雌激素上调LRP16基因表达的研究

目的：鉴定LRP16基因的表达调控途径并探讨其可能机制。方法：对LRP16基因进行启动子序列顺式作用元件和信息学角度的SAGE(serial analysis of gene expression)谱分析，提示雌激素对其可能具有转录调控作用。为证实这一作用，构建了LRP16基因启动子序列(2．6kb)调控的荧光素酶报告子(pS0)，并与雌激素受体α和β(ERα，ERβ)真核表达载体共转染COS-7和MCF-7细胞，加入雌二醇(β-E2)培养，lueiferase assay方法测定相对荧光素酶活性。结果：报告子pS0与ERα真核表达载体共转染细胞的相对荧光素酶活性较非共转染组及pS0／ERβ表达载体共转染组显著升高，并且在两种细胞中的升高幅度接近。结论：LRP16是受雌激素调控的一个新识别的靶基因，具体调控途径由雌激素变构激活的ERα直接介导，其临床意义有待进一步研究。     

LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用

目的研究LRP16在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的表达;LRP16转染细胞,RT-PCR证实转染的成功性,WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为83.33%、0.82±0.21)明显高于正常子宫内膜组织(分别为30.00%、0.47±0.18),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示转染后细胞LRP16mRNA表达明显增加。转染组HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力并没有增强。结论 LRP16的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。     

NES1在人子宫内膜腺上皮细胞及子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达

目的：研究正常上皮细胞特异性-1基因（normal epithelial cell specific-1,NES1）在人正常子宫内膜腺上皮细胞和子宫内膜癌细胞Ishikawa中的表达。方法：原代培养人子宫内膜腺上皮细胞,用免疫荧光定量PCR及Western blot的方法检测NES1在子宫内膜腺上皮细胞和Ishikawa细胞中的表达。结果：成功培养人子宫内膜腺上皮细胞;NES1在正常人子宫内膜腺上皮细胞中表达,表达定位在细胞质。NES1在Ishikawa细胞中表达较在子宫内膜腺上皮细胞中明显降低（P〈0.05）。结论：NES1基因表达缺失可能是子宫内膜癌的发生机制。     

LRP16与子宫内膜癌的相关研究及前景

子宫内膜癌（EC）是妇科常见三大恶性肿瘤之一,约占女性癌症总数的7％．占女性生殖道恶性肿瘤的20％-30％,其发病率每年24．6／100,000,在我国近二十年来也呈逐年上升趋势。内膜癌根据其与雌激素受体关系的不同分为两种不同的类型：一种与雌激素刺激无关,这种肿瘤常发生在萎缩的内膜基础之上,常为未分化型,预后差,多见于老年绝经后女性．多为浆液性乳头状瘤、透明细胞癌等少见肿瘤;     

鸟氨酸脱羧酶基因沉默对子宫内膜癌细胞Ishikawa的影响

目的利用RNA干扰技术,观察鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞的沉默效应及对Ishikawa细胞增殖周期的影响。方法设计合成以鸟氨酸脱羧酶基因为靶向目标的siRNA序列质粒,利用脂质体介导的方法将质粒转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,实验分三组：Ishikawa组,pSUPER-EGFP组,pSUPER-EGFP-ODC组。用Real-time PCR和Western blot检测ODC的表达情况。采用MTT和流式细胞术来检测ODC基因沉默对Ishikawa细胞生长的影响。结果 Real-time PCR和Western显示pSUPER-EGFP-ODC组细胞ODC mRNA和蛋白质表达水平明显下降。MTT示pSUPER-EGFP-ODC能显著抑制Ishikawa细胞的增殖活性,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。流式细胞术结果示pSUPER-EGFP-ODC能显著阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期,S期细胞数相应减少,并诱导细胞凋亡,与Ishikawa相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论转染靶向ODC基因的siRNA序列质粒能够下调ODC基因的表达,抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa在体外的增殖,阻滞Ishikawa细胞于G0/G1期并诱导细胞凋亡。     

