沉默CD133基因对CD133+肝癌干细胞放射敏感性的影响

目的 研究沉默CD133基因对人肝癌CD133+-HepG2干细胞放射敏感性的影响.方法 免疫磁珠分选HepG2细胞;流式细胞术检测分选前后CD133表达率;NOD/SCID小鼠成瘤实验验证其干性;靶向沉默CD133基因并分组(空白组、阴性感染组、阳性感染组);RT-PCR和Western blot检测各组CD133基因mRNA和蛋白表达;克隆形成实验检测各组细胞经不同剂量照射后的克隆形成率及存活率,绘制存活曲线并计算各组细胞放射生物学参数Do、Dq、N及放射增敏比(SER);流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.结果 流式细胞术检测结果显示,分选前后CD133表达率分别为(1.36±0.20)％和(87.62±1.92)％.CD133+细胞在细胞数为1×103/ml时即可形成皮下移植瘤.RT-PCR和Western blot检测结果显示,阳性感染组CD133 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制.流式细胞术检测结果显示:阳性感染组G1、S 期减少G2期增加,细胞凋亡率明显增加.克隆形成实验显示阳性感染组D0、Dq、N值与SF2均减小,放射敏感性明显增强,其SER为(1.37±0.02),差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 CD133作为肝癌干细胞的表面标志物之一,可能成为肝癌干细胞放射治疗增敏的靶点.     

CD133在肝癌中的研究进展

肝癌恶性程度高、病情进展快.肿瘤干细胞被认为可能是癌症产生、转移和复发的关键.CD133作为公认的肿瘤干细胞标志物,在多种肿瘤组织中表达.同样也有望成为肝癌干细胞的特异性标记物,成为肝癌治疗的新靶点.     

原发性肝癌患者外周血CD133CD105细胞水平及意义

目的 探讨原发性肝癌(HCC)患者外周血CD133+/CD105+细胞表达水平及其与临床预后的关系。方法用流式细胞仪检测80例原发性肝癌患者和20例健康者CD45-/CD133+/CD105+细胞比例,分析其与年龄、性别、临床分期、组织学分化程度、淋巴结转移及手术预后的关系,采用Kaplan-Meier方法进行生存率分析,应用Cox比例风险模型进行多因素分析。结果 原发性肝癌患者外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞水平较术后及健康对照组升高,差异有统计学意义(P=0.003、P=0.000)。术后复发组术前外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞水平高于术后未复发组,差异有统计学意义(P=0.015)。患者外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞比例与临床分期、分化程度、有无淋巴结转移密切相关(均P<0.05),与年龄、性别无关。CD133与CD105的表达呈正相关(r=0.846,P<0.05)。患者外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞比例>0.5%者术后生存率较细胞比例≤0.5%者下降(P<0.05),CD45-CD133+细胞比例>1.1%者术后生存率较细胞比例≤1.1%者降低(P<0.05),CD45-CD105+细胞比例>36%者术后生存率较细胞比例≤36%者降低(P<0.05),外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞表达水平、分化程度、有无淋巴结转移是影响肝癌预后的独立因素。结论 肝癌患者外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞表达水平明显升高并且与肝癌的恶性程度密切相关。外周血CD45-/CD133+/CD105+细胞表达水平降低是肝癌患者预后良好的独立因素,是潜在的抗癌靶标。     

靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定

摘要：目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞
表面标记物CD133 细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133 的特异性短
肽。应用夹心EL ISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序
列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果4 轮液相筛选后,与
CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA 鉴定的20个噬菌体单克隆中,
有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨
基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和
人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子
的高亲和力多肽的方法切实可行。     

不同生长环境中膀胱癌干细胞相关标志物CD44、CD133表达情况的初步研究

目的探讨在不同环境中观察膀胱癌细胞表达癌干细胞相关标志物CD44、CD133的变化情况,为进一步研究人体膀胱癌干细胞提供背景资料和前期数据。方法采用免疫组织化学与流式细胞术等技术,以膀胱癌5637细胞系为研究对象,通过建立体外培养、皮下移植瘤以及裸鼠淋巴结转移模型等模拟不同的生长微环境,观察CD44、CD133等癌干细胞相关标志物的表达情况。结果在体外培养环境中,膀胱癌5637的细胞膜蛋白CD44阳性表达,CD133则阴性表达;膀胱癌裸鼠移植瘤中CD44阳性表达,而CD133弱阳性表达。与体外培养体系比较,流式细胞术检测发现膀胱癌细胞5637中的CD44阳性表达水平无显著变化,而CD133阳性表达水平显著高于体外培养体系（P〈0.01）;在裸鼠淋巴结转移模型中,转移淋巴结均有CD44、CD133阳性表达。结论体内外环境的改变可以调控膀胱癌细胞中部分癌干细胞相关标志物的变化,也提示膀胱癌5637细胞系存在癌干细胞。     

