温州地方株HPV16型L1基因多态性及蛋白特性分析

目的：了解温州地方株HPV16 L1基因结构特点,分析其结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性变化,为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法：设计HPV16型L1基因特异性引物,从宫颈癌组织标本提取DNA,进行PCR扩增鉴定,PCR产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNAStar软件分析HPV16型L1基因多态性及蛋白特性变化情况。结果：测定的序列与标准基因序列（NC 001526）比较,温州地区宫颈癌感染的HPV16型L1基因同源性为99.1%～99.8%,分别形成8种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上与标准株相比较无明显变化。结论：温州地方株HPV16 L1核酸有一定程度的变异。     

新疆南部维吾尔族妇女HPV16E6，E7基因突变与宫颈癌及癌前病变的相关性研究

目的：本研究检测HPV16E6,E7基因突变在新疆南部地区雏吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变组织中的发生情况,探讨HPV16E6,E7基因突变与宫颈痛变及宫颈癌的关系。方法：以德国标准株HPV16DNA为原型对新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌40例及癌前病变80例组织提取HPV16DNA,对其E6E7PCR扩增产物进行测序后进行对比,分析其突变情况．结果：HPV16阳性率分布：宫颈癌85％（34／40）,CINⅡ～Ⅲ42．5％（17／40）,CINⅡ10％（4／40）,对照组0（0／40）。HPV16E6突变率：宫颈癌中突变40％（16／40）,CINⅡ—Ⅲ中突变15％（6／40）。（x^2=0．023,P=0．011,r=0．998,P=0．038）,HPVE7突变率：宫颈癌中突变7．5％（3／40）,CINⅡ—Ⅲ组中突变率7．5％（3／40）．CINⅠ中突变率0（x^2=0．413,P=0．520）,E6E7同时突变率：宫颈癌组中突变率15％（6／40）;CINⅡ—Ⅲ中突变率7．5％（3／40）,CINⅠ中0（0／40）,（x^2=6．342,P=0．011）。结论：1．HPV16在宫颈癌,癌前病变的突变以单一的E6突变和E6,E7同时突变为主。2．随着宫颈病变向宫颈癌发展其发生突变率也随之增加。     

尖锐湿疣组织HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性分析

目的：调查温州地区尖锐湿疣组织HPV6b和11型感染情况，分析其L1基因多态性及蛋白特性变化，为基因工程重组L1蛋白疫苗的应用提供理论依据。方法：采用HPV6b和11型L1基因特异性引物对31份温州地区尖锐湿疣组织标本进行PCR扩增，并各取7份阳性PCR产物直接测序，用软件分析HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性。结果：31份标本中，HPV6b和11型阳性率分别为35．5％和45．2％。与标准基因序列比较，HPV6b和11型L1基因分别形成5和6种突变模式，同源性分别为99．8%～99．9％和99．7％～99．9%。HPV6b型L1基因中仅1处碱基突变引起所编码氨基酸的变异（S→P），但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上无明显变化；HPV11型L1基因的碱基突变均为无义突变，所编码氨基酸与标准株完全一致。结论：HPV6b和11型是温州地区尖锐湿疣的主要感染型别；HPVBb和11型L1基因序列高度保守。     

宫颈癌患者HPV16型L1基因克隆及序列分析

目的 了解萍乡地方株HPV16 L1基因结构特点,分析其结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性变化,为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据.方法 设计HPV16型L1基因特异性引物,从宫颈脱落上皮细胞中提取DNA,进行PCR扩增鉴定,将扩增的片段同T-载体连接,然后导入到大肠杆菌DH-5α中培养,提取质粒DNA进行测序.结果 测定的序列与标准基因序列(NC Sbjct 496)比较,萍乡地区宫颈癌感染的HPV16型L1基因同源性为98.9％～99.6％,分别形成5种突变模式,其中3处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也相应发生变化,但有1处由于核苷酸的丢失造成翻译的氨基酸也相应发生变化.结论 萍乡地方株HPV16 L1核酸有一定程度的变异,可能会造成HPV16 L1蛋白免疫原性的差异..此株改变也可能是本地区导致宫颈癌的主要原因.实验结果为研制适应本地区的基于HPV16 L1的基因工程疫苗提供了可靠实验依据.     