大蒜素抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的实验研究

目的 研究大蒜素抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 以不同浓度大蒜素（12.5、25、50μg/ml）和顺铂（40μg/ml）分别干预对数生长期Ishikawa细胞,采用MTT法检测Ishikawa细胞增殖抑制;通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blot法检测Ishikawa细胞中caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测Ishikawa细胞中Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果 大蒜素能够显著提高子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制率、阻滞Ishikawa细胞周期于G₂/M期,提高细胞凋亡率、上调caspase-3蛋白和Bax mRNA表达、下调bcl-2 mRNA表达、提高Bax/bcl-2表达比值,且上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论 大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖具有抑制作用以及促其凋亡的作用,从而表现出其抑制Ishikawa细胞生长的作用;作用机制可能与大蒜素能够改变Ishikawa细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

雌激素上调LRP16基因表达靶启动子区的研究

目的:鉴定雌激素上调LRP16基因表达关键的靶启动子区域并探讨其分子机制。方法:对LRP16基因5′-侧翼2.6kb中的-213bp至-24bp启动子区进行亚克隆,构建5个控制不同启动子长度的荧光素酶报告重组子pS7-11,以既往构建的pS5、pS6为对照,与雌激素受体α(ERα)真核表达载体共转染MCF-7和Hela细胞,加入雌二醇(17β-E2)刺激后通过Luciferase assay方法测定相对荧光素酶活性。结果:MCF-7和Hela两个细胞系各组相对荧光素酶活性值上升趋势相平行,-213bp至-24bp区域各启动子克隆均具有较高的转激活活性,特别是pS10,在MCF-7细胞中对报告基因的上调活性达427倍,远远高于pS5。结论:E2主要通过-213bp至-24bp区域增强LRP16基因的转录,其中-213bp至-126bp(pS10)应为关键的启动子区。     

紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡

目的通过研究紫草素诱导Ishikawa细胞凋亡的过程中对PI3K/AKT信号通路的影响,探讨紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导子宫内膜癌细胞凋亡的机制。方法 Ishikawa细胞体外培养,经0.3μg·m L-1、0.5μg·m L-1、0.7μg·m L-1紫草素处理细胞后,倒置显微镜观察不同时间Ishikawa细胞生长变化;RT-PCR及Western-blot检测相关蛋白的表达。结果随着紫草素作用浓度的增加及干预时间的延长,Ishikawa细胞数量逐渐减少;紫草素作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞48 h后,p Akt、Bcl-2的蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),而Akt的蛋白表达含量与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论紫草素能够抑制Ishikawa细胞的生长,且呈浓度依赖性;紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡是通过抑制PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化,从而对Akt下游靶蛋白Bax上调和Bcl-2下调,发挥了诱导细胞凋亡的作用。     

p16蛋白和PCNA在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的探讨p16基因和PCNA在子宫内膜癌发生发展中的作用.方法采用免疫组化技术检测子宫内膜癌组织中p16蛋白和PCNA的表达.结果子宫内膜癌组织p16蛋白表达阳性率低于正常内膜组织(P《0.05),而PCNA表达高于正常内膜组织(P《0.01),p16蛋白表达与子宫内膜癌组织学分级、淋巴转移相关(P《0.05,P《0.05),PCNA指数与子宫内膜癌的临床分期、组织学分级、淋巴转移相关.p16蛋白表达阴性者预后差.结论p16基因和PCNA可能参与子宫内膜癌的发生发展,p16蛋白检测可做为子宫内膜癌的预后指标.     

