卵巢癌患者外周血单个核细胞Toll样受体2的表达及其诱导的IL-10表达

目的:观察Toll样受体2(Toll-like receptors 2,TLR2)在卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达及其诱导IL-10的表达水平,初步探索TLR2在卵巢癌发生发展中的作用机制?方法:收集20例卵巢癌患者?20例妇科良性疾病患者及20例同期健康体检女性EDTA抗凝外周全血,采用荧光定量PCR技术检测3组PBMC中TLR2的表达水平,并比较3组表达差异情况?TLR1?TLR2和TLR6相应配体刺激PBMC,细胞中细胞因子IL-10表达水平采用荧光定量PCR技术进行检测;流式细胞技术(FACS)检测各组IL-10分泌水平?结果:各组PBMC中TLR2均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2表达量显著高于良性疾病组和健康对照组(P < 0.05),良性疾病组TLR2表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达明显增强,分别为良性疾病组和健康对照组的2.25?2.33倍,妇科良性疾病组IL-10 mRNA表达水平与健康对照组间无显著差异;TLR6配体FSL-1刺激后,卵巢癌组IL-10 mRNA表达水平分别为良性疾病组和健康对照组的1.95?2.16倍,差异具有统计学意义(P < 0.05),而良性疾病组与健康对照组间无显著差异?FACS结果显示各组PBMC经TLR1的配体Pam3CSK4刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值(M)分别为46.70?61.53?31.11 pg/ml,差异无统计学意义;经TLR2配体HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-10分泌水平(M = 150.46 pg/ml)显著高于良性疾病组(M = 38.86 pg/ml)及健康对照组(M = 44.93 pg/ml),差异有统计学意义(P < 0.05),良性疾病组与健康对照组间无显著性改变;TLR6配体FSL-1刺激24 h后,卵巢癌组?良性疾病组及健康对照组IL-10分泌水平中位值分别为20.20?31.12?35.48 pg/ml,3组间无显著差异?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2表达水平显著增高,经其介导的细胞因子IL-10表达水平的改变可能与卵巢癌的免疫抑制相关,在卵巢癌的肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用?     

Toll样受体在卵巢癌发生发展中作用机制的初步探讨

目的:观察卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs) mRNA的表达水平,研究高表达TLRs在卵巢癌发病中的可能机制?方法:研究对象包括卵巢癌24例?妇科良性疾病22例及同期健康体检女性22例?采用密度梯度离心法分离PBMC后,提取总RNA,并逆转录为cDNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测TLR1~TLR9 mRNA的表达水平;选择mRNA高表达的TLRs的相应激动剂刺激PBMC,采用Real-time PCR检测PBMC中前炎症细胞因子白细胞介素(IL)-1β?IL-6?IL-12P40的mRNA表达水平?结果:各组PBMC中TLR1~TLR9均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2?TLR6表达量显著高于健康对照组(TLR2:F = 3.27,P < 0.05;TLR6:F = 2.21,P < 0.05);卵巢癌组TLR2的表达量明显高于妇科良性疾病组(F = 3.24,P < 0.05);良性疾病组TLRs表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的激动剂HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-1β?IL-6?IL-12P40 mRNA表达明显增强,分别为健康对照组的2.24?2.94?2.35倍(P < 0.05),为良性疾病组的2.02?2.50?2.85倍 (P < 0.05);良性疾病组与健康对照组比较无显著改变(F = 1.11,F = 1.18,F = 0.82,P > 0.05)?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2?TLR6表达水平显著增高,经其介导的炎症因子IL-1β?IL-6?IL-12P40 mRNA表达水平的改变可能在卵巢癌的发生发展中发挥作用?     

