妊娠期糖尿病对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的 明确孕鼠妊娠期糖尿病(GDM)对胎鼠原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)形态、功能的影响及意义.方法 SD孕鼠分为对照组和GDM组,GDM组孕鼠建立GDM模型.分离、纯化两组胎鼠的AECⅡ细胞.台盼蓝染色判断胎鼠AECⅡ活力;透射电镜观察胎鼠AECⅡ超微结构改变.苏木素-伊红(HE)染色胎肺组织计算AECⅡ和AECⅠ数量及比例;油红O染色检测胎鼠AECⅡ脂质的变化;免疫荧光检测胎鼠AECⅡ中肺泡表面活性物质相关蛋白C(SP-C,AECⅡ标记物)的表达变化;免疫细胞化学检查胎鼠AECⅡ肺泡表面活性物质相关蛋白A(SP-A)的表达变化.结果 原代培养可得到高产量、高纯度的AECⅡ.透射电镜下可见GDM组胎鼠AECⅡ中板层小体数较对照组胎鼠明显减少,细胞表面的微绒毛明显减少.GDM组胎鼠AECⅡ和AECⅠ细胞数量较对照组胎鼠均降低.GDM组胎鼠AECⅡ中脂滴数较对照组胎鼠明显减少.GDM组胎鼠原代培养的AECⅡ中SP-A表达低于对照组胎鼠(P＜0.001).结论 GDM时,AECⅡ细胞形态的改变,功能的抑制是新生儿容易出现呼吸窘迫综合征的重要原因.     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养

目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell type Ⅱ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础.方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AEC Ⅱ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant protein c,SPC)的表达.结果:每3～5只胎鼠可获得AEC Ⅱ(36 ± 5)× 106,活力98%±2%.镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形.透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上.结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AEC Ⅱ,能满足体外进一步实验的需要.     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、原代培养与鉴定

 【目的】探讨胎鼠肺泡Ⅱ型细胞原代培养及鉴定方法，建立肺泡Ⅱ型细胞培养模型，为体外研究肺泡Ⅱ型细胞及胎儿肺发育提供实验手段。【方法】采用低浓度胰酶消化20d胎鼠肺组织，经差速离心和特异性免疫吸附后，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞，进行原代培养；根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和肺表面活性特异蛋白A的分泌，用免疫细胞化学染色、透射电镜及酶联免疫吸附法对分离的细胞进行形态学和功能鉴定。【结果】原代培养的肺Ⅱ型细胞12h开始贴壁，外观呈多边形，岛状生长。培养的24～48h，细胞连接成单层，胞浆内颗粒明显，培养的6～7d细胞内颗粒大量减少；免疫细胞化学鉴定细胞肺表面活性特异蛋白A（surfactant pmtein A，SP-A）染色阳性，透射电镜可见观察到细胞内板层小体，培养液中SP-A含量随培养时间延长逐渐增多，于培养36h达峰值，为80ng／mL；细胞纯度达（92±2）％，产量为（18．6±7）×10^6。【结论】差速离心和免疫黏附法是一种高效的分离和纯化胎肺Ⅱ型细胞的方法，所得细胞产量大、纯度高，可以用于体外研究肺泡Ⅱ型细胞和晚期胎肺发育的研究.     

小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、培养和鉴定

目的:建立一套可靠的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)分离、纯化和培养技术,为进一步研究小鼠支气管肺泡干细胞(BASC)的增殖、分化及其在肺腺癌发生中的作用奠定基础。方法:采用分散酶消化小鼠肺组织块,经免疫黏附法纯化小鼠AECⅡ,并进行原代培养。用SP-C和CCSP免疫荧光染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果:该方法所获得细胞产量大、纯度高。AECⅡ比例约为(80±2.6)%(n=5),Clara细胞约(6.7±1.2)%(n=5),并能维持培养3~5 d。透射电镜观察AECⅡ,细胞内可见板层小体。结论:该方法是一种可靠的小鼠AECⅡ的分离、纯化和培养技术,可满足一般的实验要求。     

鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

目的:建立一套可靠的鼠肺细胞分离、纯化和培养技术,用于体外研究间质性肺病的发病机制及治疗方法.方法:采用胰酶消化出生后2 d SD大鼠肺组织块及SD大鼠肺泡灌洗液, 经差时贴壁法, 分离、纯化红皮鼠肺成纤维细胞(lung fibroblast, LF)和SD大鼠肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophage,AM), 并进行原代培养.用波形蛋白(Vimentin)、 CD14细胞免疫荧光染色、蛋白质印迹和电镜对所分离的细胞进行鉴定.结果:所得细胞产量大、纯度高.细胞免疫荧光染色LF细胞波形蛋白染色阳性而CD14染色阴性;AM细胞则相反.扫描电镜观察可见肺成纤维细胞有微绒毛,细胞间连接成网状,蛋白质印迹结果显示波形蛋白表达.结论:该方法是一种可靠的红皮鼠肺成纤维细胞及大鼠肺巨噬细胞的分离纯化培养技术, 可用于间质性肺病(interstitial lung disease, ILD)的发病机制及治疗方法的体外研究.     