子宫内膜癌患者组织中雌激素受体mRNA和蛋白的表达及其意义

目的 探讨子宫内膜癌患者组织中雌激素受体α和β(ERα和ERβ)mRNA和蛋白的表达及其意义.方法 采用RTPCR和免疫组织化学法检测25例子宫内膜癌组织和22例正常子宫内膜组织中ERα、ERβmRNA和蛋白的表达水平,并分析比较子宫内膜癌不同手术分期和组织学分级雌激素受体α和βmRNA和蛋白的表达水平.结果 与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织ERα、ERβmRNA的表达明显降低(P＜0.05),ERαmRNA的表达随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈下降趋势,ERβmRNA的表达则随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势.正常子宫内膜组织ERα、ERβ表达连续、均匀,主要在上皮细胞核内,间质细胞有少量表达;子宫内膜癌组织中ERα、ERβ分布不均匀,染色强度弱.与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中ERα、ERβ阳性表达率明显降低(P＜0.05),子宫内膜癌组织中ERα阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈降低趋势,ERβ阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势.结论 ERα、ERβ的低表达可能与子宫内膜癌的发病有关.     

LRP16基因在乳腺癌中的表达及临床意义

目的：检测LRP16基因在乳腺癌中的表达及与乳腺癌预后的相关性。方法：用免疫组化方法检测62例临床乳腺癌标本中LRP16、ER、PR和E-cadherin的表达。结果：LRP16、ER、PR和E-cadherin在临床乳腺癌标本中表达的阳性率分别为56.5%、56.5%、48.4%、40.3%。LRP16在临床乳腺癌中的表达与肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、临床分期、ER表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关（P〈0.05）。E-cadherin在临床乳腺癌标本中的表达与腋窝淋巴结转移、临床分期呈明显负相关（P〈0.05）。结论：LRP16与乳腺癌生物学行为密切相关,可以作为乳腺恶性程度评判的新指标。     

子宫内膜癌组织中E-钙粘素与β-连环素的表达

目的:探讨子宫内膜癌组织中E-钙粘素和β-连环素的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测58例子宫内膜癌、32例正常增生期子宫内膜和22例不典型增生子宫内膜石蜡包埋组织中E-钙粘素和β-连环素的表达。结果:在正常增生期子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中E-钙粘素和β-连环素的异常表达率依次增高(P<0.05)。E-钙粘素的表达与肌层浸润、FIGO分期和淋巴结转移有关;而β-连环素的表达与病理分级、FIGO分期和淋巴结转移有关。结论:在子宫内膜癌发生发展过程中E-钙粘素和β-连环素异常表达起重要作用。     

子宫内膜癌患者血雌激素水平与预后的关系探讨

目的探讨雌激素水平与子宫内膜癌的关系。方法对92例绝经后子宫内膜癌的雌激素水平及其临床病理资料进行回顾性分析。结果92例患者中,高雌激素水平（术前血浆雌二醇＞385pmol/L,平均值1246.9±119.4pmol/L）58例（63.04%）,雌激素水平在正常范围（术前血浆雌二醇＜385pmol/L,平均值192.8±128.9pmol/L）34例（36.96%）;前者伴发肥胖、高血压、糖尿病明显高于后者（P＜0.05）,且前者临床期别早,组织学改变以子宫内膜增生常见（P＜0.05）,细胞分化好,肌层浸润及宫颈转移前者显著低于后者（P<0.05）;5年生存率前者91.38%,后者73.53%,二者有显著差异（P<0.05）。结论子宫内膜癌存在两种类型,Ⅰ型为雌激素相关型,Ⅱ型为非雌激素相关型。Ⅰ型预后较好。     

雌激素受体α异构体在子宫内膜癌组织中表达及与肿瘤预后的相关性分析

目的探讨雌激素受体α（ERQ）不同异构体在子宫内膜癌（EC）中的生物学作用及对EC患者预后的影响。方法 对116例雌激素依赖型EC患者进行回顾性研究,分析EC组织中ERα表达谱与肿瘤临床病理指标、颅后的相关性。采用Real—Time PCR检测患者肿瘤组织石蜡切片中RNA的目标基因表达量。结果ERct表达与EC的分化程度（rs=-0．214,Spearman’stest）、淋巴转移（rs=-0．186,Spearman＇s test）及国际妇产科联盟（FIGO）分期（rs=-0．221,Spearman’stest）相关。ERα7号外娃子缺失表型（△7）是表达量最多的一种异构体,其表达量与肿瘤的分化及FIGO分期相关,且△7表达量高行较表达量低者预后佳（疾病特异性生存率P=0．026,疾病无进展生存率P=0．038）。结论ERα△7异构体的表达是决定EC预后的独立危险因子,影响肿瘤患者预后。     