新疆南部维吾尔族妇女感染人乳头状瘤病毒（HPV）基因型与宫颈病变的相关性研究

目的:探讨新疆南部维族妇女感染HPV基因型的分布及其与宫颈病变的关系.方法:以新疆南部的维吾尔族妇女为研究对象,从宫颈组织中提取DNA后,运用聚合酶链反应(PCR)判断是否有HPV感染,并采用基因芯片技术检测所感染的HPV基因型.结果:1.130例宫颈病变组织中HPV(包括单一感染及多重感染)阳性率为72.3%(94/130);30例对照组中HPV阳性率为0.0%(0/30).两种常见亚型为:HPV16(58.8%)和HPV18(6.9%).2.直线相关分析,高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)及宫颈癌的发生与HPV16型感染密切相关(r=0.924,P=0.000).3.HPV多重感染在低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)、HSIL及宫颈癌中的比例虽有上升趋势,但统计学上无显著性差异.结论:新疆南部维吾尔族妇女感染HPV常见型别以HPV16为主,其次为18型和58型.HPV16是HSIL和宫颈癌的主要致病型别.     

L1、E6和E7基因序列分析

目的了解中国西南地区HPV16亚型基因的一级结构特点,为由HPV16亚型感染引起的疾病特别是宫颈癌的临床诊断、治疗提供理论依据。方法选取经分型明确为HPV16型感染的官颈癌组织32例,用PCR方法获得其E6、E7及L1基因的全长序列并进行测序分析。结果与德国标准株相比,32个标本中总共发现131（G—A）（Gly-Arg）、178（T—G）（Asp—Glu）、350（G-T）（Val—Leu）、647（A—G）（Asn-Asp）、846（T—C）（同义突变）、IA基因第966（C—T）（同义突变）、L1基因第1302（C-T）（同义突变）和L1基因第1434（A—G）（同义突变）等20个突变位。结论与标准序列比较,中国西南地区HPV16亚型L1、E6和E7基因存在一定范围变异,提示在预防治疗西南地区妇女宫颈癌病人以及研制该地区HPV疫苗时,需要注意这些位点的变异,特别是一些引起氨基酸变异的位点。     

宫颈癌组织HPV16 URR及E7基因突变和序列多态性分析

目的 分析山东省青岛地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)上游调控区(URR)和E7开放读码框(OFR)基因突变和基因序列多态性.方法 收集山东省青岛地区妇女宫颈癌标本共111例,提取DNA作为模板,应用通用引物和型特异引物经聚合酶链反应(PCR)筛选HPV16阳性标本,PCR结合测序检测HPV16阳性标本URR和E7基因全序列,经DNAStar 100软件和在线BLAST分析其变异情况.结果 宫颈癌组织中HPV和HPV16感染率分别为99.10%(110/111)和73.63%(81/110);核苷酸水平上HPV16 URR形成24种变异模式,同源性在98.02%～99.26%之间,nt7518 G→A和nt7861 A缺失变异率均为100%(26/26).HPV16 E7形成12种变异模式,同源性在99.23%～100%之间;nt647 A→G突变率58.54%(24/41),氨基酸由Asn→Ser(N29S)、nt666 G→A突变率24.39%(10/41),为同义突变.结论 山东省青岛地区妇女宫颈癌组织中HPV16 URR和E7基因均存在变异;HPV16 URR突变热点为nt7518和nt7861,HPV16 E7突变热点为nt647,且二者尚存在未见报道的变异位点.     

宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构变异及其意义

目的了解宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因的结构及其原核表达蛋白的免疫原性.方法运用PCR的方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列,ITPG诱导原核表达HPV16 E7蛋白,ECL Western blot的方法检测表达蛋白的免疫原性.结果宫颈癌组织中HPV16 E7基因的结构中存在两处点突变,分别是第43位密码子由标准株CAA变为TAA,第76位密码子由标准株CGT变为TGT.原核表达的HPV16 E7变异蛋白不能被HPV16 E7单克隆抗体识别.结论宫颈癌组织中HPV16 E7基因存在两个点突变,突变后的E7蛋白失去了免疫原性.将这种变异的HPV16 E7用于疫苗的研究开发,可能因其表达蛋白丧失恶性生物学行为而具有较高的安全性.     