湿性年龄相关性黄斑变性患者外周血单个核细胞Toll样受体3的表达及意义

目的：探索 Toll 样受体（toll-like receptors,TLRs）3/4在湿性年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration,AMD）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）的表达及其意义。方法：25例湿性AMD患者和24例正常对照纳入本研究。患者与正常对照组均不患有糖尿病、冠心病、高血压等慢性疾病或免疫性疾病及与免疫相关的疾病。采用real-time PCR 的方法检测TLR3/4的基因水平的表达,流式细胞术检测 TLR3蛋白水平的表达。TLR3特定的配体PolyI∶C刺激后,ELISA检测白介素（interleukin,IL）-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）的表达。结果：在PBMCs水平,AMD组TLR3在mRNA及蛋白水平表达均显著高于正常对照组,而TLR4的mRNA水平表达在2组之间无统计学差异。与对照组PBMCs相比,AMD组PBMCs IL-6及IL-8的表达明显升高,TLR3的配体PolyI∶C刺激后,AMD组PBMCs IL-6的表达显著增多,MCP-1、IL-8的表达在2组之间无统计学差异。结论：TLR3在AMD组表达上调,活化后可促进IL-6表达增多。由此推测TLR3信号通路可能通过促进促炎性细胞因子的表达在湿性AMD的发病发展中发挥着重要作用。     

TLR2和TLR4在生殖器疱疹患者外周血白细胞上的表达

目的探讨Toll样受体2和4（Toll—likereceptor,TLR2、TLR4）的表达在生殖器疱疹发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测32例生殖器疱疹患者及22例正常人外周血淋巴细胞、单核细胞和粒细胞表面TLR2和TLR4的表达。结果TLR2和TLR4在外周血单核细胞上的表达相对较高,而在淋巴细胞和粒细胞上的阳性率平均值均低于5％;患者和对照组相比,各细胞表面TLR2的表达水平无显著差异（P＞0．05）,TLR4在两组淋巴细胞上表达水平无显著差异（P＞0．05）,患者TLR4在单核细胞上的表达水平为（18．49％±10．01）％。显著高于对照组（8．02％±5．37）％（P〈0．001）;患者TLR4在粒细胞细胞上的表达水平为（1．90％±1．46）％,比对照组的（0．45％±0．25）％明显升高（P〈0．001）。结论单核细胞和粒细胞表面的TLR4在对病毒识别、增强特畀陡的信号传导、启动抗病毒的固有免癌反应中起着重要作用。     

重症肺炎患者外周血单核细胞TLR4的表达

目的分析重症肺炎患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达变化,为临床观察重症肺炎的预后与治疗效果提供依据。方法选取2010年1月至2014年12月于重庆市开县安康医院诊治的重症肺炎患者120例为观察组,同时选取本院健康体检者120例为对照组;应用逆转录PCR技术和流式细胞术检验两组患者在治疗第1、3、7天时的外周血单核细胞TLR4表达;根据观察组患者的存活情况分为生存组与死亡组,并进行急性生理与慢性健康评分和社区获得性肺炎CURB-65评分,常规检测C反应蛋白和降钙素原水平。结果观察组在外周血单核细胞TLR4 m RNA及TLR4 rMFI方面显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组在治疗第3、7天时的TLR4 mRNA及TLR4 rMFI方面比第1 d时出现明显的下降(P0.05)。在一个月后的随访调查中,观察组死亡率为31.7%(38/120),死亡组在急性生理与慢性健康评分、社区获得性肺炎CURB-65评分以及降钙素原水平等方面都显著高于生存组,但生存组在外周血单核细胞TLR4蛋白表达方面高于死亡组(P0.05)。结论重症肺炎患者外周血单核细胞TLR4表达水平与正常人相比较高。     

