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相似文献
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1.
构建人血管内皮生长因子cDNA逆转录病毒表达质粒   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的 :构建人血管内皮生长因子 ( VEGF) c DNA逆转录病毒表达质粒。方法 :采用 PCR方法从 pc DNA- VEGF165质粒中扩增 VEGF165基因 ,在序列两端分别引入 Eco R 和 Bam H 限制性内切酶识别位点 ,并克隆到逆转录病毒表达载体 p LXSN质粒中。结果 :酶切鉴定、PCR扩增以及DNA序列分析表明已经将 VEGF165基因全长序列克隆到逆转录病毒表达载体 p LXSN质粒中 ,获得了 p LXSN- VEGF165重组质粒。结论 :成功地构建了人 VEGF c DNA逆转录病毒表达质粒 ,为进一步临床应用 VEGF c DNA转基因治疗奠定了基础  相似文献   

2.
目的 构建单顺反子表达人 GM- CSF和 B7.1融合基因真核表达载体。 方法 应用巨引物 PCR技术对 h GM- CSF基因 c DNA进行定点突变 ;应用 PCR重叠延伸法 ,将 h GM- CSF和 h B7.1基因的 c DNA编码序列通过一 linker序列拼接 ,构建 h GM- CSF与 h B7.1融合基因 h GM- B7.1,将其插入 pc DNA3真核表达载体 ,测定核苷酸序列。 结果 序列分析表明 :(1) h GM- CSF突变体基因 c DNA编码序列的 178位核苷酸由 C变为 A,其余核苷酸序列均未发生变化 ;(2 ) h GM- CSF、linker、h B7.1的连接顺序、方向及序列完全正确。 结论 构建 pc DNA3- h GM- B7.1融合基因真核表达载体成功  相似文献   

3.
血管内皮生长因子基因重组腺病毒载体的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 :构建携带人血管内皮生长因子基因的重组腺病毒载体。方法 :将人源性的 VEGF1 6 5c DNA正向插入到穿梭质粒 p HCMVSP1A的 CMV启动子之下 ,构建重组质粒 ,通过脂质体与 p JM17共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得携带人 VEGF1 6 5基因的重组腺病毒 ,通过 PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒 ,扩增、纯化并测定滴度。结果 :人VEGF1 6 5c DNA成功地正向插入到 p HCMVSP1A载体中 ,以重组病毒基因组 DNA为模板 ,同时扩增出 5 76 bp的VEGF1 6 5c DNA基因片段和 86 0 bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了所构建病毒的正确性 ,病毒滴度为 2 .5× 10 9pfu/ m l。结论 :成功构建了表达人 VEGF1 6 5基因重组腺病毒载体 ,使 VEGF基因的高效转染成为可能  相似文献   

4.
目的 :建立简便的 HBV DNA序列中 BCP双突变的检测方法。方法 :采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。首先对 HBVC区基因进行 PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3’端可以在 DNA聚合酶的催化下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的 d NTP,然后检测该3’端带有荧光素的探针 ,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度可以判定待测点是何种核苷酸。结果 :该方法可以检测出 HBV基因序列中 BCP双突变核苷酸类型 ,可以检测 1个拷贝的模板 ,并且可以从 BCP野生型株 DNA序列中检出 5 % BCP双突变 DNA序列 ,对 76例 HBV DNA阳性患者进行检测 ,结果 HBV BCP基因双突变率为 5 3.9( 4 1 /76)。结论 :该技术可以对血清中 HBV DNA C区 BCP双突变。  相似文献   

5.
目的 :制备抗重组人血管内皮生长因子 (VEGF) 16 5单克隆抗体。方法 :构建人 VEGF16 5原核表达载体 p ET- 3a/ VEGF16 5 ,并使其在大肠杆菌中高效表达 ,纯化表达产物。用初步纯化的rh VEGF16 5免疫小鼠制成杂交瘤细胞 ,小鼠腹腔接种 ,收集腹水纯化后制成抗 rh VEGF16 5单克隆抗体。结果 :VEGF16 5诱导的内皮细胞增殖可被本研究制备的单克隆抗体中和 ,并表现出较好的剂量依赖关系。结论 :本研究利用 DNA重组技术制备人 VEGF16 5 ,并利用它进一步制备了抗重组人VEGF16 5单克隆抗体。  相似文献   

