微卫星标记对封闭群和近交第五代WHBE兔的遗传分析

目的分析比较封闭群白毛黑眼（WHBE）兔和近交第五代（F5）WHBE兔的微卫星结构的变化,寻找针对WHBE兔品系的遗传监测基因位点并应用于实际监测。方法利用21个微卫星位点,通过微卫星分子标记技术对封闭群和近交F5代WHBE兔进行遗传多样性检测和对比。结果在21对微卫星引物中筛选出扩增产物稳定并且具有多态性的11对微卫星引物。封闭群WHBE兔在每个位点上的等位基因数为3－8个不等,11个位点的平均有效等位基因数为3．0344个,平均杂合度为0．4956,平均多态信息含量（PIC）为0．6130,多位点累积个体识别率达到100％,多位点累积非父排除概率（CPE）在双亲信息都是未知情况下的为0．9683,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0．9980;近交F5代WHBE兔在每个位点上的等位基因数为3-9个不等,11个位点的平均有效等位基因数为1．8132个,平均杂合度为0．3808,平均多态信息含量（PIC）为0．5241,多位点累积个体识别率达到100％,多位点累积非父排除概率（CPE）在双亲信息都是未知情况下的为0．9264,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0．9933。在10个封闭群WHBE特有的等位基因中（与日本大耳白兔、新西兰兔DNA多态性比较）,其中7个微卫星位点的8个等位基因为封闭群与近交F5代WHBE兔所共同特有。近交F5代WHBE兔的平均有效等位基因数和平均杂合度均比封闭群低,说明经过5代培育,近交F5代的基因纯合度高于封闭群,具有更优的遗传稳定性。结论本研究选取的21个微卫星位点中的11个适用于WHBE兔近交系培育的遗传监测。     

实验兔三个封闭群微卫星DNA多态性遗传分析

目的对日本大耳白兔、青紫蓝兔、新西兰兔三个封闭群体开展群体遗传学分析。方法利用10个微卫星位点,进行Hardy-Weinberg平衡(HWE)检验,统计三个种群的基因频率、观测杂合度、期望杂合度、F值和遗传距离。结果青紫蓝品种在12L1E11位点,新西兰品种在INRACCDDV0087位点与INRACCDDV0203位点,日本大耳白兔在Sat12位点与INRACCDDV0203,P<0.05,显著偏离HWE,多数表现为杂合子缺陷；三个群体在Sat13、Sol44、6L1F10、7L1F1、12L4A1、INRACCDDV0016点上均符合HWE；各位点平均等位基因数5.9,种群整体基因频率差别较大,其范围为0～0.9060；三个种群的平均观测杂合度为0.6204,平均期望杂合度为0.6178；群体间分化系数(Fst)平均为0.0750,日本大耳白兔和青紫蓝兔遗传距离最近为0.1223, 青紫蓝兔与新西兰兔遗传距离最远为0.1934。结论三个种群的遗传结构均表现出遗传稳定性和均一性,在10个微卫星位点上呈现高度多态性,种群间遗传分化明显。     

应用微卫星标DNA记对三个封闭群兔遗传分析

目的检测国内日本大耳白兔、青紫蓝兔、新西兰白兔的遗传背景及遗传结构,为封闭群兔遗传检测方法建立和标准化提供基础资料。方法应用18个微卫星标记及荧光标记-半自动基因分型技术对三个群体95个个体进行Hardy-Weinberg检测,统计每个位点等位基因频率、杂合度、F值、遗传距离等信息。结果三个种群平均等位基因观测数为3.167、4.556、3.444,平均观测杂合度为0.444、0.5230、0.4976。18个位点平均多态信息含量(PIC)为0.410、0.549、0.470,日本大耳白兔6个位点HWE检验(P<0.05),显著偏离Hardy-Weinberg平衡,并在Sat13,INRCCDDV0088位点基因型完全纯和,新西兰白兔和青紫蓝兔分别有2个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡。三个种群遗传距离:青紫蓝兔与新西兰白兔遗传距离最近,为0.124,与日本大耳白兔遗传关系最远,为0.320;新西兰白兔与日本大耳白兔较远,为0.310。结论三个种群有各自不同遗传特征,遗传多样性较高,种群间分化明显。个别位点偏离遗传平衡,推测人工繁育过程中存在一定问题。     