哮喘大鼠TLR1、 FasL和TRAF2表达及甲基强的松龙干预作用

目的:探讨TLR1、FasL和TRAF2在大鼠哮喘炎症机制中的作用,观察甲基强的松龙对其表达的影响。方法:27只SD大鼠,随机分成哮喘模型组、正常对照组和甲基强的松龙组,每组9只,采用流式细胞术检测血淋巴细胞TLR1和FasL表达,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2表达。结果:哮喘组血淋巴细胞TLR1表达水平显著低于甲基强的松龙组(P<0.05),正常对照组血淋巴细胞TLR1表达水平分别与哮喘组及甲基强的松龙组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。哮喘组和甲基强的松龙组血淋巴细胞FasL表达水平均显著高于正常对照组(P均<0.05),而哮喘组血淋巴细胞FasL表达水平与甲基强的松龙组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘组TRAF2光密度值显著高于正常对照组和甲基强的松龙组(P均<0.01),甲基强的松龙组TRAF2光密度值与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘模型大鼠FasL和TRAF2表达增加,而TLR1无变化;甲基强的松龙能下调TRAF2和提升TLR1水平,从而起到抗炎作用。     

TLR9、MyD88及NF-κB在过敏性紫癜中的表达及意义

目的 探讨免疫上游因子TLR9、MyD88、NF-κB及免疫下游细胞因子IL-6、TNF-α在HSP组与正常对照组间的差异及相关性。方法 采用实时荧光定量PCR检测HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达量,ELISA法检测血浆IL-6、TNF-α水平。结果 1HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达均显著高于正常对照组;2HSP组血浆IL-6、TNF-α水平较对照组水平显著增高;3HSP组中TLR9与MyD88、TLR9与NF-κB、MyD88与NF-κB、NF-κB与IL-6以及NF-κB与TNF-α均存在线性正相关关系。结论HSP患儿TLR9、MyD88、NF-κB、IL-6、TNF-α水平均较正常儿童显著升高。TLR9-MyD88-NF-κB信号通路参与HSP发病,并在其中起重要作用。     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

HBV转染和Loxoribine刺激对TLR7表达及IFN-α、IL-12水平的影响

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)转染和Loxoribine刺激对Toll样受体7(TLR7)表达及干扰素-α(IFN-α)、白介素-12(IL-12)水平的影响。方法采用流式细胞术检测TLR7特异性配体Loxoribine刺激前后Hep G2和Hep G2.2.15细胞株TLR7的表达情况,ELISA法检测Loxoribine刺激培养的乙肝病毒携带组、慢性乙肝患者组和健康对照组外周血单个核细胞(PBMC)上清液中IFN-α、IL-12的水平。结果 Hep G2.2.15细胞内TLR7表达量较Hep G2细胞低(P0.05),Loxoribine刺激培养后Hep G2和Hep G2.2.15细胞内TLR7的表达量均升高,但差异无统计学意义(P0.05)。乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组PBMC上清液中IFN-α水平较健康对照组低(P0.05),慢性乙肝患者组IL-12水平较乙肝病毒携带组和健康对照组高(P0.05);Loxoribine刺激培养后健康对照组IFN-α、IL-12升高水平与乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组比较,差异有统计学意义(P0.05);乙肝病毒携带组和慢性乙肝患者组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 HBV转染可下调TLR7的表达,乙肝病毒感染者外周血单个核细胞对Loxoribine刺激后TLR7介导的INF-α、IL-12分泌调节功能下降。     

右美托咪啶对老年患者全麻术后炎症因子水平及单核细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的观察右美托咪啶对老年腹部手术患者围术期炎症因子水平及单核细胞TLR2和TLR4表达的影响。方法选择老年全麻患者91例,采用随机数字表法将患者分为：右美托咪啶组（D组）46例和对照组（C组）45例。两组均常规咪达唑仑、顺苯磺酸阿曲库铵、舒芬太尼、依托咪酯行麻醉诱导,诱导前10min,D组静脉输注右美托咪啶针,负荷量0.5滋g/kg,再分别恒速静脉输注右美托咪啶针0.5滋g/（kg·h）至术毕前30min;C组采用同样方法静脉输注等容量0.9%氯化钠溶液。记录舒芬太尼、瑞芬太尼和异丙酚用量。于麻醉前（T0）、手术开始1h（T1）、手术结束后12h（T2）及24h（T3）时各采集右颈内静脉血5ml,采用ELISA测定HMGBl、TNF-α、IL-6水平,并采用流式细胞仪检测单核细胞TLR2和TLR4的表达水平。结果与C组比较,D组瑞芬太尼针和丙泊酚针用量明显减少（P＜0.01）,舒芬太尼用量差异无统计学意义（P＞0.05）。与C组比较,D组TNF-α、IL-6和HMGB1水平在T1、T2、T33个时点均明显降低（P＜0.05）;D组单核细胞TLR2和TLR4的表达水平在T1、T2、T33个时点均明显降低（均P＜0.05）。结论右美托咪啶可以降低老年腹部手术患者围术期炎症因子水平及抑制单核细胞TLR2和TLR4表达。     