6.
目的 :探讨抑癌基因蛋白 (p5 3)、表皮生长因子受体 (EGFR)和血管内皮生长因子 (VEGF)的表达、相互关系及其意义。方法 :采用免疫组织化学 (S P)法 ,检测 15 0例脑胶质瘤标本中 p5 3、EGFR和VEGF的表达。 结果 :p5 3、EGFR和VEGF在胶质瘤中的阳性表达率 5 4 .0 %、5 2 .0 %和 4 4 .7% ,并随胶质瘤病理分级的增加而增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。p5 3和EGFR、EGFR和VEGF表达间均存在着密切关系 (P <0 .0 0 5 )。结论 :p5 3、EGFR和VEGF高表达与胶质瘤的恶性进展有密切关系 ;且 p5 3与EGFR、EGFR与VEGF协同在胶质瘤发生、发展过程中起重要作用。  相似文献   

7.
Cloning of Mouse Enamel Matrix Serine Proteinase Encoding Mature Protein   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 :克隆小鼠牙胚组织中釉基质丝氨酸蛋白酶 ( EMSP1 )成熟肽编码区基因。方法 :提取出生后 7d昆明种小白鼠切牙、磨牙牙胚总 RNA,逆转录为 c DNA,设计两对特异性引物 ,采用 Touchdown PCR和嵌套 PCR方法 ,扩增出小鼠 EMSP1起始密码子至终止密码子基因片段。将目的基因连入载体 p MD- 1 8T,转化入大肠杆菌 JM1 0 9,通过蓝白筛选 ,挑选阳性克隆培养扩增 ,纯化重组质粒进行限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定。结果 :限制性酶切图谱和核苷酸序列分析均表明所克隆 c DNA为小鼠 70 0 bp的 EMSP1成熟肽基因编码。结论 :成功地克隆了小鼠编码EMSP1成熟肽基因片段  相似文献   

8.
目的 :探讨上皮性卵巢肿瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF)及p5 3蛋白的表达及临床病理意义。方法 :用SP免疫组织化学方法检测VEGF和p5 3蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达。结果 :恶性、交界性及良性卵巢肿瘤组织中VEGF阳性表达率分别为 35 .3%、6 0 .4 % 0、72 .4 % ,VEGF表达率在恶性肿瘤和交界性肿瘤较良性肿瘤明显增高 ,且与卵巢癌淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,而与病理学分级、临床分期无关 ;p5 3蛋白表达与VEGF表达呈明显正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :VEGF在卵巢上皮性肿瘤的发展中起着重要作用 ,突变型p5 3蛋白可能参与卵巢肿瘤的血管生成调节。  相似文献   

9.
目的 :克隆人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用RT- nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约 1 2 0 0 bp的 DNA片段 ,与 p UCm- T载体连接 ,作全自动测序确证 ,并将其重组入 pc DNA 3.1载体中 ,构建为表达质粒 pc DNA- w P。结果 :对 PCR产物进行测序 ,序列基本正确。结论 :利用 RT- nested PCR法成功克隆了人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1c DNA序列并构建了表达质粒 pc DNA- w P。  相似文献   

10.
目的 :研究 p1 2 0参与的信号转导途径与 CML细胞增殖的关系。方法 :利用反转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)的方法 ,从人慢性粒细胞白血病 ( CML )细胞系 K5 6 2 细胞中扩增包括 c-cbl基因上游调控区及 5′翻译起始区的一段共 52 3bp c DNA序列 ,反向插入真核表达载体 pc DNA3 .1 ( ) ,转染 K5 6 2细胞系。通过 MTT及集落形成实验检测转基因 K5 6 2 细胞增殖能力的变化 ,研究 c-cbl反义 RNA封闭c-cbl转录产物对于 K5 6 2 细胞增殖的影响。结果 :该种反义封闭作用使 K5 6 2 细胞增殖及集落形成速度明显减慢。结论 :p1 2 0 CBL与 CML细胞的增殖有关。  相似文献   

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