新疆喀什伽师县农村维吾尔族男性HPV感染分布研究

目的探讨新疆喀什伽师县农村维吾尔族男性HPV感染的分布及亚型特点,为新疆维吾尔族妇女HPV干预及宫颈癌预防提供理论依据。方法采用凯普导流杂交芯片技术对新疆宫颈癌高发区新疆喀什伽师县克孜勒博依乡430例维吾尔族男性进行21种HPV亚型的检测。结果（1）430例男性HPV阳性率为26．28％,HPV阳性的男性中HPV16是最常见的类型,与其他类型比较阳性率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）HPV感染的类型主要为16、58、31型;多重感染者15例,占HPV感染者的13．27％（15／113）,多重感染以HPV16型合并感染为主,占86．67％（13／15）。结论新疆喀什伽师县克孜勒博依乡维吾尔族男性HPV阳性率较高,HPV感染的类型以HPV16为主,维吾尔族男性在维吾尔族宫颈癌发生中可能起一定作用。     

广东地区宫颈癌HPV52型L1基因突变分析

目的 调查我国广东地区宫颈癌患者组织中HPV52型的感染率及L1基因突变特性,为制备适合中国人群的疫苗提供流行病学资料.方法 采用HPV通用引物对130例宫颈癌标本中的HPV L1区基因序列进行PCR扩增,并结合基因测序分析.结果 获得HPV52型8例,检出率为6.15%,对所获得的各例HPV52 L1基因测序分析.结论 与Genbank标准株相比,广东地区发现的HPV52 L1基因有多处突变,与香港发现的HPV52突变株相近.     

新疆宫颈癌与人乳头瘤病毒（HPV）感染关系的初步研究

本文用核酸杂交法对以维吾尔族为主的宫颈癌及非癌宫颈组织进行了HPV-DNA相关序列的检查。标本有宫颈癌33例、宫颈糜烂1例和正常宫颈1例。在33例宫颈癌中维吾尔旅有25例,其余8例包括汉、蒙古、回和柯尔克孜等四个民族。结果是在维吾尔族病例宫颈癌组织中HPV-DNA相关序列检出率达80％,以HPV_16型为主,核酸多呈整合状态存在。上述结果表明,HPV在新疆某些地区内的人群中感染及传播的情况可能比较普遍。但要进一步阐明HPV与宫颈癌的病因学关系,尚需做更多的工作。     

新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒16感染和p33ING1b及端粒酶逆转录酶催化亚单位表达的相关性

目的探讨新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞状细胞癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)16感染和p33ING1b及端粒酶逆转录酶催化亚单位(hTERT)表达的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测了50例子宫颈鳞状细胞癌(SCC)和34例子宫颈上皮内瘤变(CIN)p33ING1b和hTERT表达情况,PCR法检测HPV16感染情况,并与12例正常子宫颈进行对照。结果对照组、CIN1组、CIN2～3组和SCC组中HPV16感染率分别为0、22.2%、44.0%和74.0%,各组间差异有显著性(x2=26.537,P=0.000);p33ING1b阳性率分别为91.7%、77.7%、68.0%和36.0%,各组间差异有显著性(x2=38.943,P=0.000);hTERT阳性率分别为50.0%、66.6%、88.0%和94.0%,各组间差异也有显著性(x2=48.199,P=0.000)。HPV16感染与p33ING1b表达呈负相关(r=-0.294,P=0.004),与hTERT表达呈正相关(r=0.286,P=0.005);p33ING1b表达与hTERT表达呈负相关(r=-0.361,P=0.000)。结论HPV16感染可能与新疆维吾尔族妇女子宫颈SCC组织中p33ING1b表达下降及hTERT表达增加有关。     

Human papillomavirus DNA and virus-encoded antigens in cervical carcinoma

The present study was undertaken to evaluate the prevalence of HPV in formalin-fixed, paraffin-embedded cervical carcinoma tissues using PCR followed by non-radioactive Southern hybridization with type-specific oligonucleotides for HPV 16 and 18. In addition, the tissue sections were immunohistochemically screened with two monoclonal antibodies, for expression of HPV 16 L1 and HPV 18 E6 proteins. A total of 57 of 60 cervical carcinomas (95.0%) were found with HPV using both techniques. HPV 16 and HPV 18 were present in equal proportions. Results of both DNA hybridization and immunohistochemistry were in agreement for the majority of the cases. HPV 16 and 18 DNA and virus-encoded antigens, L1 and E6 were found highly prevalent in these cervical carcinomas. Due to the high prevalence of HPV with cervical carcinoma in Malaysia, the implementation of routine diagnosis for the virus in cervical biopsies would be clinically useful.     