溃疡性结肠炎小鼠结肠中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达

目的 通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用.方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7d造模,第3组予5％ DSS溶液自由饮用14 d造模.取各组小鼠的结肠标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR2、TLR3、TLR5、TLR9的表达.结果 ①正常小鼠结肠中无TLR2、TLR3、TLR5和TLR9表达;②造模7d小鼠结肠中无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9出现明显表达;③造模14d小鼠结肠中仍然无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9的表达则继续增加.结论 TLR2和TLR9可能参与了溃疡性结肠炎的致病机制,而TLR3和TLR5可能未参与UC的致病机制.     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

TLR3c.1377, TLR9-1486)和TLR9 2848基因多态性与多发性硬化易感性的关系

目的:探讨中国南方汉族人群Toll样受体(Toll like receptor, TLR)3和9单核苷酸多态性与多发性硬化(multiple sclerosis, MS)遗传易感的相关性.方法:以123名临床及实验室确诊的中国南方汉族MS患者和126名与入组病人种族、年龄、性别相匹配健康志愿者为研究对象,利用聚合酶链-限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测TLR3和TLR9基因多态性.结果:TLR3c.1377基因型、等位基因频率MS组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),携带T等位基因可降低MS患病危险性((OR=0.532, P=0.014).TLR9-1486基因型、等位基因频率在MS组与对照组间分布差异无统计学意义;TLR9 2848 A等位基因频率MS组较对照组增高(39.8% vs. 30.6%,P=0.037),A+等位基因携带者明显高于A-携带者患病危险性 (OR=1.837,P=0.020).关联分析未发现TLR3c.1377与(TLR9-1486)和TLR9 2848有联合作用.TLR9-1486和TLR9 2848处于强连锁不平衡状态;MS组与对照组间单倍体型频率分布差异无统计学意义.结论:TLR3c.1377基因型频率、等位基因频率及TLR9 2848等位基因频率可能与中国南方汉族人群MS发病相关,两基因位点可能均是MS的易感基因或与易感基因相(连锁.)     

TLR3c.1377,TLR9-1486和TLR9 2848基因多态性与多发性硬化易感性的关系

目的：探讨中国南方汉族人群Toll样受体（Toll like receptor,TLR）3和9单核苷酸多态性与多发性硬化（multiple sclerosis,MS）遗传易感的相关性。方法：以123名临床及实验室确诊的中国南方汉族MS患者和126名与入组病人种族、年龄、性别相匹配健康志愿者为研究对象,利用聚合酶链-限制性长度多态性分析（PCR-RFLP）技术检测TLR3和TLR9基因多态性。结果：TLR3c.1377基因型、等位基因频率MS组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,携带T等位基因可降低MS患病危险性（OR=0.532,P=0.014）。TLR9-1486基因型、等位基因频率在MS组与对照组间分布差异无统计学意义;TLR92848A等位基因频率MS组较对照组增高（39.8%vs.30.6%,P=0.037）,A＋等位基因携带者明显高于A-携带者患病危险性（OR=1.837,P=0.020）。关联分析未发现TLR3c.1377与TLR9-1486和TLR92848有联合作用。TLR9-1486和TLR92848处于强连锁不平衡状态;MS组与对照组间单倍体型频率分布差异无统计学意义。结论：TLR3c.1377基因型频率、等位基因频率及TLR92848等位基因频率可能与中国南方汉族人群MS发病相关,两基因位点可能均是MS的易感基因或与易感基因相连锁。     