大小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离培养方法

肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)是肺泡上皮细胞的"祖细胞",可分化为AECⅠ,其作用与肺组织的生理功能密切相关,获取AECⅡ将为肺部疾病的研究提供良好的实验模型和基础。大鼠和小鼠是常用的制备AECⅡ的动物,胎肺的消化方法和消化酶的种类、分离纯化的方法、鉴别的方法以及培养方法等是AECⅡ研究的重点和难点,虽然已经进行了广泛研究,但目前尚未形成一套完善的胎鼠AECⅡ分离、纯化与鉴定的方法。此外,AECⅡ的产量、纯度和传代等都是需要将来继续探索的问题。     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞生长状况及ABCA3表达变化的初步研究

目的:观察原代培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(type Ⅱ alveolar epithelial cell,AECⅡ) 的生长状况及AECⅡ特异性蛋白ATP结合盒转运蛋白A3(ATP binding cassette transporter A3,ABCA3)的表达变化,为有关新生儿肺发育及肺部疾病的研究奠定一定基础?方法:采用胰酶联合胶原酶消化肺组织,差速离心及差速贴壁法纯化细胞;电子显微镜鉴定AECⅡ细胞;倒置相差显微镜观察不同时间点细胞生长状态;MTT法绘制细胞生长曲线;免疫荧光技术观察 ABCA3动态表达变化?结果:电镜下观察到AECⅡ特征性板层小体,大小及数量不等,胞膜外缘分布有刺状微绒毛;MTT法测得铺板后第24?36?48?72?96?120 h的吸光度值分别为0.177 ± 0.009,0.193 ± 0.011,0.212 ± 0.019,0.253 ± 0.019,0.243 ± 0.012,0.192 ± 0.011?光学显微镜下细胞形态逐渐拉长,变扁平,细胞内颗粒逐渐减少?免疫荧光示ABCA3表达逐渐下降?结论:原代培养的胎鼠AECⅡ在培养早期生长状况最佳,ABCA3表达最丰富,故在早期(即培养72 h以内)进行肺发育疾病相关机制的研究较为理想?     

新生C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的实验研究

目的建立C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的方法。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离新生C57BL/6小鼠的成肌细胞,用Percoll分离液纯化细胞,在含15%胎牛血清的DMEM培养基中进行成肌细胞培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,Desmin抗体鉴定成肌细胞。结果经过Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离,Percoll纯化的成肌细胞纯度较高,Desmin染色95%以上的细胞胞浆染色阳性。结论采用Percoll纯化、国产胎牛血清培养,可以获得高纯度的成肌细胞。     

新生鼠下丘脑结节乳头核组胺能神经细胞的原代培养

目的 探讨新生鼠下丘脑结节乳头核(TM)组胺能神经细胞的体外培养方法。方法 从新生鼠(24h内)下丘脑后部分离出TM神经细胞，采用含有B27的Neurobasal Medium培养液进行体外原代培养。应用免疫细胞化学染色对培养的细胞进行鉴定。结果 从新生鼠下丘脑中分离的TM神经细胞，在本实验条件下生长良好。原代培养7～9d的神经细胞在形态上趋向成熟。免疫细胞化学染色结果表明培养的神经细胞呈组胺免疫反应阳性。为组胺能神经细胞。结论 新生鼠下丘脑TM神经细胞可进行体外原代培养，它可作为研究中枢组胺神经系统的体外细胞模型。     

胎鼠嗅球分离培养出神经干细胞的研究

目的研究胎鼠嗅球中分离培养产生神经千细胞(NSCs)的情况。方法取孕16～18d的孕鼠。取胎鼠的嗅球,用含10％FCS的培养基培养传代分离出的细胞。免疫细胞化学方法鉴定培养和传代出的细胞,对染色阳性的细胞计数检测纯度。结果P^75染色阳性证明分离培养的细胞为嗅鞘细胞(OECs)；来源于嗅球的细胞培养出的神经球行NeS血染色阳性证明为NSCs；传代OECs纯度为95%-98％。结论胎鼠嗅球中可分离培养出NSCs,OECs可稳定传代。可以作为移植用的种子细胞。     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。