新疆南部维吾尔族 HPV16 阳性宫颈鳞癌microRNA 筛选及功能分析

目的：初步探讨新疆南部维吾尔族HPV16阳性宫颈鳞癌差异表达的microRNA(miRNA)，预测并分析靶基 因功能。方法：采用miRNA微阵列芯片技术对5例HPV16阳性的新疆南部维吾尔族宫颈鳞癌进行miRNA初步研究， 挑选出差异表达的miRNA，并利用实时定量RT-PCR进行初步验证，利用targetscan，miRwalk，miRanda及pictar 4种软 件预测其靶基因。结果：新疆南部维吾尔族HPV16阳性宫颈鳞癌差异表达基因18个，对差异表达显著的miRNA-138 和miRNA-720进行初步验证并预测其靶基因，预测miRNA-138靶基因为EZH2，LYPLA1，ARHGEF3，CLNS1A， EIF4EBP1，GNAI2，LIMK1，RHOC，ROCK2，SLC20A1，TERT，H2AFX；miRNA-720靶基因为EZH2，AGAP2， SPOCK2，FGF14，HNRNPA2B1，QKI，FOXG1，ACVR1B，DNMT3A，EPHB2，LATS2，KRAS，CCND2，NBN， ENAM，AMELX，PRNP，CALB1，两者共同的靶基因是EZH2。结论：miRNA-138，miRNA-720在新疆南部维吾尔族 HPV16阳性宫颈鳞癌组织中表达均下调，两者共同的靶基因是EZH2，可能与宫颈癌的浸润和转移有关。     

Detection of human papilloma virus (HPV) in laryngeal carcinoma tissue.

Using alpha-32P-dCTP labelled human papillomavirus type 16 DNA genome probe (cHPV 16 DNA, cloned and identified from a Chinese cervical invasive carcinoma), 3 HPV 16 genomic relative sequences were detected in 6 biopsies of laryngeal carcinoma. The results showed serious HPV infection in laryngeal carcinoma. This indicates that HPV infection may play an important pathogenetic role in cancer development.

     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列的检测

应用DNA斑点分子杂交技术检测了54例宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列,并应用DNA Southern印迹杂交技术分析了部分斑点杂交阳性的标本。结果表明,50%的宫颈癌标本中HPV16DNA阳性,而在18例正常宫颈组织中未测到HPV16DNA序列;Southern印迹杂交发现HPV16DNA以整合状态存在。提示HPV16与宫颈癌的发生密切相关。     

维吾尔族和汉族妇女人群 HPV 感染类型和宫颈上皮细胞DNA 倍体的相关性研究

目的：探讨维吾尔族和汉族妇女人群不同人乳头状瘤病毒（HPV）感染类型对宫颈上皮细胞 DNA 倍体的影响。方法收集该院妇科门诊2012年7月至2014年6月初次就诊的妇女348例,其中维吾尔族181例,汉族167例。利用薄层液基细胞学标本进行 HPV 分型,以及流式细胞术 DNA 倍体分析[以 DNA 指数（DI）和 S 期细胞峰百分比（SPF）表示]。按 HPV 分型检测结果分为阴性组、非高危型感染组、单一高危型感染组和混合高危型感染组。结果汉族单一高危型感染组和维吾尔族单一高危型感染组之间的 DNA 倍体分析比较,DI 值和 SPF 值差异有统计学意义（P＝0．033和 P＜0．01）。汉族混合高危型感染组与维吾尔族混合高危型感染组之间的 DNA 倍体分析比较,DI 值和 SPF 均值差异有统计学意义（P＝0．031和 P＜0．01）。在维吾尔族妇女人群中,单一高危型感染和混合高危型感染出现 DNA 异倍体的可能分别是 HPV 感染阴性者的19．783倍和59．231倍。在汉族妇女人群中,单一高危型感染和混合高危型感染出现 DNA 异倍体的可能分别是 HPV 感染阴性者的11．190和22．125倍。结论单一高危型感染和混合高危型感染对维吾尔族和汉族妇女宫颈病变产生程度不同的影响,有必要对不同民族间的高危型HPV 感染情况和宫颈病变的相关性进行分别研究。     

中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6E7基因 …

目的 分析中国山东地区宫颈癌患者ＨＰＶ１６型Ｅ６Ｅ７基因结构特点。方法 从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ,经ＨＰＶ多重引物ＰＣＲ法鉴定标准中感染ＨＰＶ型别,选感染ＨＰＶ１６型的标本ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,获得ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因,将其重组入ｐＡＬＴＥＲ－１载体,进行双向测序、分析。结果 构建了含中国山东地区宫颈癌患者组织中ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７的重组质粒,命名为ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７－ＳＤ。