幽门螺杆菌感染患者胃黏膜组织中TLR2、TLR5的表达

目的:检测幽门螺杆菌(HP)感染患者胃黏膜组织中Toll样受体TLR2、TLR5的表达.方法:采用免疫组化SP法检测33例非HP感染患者(对照组)和35例HP感染患者(试验组)胃黏膜组织中TLR2和TLR5的表达.结果:TLR2在试验组和对照组均无表达.试验组胃黏膜组织中TLR5的阳性表达率(60.0%)明显低于对照组(84.8%)(λ2=5.209,P＜0.05).结论:TLR2在人胃黏膜组织中无表达,HP感染可下调胃黏膜组织中TLR5的表达.     

Toll样受体4与原发性高血压的相关研究

Toll样受体(TLR)4是最近发现的模式识别受体之一,其介导的先天及适应性免疫反应参与高血压的慢性血管炎性反应。基础性研究发现,TLR4可能通过核因子κB信号转导途径调控多种炎性分子的表达,参与内皮细胞炎性损伤、血管重塑等病理过程,与高血压进展及高血压性心肌肥厚密切相关,有关该方面研究将为高血压的临床防治提供全新的思路。     

TLR2和TLR4在人颈动脉硬化斑块中的表达

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在人颈动脉硬化斑块中的表达及其与斑块形成的关系.方法 根据术后组织病理学报告选择性收集36例新鲜颈动脉硬化斑块,其中软斑组12例,硬斑组12例,混合斑组12例,以及12例正常脾动脉组织作为对照组,采用RT-PCR检测标本组织中TLR2及TLR4 mRNA的表达水平;应用免疫组化检测TLR2和TLR4蛋白在标本组织中的表达.比较不同性质颈动脉硬化斑块组织TLR2和TLR4的mRNA及蛋白表达水平.结果 RT-PCR结果显示颈动脉硬化斑块组织中TLR2和TLR4相对水平分别为(0.926±0.047)和(1.040±0.056).显著高于脾动脉组织的(0.646±0.033)和(0.691±0.031)(P＜0.05);免疫组化结果显示TLR2和TLR4在颈动脉硬化斑块中相对水平分别为(135.295±17.787)和(130.368±14.969),显著高于脾动脉组织的(82.396±6.668)和(98.898±9.089)(P＜0.05);且TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达上调水平相关,TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达水平与斑块性质有关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR2及TLR4在颈动脉硬化斑块组织中高表达;TLRs信号通路可能促进了颈动脉硬化程度的进展.     

缺血性脑卒中患者TLR2 TLR4与血小板神经功能的关系

目的 探究缺血性脑卒中患者外周血单核细胞(PBMC)中Toll样受体(TLR)2、TLR4表达水平与血小板活化及神经功能的关系。方法 选取2017年5月至2020年6月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的134例缺血性脑卒中患者为研究对象(研究组),同期140例健康体检者为对照(对照组),收集两组对象一般资料。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测两组对象PBMC中TLR2、TLR4 mRNA水平;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组对象血浆中血小板活化因子(PAF)、血小板活化标志物α颗粒膜糖蛋白140(GMP-140)、β-血小板球蛋白(β-TG)、血小板第4因子(PF4)水平;采用美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分评估研究组患者神经功能;Spearman分析研究组患者PBMC中TLR2、TLR4与糖尿病史、高血压史的相关性;Pearson分析研究组患者PBMC中TLR2、TLR4与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,血浆中PAF、GMP-140、β-TG、PF4水平,NIHSS评分的相关性。结果 与对照...     

TLR2、TLR4在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及意义

目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs) TLR2、TLR4在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及意义.方法 60只雄性SD大鼠,随机均分为造模组、缝线组、对照组.造模组行末端回肠-盲肠侧侧吻合术,缝线组只在末端回肠作手术缝线,对照组只给予麻醉,不作手术.分别于2周及8周时处死大鼠,收集...