肿瘤干细胞标志物 CD133在大肠癌组织中的表达及意义

目的：研究探讨大肠癌组织中肿瘤干细胞表面标记物CD133的表达及临床意义。方法：采用术后大肠癌组织标本60例,应用免疫组织化学法分别检测癌组织和癌旁组织中的CD133的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。结果：CD133在大肠癌组织中的表达较癌旁组织增强（ P＝0．000）。 CD133在癌组织中的表达在肿瘤的组织学分化程度、肿瘤浸润深度及是否有淋巴结转移间具有统计学意义（ P＝0．008,0．014）。结论：CD133在大肠癌组织中过表达,与部分临床病理特征有关,可以作为大肠癌的免疫学诊断候选标记物。     

RNA干扰抑制CD133 表达对CD133+肝癌干细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+
HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+
HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验
鉴定其“干性”;随后以CD133mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞。应用RT-PCR和
Western Blot检测CD133mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药
物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况。结果分选前后CD133表达率分别为（3.36±1.80）%,（ 88.74±3.19）%;
CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133shRNA后的细胞CD133mRNA表达明显受到
抑制（P<0.05）,蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降（P<0.01）。顺铂对转染CD133shRNA后细胞生长抑制作用明显提高（P<
0.01）,且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加（P<0.05）。结论慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基
因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性。
     

肝癌患者介入治疗前后血清可溶性CD105水平对比研究

目的探讨原发性肝癌患者介入治疗前后血清可溶性CD105水平的变化及其临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测32例正常人以及66例原发性肝癌患者血清可溶性CD105水平,并比较22例原发性肝癌患者介入治疗前后血清可溶性CD105水平。结果原发性肝癌患者血清可溶性CD105水平明显高于正常对照组(P<0.01),血清可溶性CD105水平与临床分期有关、与原发性肝癌患者性别、年龄、病理类型无关;Ⅲ期明显高于Ⅱ期(P<0.01),Ⅱ期明显高于Ⅰ期(P<0.01),Ⅰ期明显高于正常对照组(P<0.01);介入治疗后原发性肝癌患者血清可溶性CD105水平明显低于介入治疗前(P<0.01)。结论血清可溶性CD105可能与原发性肝癌的发生发展有关,血清可溶性CD105检测有可能成为原发性肝癌疗效监测和预后判断的观察指标。     

肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例乳腺癌组织和60例乳腺良性肿瘤组织中CD133的表达,分析其与乳腺癌亚型及临床病理参数间的关系.结果 109例乳腺癌组织中,CD133表达的阳性率为46.8%(51/109),60例乳腺良性肿瘤的阳性率为0.33%(2/60),两者差异具有高度统计学意义(P<0.01);109例乳腺癌组织中,CD133蛋白的表达随病理级别的增加而升高(P<0.05),随临床分期升高及肿瘤直径增大呈下降趋势(P>0.05);乳腺癌4种亚群中,Basal-like亚群中CD133蛋白的阳性率最高,为69.2%,显著高于其他亚群,差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期低分化或未分化癌更富于干细胞,可能与肿瘤细胞恶性演进有关;CD133蛋白的表达具有区分不同乳腺癌亚型作用以及在乳腺癌的预后预测具有重要作用.     

