数与对照组比较均有显著性差异,48h及72h组与其他组比较有显著性差异;48h与72h组之间比较无显著性差异。结论:新生大鼠HIBD后48~72h为脑损伤高峰期,细胞凋亡与自由基损伤均参与了缺氧缺血后神经细胞的损害,阻止细胞凋亡或抗自由基损伤应争取在48h内进行。     

Effect of batroxobin on neuronal apoptosis during focal cerebral ischemia and reperfusion in rats.

We have found that Batroxobin plays a protective role in ischemic brain injury, which attracted us to investigate the effect of Batroxobin on apoptosis of neurons during cerebral ischemia and reperfusion. The apoptotic cells in ischemic rat brains at different reperfusion intervals were tested with method of TdT-mediated dUTP-DIG nick end labeling (TUNEL) and the effect of Batroxobin on the apoptosis of neurons was studied in left middle cerebral artery (LMCA) occlusion and reperfusion in rat models (n = 18). The results showed that few scattered apoptosis cells were observed in right cerebral hemispheres after LMCA occlusion and reperfusion, and that a lot of apoptosis cells were found in left ischemic cortex and caudoputamen at 12 h reperfusion, and they reached peak at 24 h-48 h reperfusion. However, in the rats pretreated with Batroxobin, the number of apoptosis cells in left cerebral cortex and caudoputamen reduced significantly and the neuronal damage was much milder at 24 h reperfusion than that of saline-treated rats. The results indicate that administration of Batroxobin may reduce the apoptosis of neurons induced by cerebral ischemia and reperfusion and afford significant cerebroprotection in the model of focal cerebral ischemia and reperfusion.     

慢性间断性缺氧诱导大脑细胞凋亡的研究

目的探讨急性及慢性间断性缺氧时大脑神经细胞凋亡的机制.方法 (1)建立缺氧动物模型:将SD大鼠置于常压低氧舱中,充入氮气调节氧浓度至所需氧浓度.(2)动物分组:①急性缺氧组:在低氧舱中缺氧1.5h.②慢性间断性缺氧组:每日在低氧舱中6h,每周缺氧6d,共缺氧28d.采用原位TdT缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞.结果急性及慢性间断性缺氧后凋亡细胞明显增加.结论缺氧可诱导迟发性神经细胞凋亡.缺氧性脑损伤可能在神经系统变性疾病的发病机制中起重要作用.     

双标记流式细胞术定量分析5-FU诱导胃癌细胞早期凋亡

目的 以Annexin V-FTTC/PI双标记流式细胞术检测5－FU诱导胃癌细胞株SCG7901早期凋亡。方法 250、125、50以及25mg/L不同浓度5－FU处理SCG7901胃癌细胞0、6、12、18、24、30h,Annexin V-FTTC/PI双标记流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡。结果 早期（0－24h)瘤细胞凋亡比例随5－FU作用剂量增加和时间延长而显著提高（P＜0.01)；后期（24-30h)瘤细胞以坏死增加为主（P＜0.01)而凋亡比例反而降低。结论 5－FU诱导细胞凋亡呈时间以及剂量依赖关系。Annexin V/PI双标记法可以清楚区分正常、坏死、机械损伤以及凋亡细胞群落，是定量分析早期细胞凋亡的准确方法。     

Protective effect of radix Salviae miltiorrhizae on apoptosis of neurons during focal cerebral ischemia and reperfusion injury.

We have found that Radix Salviae Miltiorrhizae (RSM) plays a protective role in ischemic brain injury, which attracted us to investigate the effect of RSM on apoptosis of neurons during cerebral ischemia and reperfusion. The apoptotic cells in ischemic brains at different reperfusion intervals were tested with the method of TdT-mediated dUTP-DIG nick end labeling (TUNEL), and the effect of RSM on the apoptosis of neurons was studied in left middle cerebral artery (LMCA) occlusion in rat models (n = 18). The results showed that few scattered apoptotic cells were observed in right cerebral hemisphere after LMCA occlusion and reperfusion, and that a lot of apoptotic cells were found in left ischemic cerebral cortex and caudoputamen at 12 h reperfusion, and they reached peak at 24-48 h reperfusion. However, in rats pretreated with RSM, the number of apoptotic cells in left cortex and caudoputamen reduced significantly and the neuronal damage was much milder at 24 h reperfusion as compared with those of saline-treated rats. From this study, we conclude that administration of RSM can reduce the apoptotic of neurons induced by cerebral ischemia and reperfusion and afford significant cerebroprotection in the model of focal cerebral ischemia and reperfusion.     