雌激素受体亚型ERα和ERβ在子宫内膜癌的表达研究

目的:探讨雌激素受体亚型ERα和ERβ在子宫内膜癌发生发展中的作用及意义。方法:采用免疫组化方法,分别检测了43例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中ERα和ERβ表达情况。结果:(1)正常内膜和内膜癌组织间ERα蛋白表达强度有统计学差异(P<0.05)。(2)正常内膜和内膜癌组织间ERβ蛋白表达强度有统计学差异(P<0.01)。(3)ERα、ERβ在子宫内膜的表达从正常内膜到内膜癌随着病变的进展呈逐渐下降的趋势。内膜癌中ERα缺失18例占41.86%,ERβ缺失16例占37.21%,ERα/ERβ之值在内膜癌中呈下降的趋势。(4)ERα表达在内膜癌发生中的变化显著高于ERβ。结论:在子宫内膜癌的发生过程中,ERα的缺失起主要作用,ERβ则起调节作用。     

雌激素受体α与其靶基因LRP16相互作用的研究

目的:既往研究表明LRP16是雌激素受体α(ERα)诱导表达的一个靶基因,但可以反馈激活ERα介导的转录活性,本研究目的在于探讨该反馈效应的分子机制.方法:GST-pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测LRP16与ERα体内外的相互作用.结果:GST-pulldown与CoIP实验结果均表明LRP16与ERα可以直接结合,并且表明该相互作用不依赖于雌激素的存在,但雌激素可以增强二者的结合.结论:LRP16不仅是ERα的一个下游靶基因,而且是ERα的一个共激活因子.     

LRP16在肝硬化组织、癌旁组织及癌组织中的表达及意义

目的:探讨白血病相关蛋白16(LRP16)在肝癌中的表达规律,寻求其作为肝癌早期诊断及判断临床预后指标的可能性。方法:用Western印迹杂交法检测42例肝癌标本或新鲜组织中LRP16的表达情况,分析其与病理因素的关系。结果:LRP16在肝硬化组织、癌旁组织及癌组织中均有表达,但表达量依次减少。LRP16高表达者一般肿瘤直径较小,具有完整的包膜,一般无血管侵犯,多为中低分化腺癌。结论:LRP16高表达者具有较好的生物学特性。LRP16可能在判断肝癌生物学特性方面具有一定前景。     

高表达LRP16基因对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究LRP16基因高表达对前列腺癌细胞增殖及侵袭生长的影响。方法利用稳定转染LRP16基因的细胞系,以MTT法测定细胞增殖活性,以平铺Matrigel胶的Transwell培养小室检测细胞的侵袭生长能力。结果高表达LRP16基因对ALVA41细胞(雄激素受体阳性)的增殖没有影响,而对DU145细胞(雄激素受体阴性)则有促进增殖的作用;高表达LRP16基因可抑制ALVA41细胞的侵袭生长,而对DU145细胞的侵袭生长没有影响。结论高表达LRP16基因促进DU145细胞增殖,而抑制ALVA41细胞侵袭生长,可能与除雄激素受体以外的其他机制有关。     

应用基因芯片技术研究LRP16基因对成熟脂肪细胞功能的影响

目的：探讨LRP16基因对成熟脂肪细胞功能影响及其潜在的临床意义。方法：应用高通量基因芯片分析技术,比较高表达LRP16的成熟脂肪细胞与正常表达组的差异。结果：实验组与对照组间差异表达基因共有1222个,其中653个上调,569个下调。结论：对脂肪细胞LRP16的总体功能是促进（微）炎症状态,对脂肪分化、胰岛素抵抗以及糖脂代谢都有影响。