MACS方法分选CD133 /CD44 前列腺癌干细胞的初步鉴定

【摘要】 目的：通过磁珠细胞分选（Magnetic bead cell sorting, MACS）方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133 /CD44 干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法：运用流式细胞仪检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化和Western blot检测诱导分化前后PAP蛋白情况。结果：流式细胞术检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33?0.05)%和(0.87?0.06)%,而MACS分选后分别为(84.82?0.07)%和(99.91?0.03)%;免疫荧光检测CD133 /CD44 细胞培养后继续呈阳性表达;CD133 /CD44 细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0, P=0.008)以及高于诱导后的CD133 /CD44 细胞(t=40.1, P=0.001);CD133 /CD44 细胞经过TGF-β诱导后免疫组化和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133 /CD44 细胞表达呈阴性。结论：MACS从PC-3细胞株中分选的CD133 /CD44 细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。     

肿瘤干细胞标志物CD133和CD44在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133和CD44在肾母细胞瘤中的表达及其意义。方法 收集2010年1月至2017年10月在安徽省立医院未行放化疗而直接进行手术治疗的肾母细胞瘤患者手术切除组织标本,病理诊断同步进行免疫组织化学方法检测组织中CD133和CD44阳性信号强度和阳性细胞数目,计算免疫组织化学评分。同时收集临床病理参数,分析免疫组织化学评分与临床病理参数之间是否存在相关性。结果 共收集肾母细胞瘤患儿64例,其中男性30例,女性34例。年龄中位数为36个月,其中46例年龄≤36个月,18例年龄>36个月。肿瘤大小（最大直径）2～19 cm,中位数为6.5 cm,其中32例≤6.5 cm,另外32例>6.5 cm。58例表现为预后好的病理特征,6例表现为预后差的病理特征。根据NWTS的分期,24例为1期,26例为2期,4例为3期,8例为4期,2例为5期。免疫组织化学评分结果显示,44%（28/64）的标本为CD133阳性,13%（8/64）的标本为CD44阳性。CD133的免疫组织化学评分与肾母细胞瘤NWTS分期有正相关性（r=0.813,P<0.05）;在女童中CD133评分高于男童（P<0.05）;CD133评分与患者的年龄、肿瘤的大小及病理特征无相关性（P>0.05）。结论 CD133在肾母细胞瘤中高表达,其表达水平与肾母细胞瘤的发生及恶性程度存在关系。     

喉癌CD133+肿瘤干细胞与化疗抵抗

目的 筛选喉癌细胞中的CD133+细胞亚群,探讨其肿瘤干细胞特性及化疗抵抗性,并分析其原因。 方法 流式细胞仪检测Hep-2细胞经顺铂,氟尿嘧啶,紫杉醇作用后,CD133表达率的变化。采用流式细胞分选技术分离CD133+,CD133-细胞亚群,观察各亚群对上述药物的反应。采用软琼脂克隆形成实验检测各亚群的克隆形成能力,采用transwell小室体外侵袭实验,检测各亚群细胞的侵袭能力。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和western blot法,检测各亚群细胞中耐药基因ABCG2基因的表达。 结果：Hep-2细胞中CD133表达率为1-2%. 化疗药物作用后CD133+亚群被富集。CD133+细胞克隆形成率为(41.9±3.9%)显著高于CD133-细胞(11.7±1.6%), P<0.01。CDl33+细胞侵袭细胞数为(88±9.7)显著高于CD133-细胞（53±7.2）, P<0.01。CD133+细胞ABCG2的表达水平显著高于CD133-细胞。 结论： CDl33+喉癌细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性, CD133+喉癌肿瘤干细胞存在化疗抵抗,ABCG2的高表达是其中的主要原因。针对CD133+细胞的治疗势必会促进对喉癌治疗的进展。     

Chemoresistance of CD133+ cancer stem cells in laryngeal carcinoma

Background  Mounting evidence suggests that tumors are histologically heterogeneous and are maintained by a small population of tumor cells termed cancer stem cells. CD133 has been identified as a candidate marker of cancer stem cells in laryngeal carcinoma. This study aimed to analyze the chemoresistance of CD133⁺ cancer stem cells.

Methods  The response of Hep-2 cells to different chemotherapeutic agents was investigated and the expression of CD133 was studied. Fluorescence-activated cell sorting analysis was used to identify CD133, and the CD133⁺ subset of cells was separated and analyzed in colony formation assays, cell invasion assays, chemotherapy resistance studies, and analyzed for the expression of the drug resistance gene ABCG2.

Results  About 1%–2% of Hep-2 cells were CD133⁺ cells, and the CD133⁺ proportion was enriched by chemotherapy. CD133⁺ cancer stem cells exhibited higher potential for clonogenicity and invasion, and were more resistant to chemotherapy. This resistance was correlated with higher expression of ABCG2.