针刺对缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的保护作用及机制

目的 探讨脑缺血再灌注后针刺对脑细胞线粒体跨膜电位的保护作用及保护机制.方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,针刺水沟、百会二穴,通过Rhodamin123荧光染色、TUNEL原位标记及电镜观察,分别于脑缺血再灌注后24h及48h检测脑细胞线粒体跨膜电位、线粒体超微结构及脑凋亡细胞的变化.结果 脑缺血再灌注后Rhodamin123的荧光强度增强,术后24h是(961.27±34.22),48h是(1231.23±121.54),与假手术组(782.82±57.24)比较明显增高(P<0.05);针刺干预后Rhodamin123的荧光强度术后24h是(808.44±56.23),48 h是(954.25±35.11),与脑缺血再灌注组比较明显下降(P<0.05);脑缺血再灌注后24h凋亡细胞是[(26.12±2.75)个/视野],48 h凋亡细胞是[(41.24±4.73)个/视野],与假手术组[(3.56±0.92)个/视野]比较明显增加(P<0.05),针刺干预后24h[(19.88±3.32)个/视野]与48 h[(33.23±3.81)个/视野]凋亡细胞数量与脑缺血再灌注组比较明显减少(P< 0.05);脑缺血再灌注后线粒体膜肿胀、崩解,内嵴断裂,中毒颗粒增加,针刺干预后线粒体的非特异性改变明显减轻.结论 针刺能够稳定线粒体膜的通透性,减少线粒体跨膜电位的耗散,减少缺血再灌注后脑细胞凋亡,增加脑组织对缺血缺氧的耐受性.     

缺血性脑梗塞CT表现与梗塞后神经细胞凋亡及坏死的相关性

目的 探讨实验性缺血性脑梗塞早期CT表现与神经细胞损伤的相关性及与临床诊断、治疗、预后的关系。方法 将新西兰大白兔经颈总动脉注入PVA栓子栓塞大脑中动脉，在不同的时间点(2～36h)对免脑进行CT扫描，并取脑组织经：HE染色、Nissle染色、免疫组化(TUNEL法)进行观察。结果 CT分期Ⅰ期(脑梗塞后2～8h)，神经细胞首先出现缺血改变，随后细胞周围出现水肿：基底节周围及大脑皮质可见少量TUNEL阳性细胞。CT分期Ⅱ期(梗塞后12～18h)，以神经细胞溶解消失为主：基底节周嗣及大脑皮质可见较多TUNEL阳性细胞。CT分期Ⅲ期(梗塞后24～36h)，脑水肿改变十分显著，基底节呈明显的坏死区，神经细胞坏死，结构消失．大脑皮质可见大量TUNEL阳性细胞。神经元具有凋亡及坏死的双重形态学特征。结论 缺血性脑梗塞后神经细胞损伤形态上有水肿、凋亡及坏死等多样性，CT扫描显示缺血性脑梗塞的进展与实际病理变化有高度相关性。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤细胞退行性变方式的超微结构研究

目的 :研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑细胞退行性变方式。方法 :对 7日龄 SD大鼠采用左侧颈总动脉永久性结扎联合 7.7%低氧吸入 1 h复制模型。分别在复氧后4h,2 4 h,72 h,1周取材 ,利用电镜技术观察颈总动脉结扎侧海马皮质部神经元的超微结构。结果 :神经元退行性变形式包括坏死、杂合体、凋亡、脂性退变及暗细胞。结论 :新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元退行性变形式多样。