Conclusions  This study suggested that CD133⁺ cancer stem cells are more resistant to chemotherapy. The expression of ABCG2 could be partially responsible for this. Targeting this small population of CD133⁺ cancer stem cells could be a strategy to develop more effective treatments for laryngeal carcinoma.

     

HuH7细胞系CD13~+CD133~+HCC细胞分选及CSCs特性分析

目的探讨CD13、CD133双荧光标志流式细胞术(fluorescence activated cell sorter,FACS)分选人肝癌HuH7细胞系CD13+CD133+HCC细胞方法及癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)特征。方法 CD13、CD133双标志,采用FACS从人肝癌HuH7细胞系分选出CD13+CD133+HCC、CD13+CD133-HCC、CD13-CD133+HCC、CD13-CD133-HCC等4种细胞亚群;通过CD13+CD133+HCC细胞生长曲线,细胞周期,形成肿瘤球和裸鼠体内成瘤能力,及对5-FU、吡柔比星化疗药物的敏感性研究,分析CD13+CD133+HCC细胞是否具有CSCs生物学特征。结果人肝癌HuH7细胞系CD13+CD133+HCC细胞占23.8%,3.1%分选为CD13+CD133+HCC细胞,78.45%的CD13+CD133+HCC细胞处于G0/G1期;CD13+CD133+HCC细胞增殖明显快于其他3个细胞亚群;在裸鼠103个CD13+CD133+HCC细胞就可以成瘤,而1.0×105个CD13-CD133-HCC只有2只成瘤(2/5),干细胞培养CD13+CD133+HCC细胞8～15 d形成肿瘤球;CD13+CD133+HCC细胞对5-FU和吡柔比星具有抵抗特性,而其他3个亚群较易于杀灭。结论 CD13、CD133双标志FACS从HuH7分选的CD13+CD133+HCC细胞具有CSCs特征,可能成为HCC治疗靶细胞。     

人HCT116结肠癌细胞系中CD133+结肠癌干细胞分离及鉴定

目的 从人结肠癌细胞系(HCT116)中分离鉴定结肠癌干细胞,并观察其体外生物学特性.方法 利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况;利用免疫磁珠分选技术分选CD133+细胞;采用无血清培养基培养分选后的CD133+细胞鉴定其体外增殖特性;采用含血清培养基诱导干细胞克隆球分化并采用免疫组化检测CK20表达情况鉴定其分化特性.结果 HCT116细胞系中存住CD133+细胞,免疫磁珠能有效的分选CD133+细胞,分选后的阳性含量为91.92%,分选后的阳性细胞具有典型干细胞的体外增殖、分化特性.结论 CD133+结肠癌干细胞在体外具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力,同时它们也表达ABCG2等耐药相火蛋白.     

CD133在人NSCLC组织和细胞系中表达的初步研究

目的观察经典的肿瘤干细胞标记分子CD133在人NCSLC组织和肺癌细胞系中的表达情况。方法用CD133多抗经免疫组化染色观察12例不同类型NSCLC组织中CD133的表达,经免疫荧光染色观察CD133在H446、SPC-A1肺癌细胞中的表达。用AC133单抗经流式和激光共聚焦观察人NSCLC组织、肺癌细胞系中糖基化CD133抗原(AC133抗原)的免疫活性。结果CD133多抗染色发现CD133在NSCLC组织、正常肺组织、H446细胞和SPC-A1细胞中普遍表达。AC133单抗染色发现不同类型NSCLC组织均有少量AC133( )细胞,而在H446、SPC-A1肺癌细胞及正常肺组织中未检测到AC133( )细胞。结论不同类型NSCLC组织中有少量的AC133( )细胞,为深入研究肺癌发生、发展的分子机制提供了新的靶点。     

肝细胞癌组织中三磷酸腺苷结合盒转运体G2和CD133蛋白的表达

目的:检测人肝细胞癌(HCC)组织中干细胞标志物三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)和CD133蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学法检测48例HCC及癌旁正常肝组织中ABCG2和CD133蛋白的表达,并分析其表达情况与临床病理特征的关系.结果:ABCG2蛋白阳性表达率在HCC和癌旁肝组织中分别为47.9%(23/4...