WHBE兔血液蛋白的特性

目的比较大耳白黑眼兔（WHBE兔）与日本大耳白兔（JW兔）和新西澜兔（NZW兔）血液蛋白的多态性,从分子水平了解WHBE兔特殊性状的遗传背景。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对WHBE兔、JW兔和NZW兔血液中的前白蛋白（Pr）,后白蛋白（Po）,前转铁蛋白1（Prt1）,前转铁蛋白2（Prt2）,转铁蛋白1（Tf1）,转铁蛋白2（Tf2）,后转铁蛋白（Ptf）,慢α球蛋白（Sag）、血红蛋白（Hbα、Hbβ）和白蛋白（Alb）共11个蛋白位点进行检测。结果Pr、Ptf、Hbα、Hbβ、Alb、Po、Sag和Prt2在所有实验兔个体中的表型一致,而Tf1、Tf2和Prt1的表型在各实验兔品系间存在显著差异。在Tf1位点,NZW兔以BC表型为主,无AA型;JW兔只有AA型,而WHBE兔以AB型为主。在Tf2位点,NZW兔有AA型,而JW兔和WHBE兔无AA型。在Prt1位点,NZW兔无AB、BB和BC表型而有AC表型。NZW兔蛋白位点的平均杂合度大于JW兔和WHBE兔。JW兔与WHBE兔的遗传距离最近。结论Tf1、Tf2和Prt1可作为区分NZW兔、JW兔和WHBE兔的特征标记,并且与WHBE兔特殊性状形成有关。JW兔与WHBE兔的亲缘关系最近。     

WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔遗传多样性的RAPD分析

目的 应用随机引物扩增多态性DNA技术 （random amplified polymorphic DNA,RAPD） 对大耳白黑眼兔（white hair black eyes rabbit,WHBE rabbit）、日本大耳白兔（Japanese white rabbit,JW rabbit）和新西兰兔（New Zealand white rabbit,NZW rabbit） 3个实验兔品系进行遗传分析。方法 选用90只实验兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对实验兔基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对3个品系的扩增条带进行遗传分析,获得实验数据。结果 分析结果表明：（1） 60个随机引物中筛选出25个多态性较高的引物,3个品系实验兔共检测到493个扩增片段,长度在100 ~1800 bp之间,筛选的25个引物中,其中16个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出WHBE兔特有的特征条带;（2） WHBE兔位点数为234个,其中多态位点数166个,多态位点比为70.94%,JW兔位点数为228个,其中多态位点数122个,多态位点比为53.51%,NZW兔位点数为231个,其中多态位点数94个,多态位点比为40.69%;（3） 三个群体的Shannon多样性指数分别为0.3385,0.2222和0.1905;（4） JW兔和NZW兔的遗传相似系数最高,为0.8443,其次为WHBE兔和JW兔的遗传相似系数,为0.8204,WHBE兔和NZW兔的遗传相似系数最低,为0.7862。结论 结果表明WHBE兔与JW兔和NZW兔之间有遗传的相似性,也存在着遗传差异,应用RAPD技术可以很好地检测实验兔不同品系之间以及同一品系不同个体之间的亲缘关系。     

无特定病原体金定鸭微卫星DNA遗传多样性分析

目的 利用微卫星标记对无特定病原体金定鸭群进行遗传多样性分析。方法 采用微卫星标记,对SPF金定鸭种群中71个个体进行遗传多样性分析。结果SPF金定鸭种群中17个位点上共检测到119个等位基因,每个微卫星座位上等位基因数介于3～13;该SPF金定鸭群体中有13个位点（PIC > 0.5）呈现出高度多态,平均杂合度为0.5816 ± 0.0142,其它位点均呈现出中度多态。仅有5个位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余12个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡,达到极显著水平（P<0.01）。结论 该SPF金定鸭群体内均存在丰富的遗传多样性,满足建立封闭群的遗传特征,可以利用该群体继续开展无特定病原体金定鸭封闭群的建立。     

应用微卫星标记对两个豚鼠封闭群的遗传学研究

目的对国内两家不同单位的封闭群豚鼠开展群体遗传学分析,为封闭群豚鼠遗传检测方法和标准的建立提供基础资料。方法应用筛选获得的25个多态性微卫星标记及荧光标记-半自动基因分型技术,对两个不同封闭群豚鼠进行遗传检测,计算其群体遗传学参数。结果在两个豚鼠群体中共发现等位基因121个,每位点等位基因数2~10个,平均4.84个;平均期望杂合度为0.6067;平均多态信息含量为0.552。两个群体分别检测到103和116个等位基因;平均期望杂合度分别为0.5195和0.5838;平均多态信息含量分别为0.459和0.518;两个群体分别有5个位点和6个位点HWE检验P0.05,显著偏离Hardy-Weinberg平衡。杂合子缺失检验表明,两群体在偏离遗传平衡的位点大多数表现出显著的杂合子缺陷(P0.05)。群体间不同微卫星位点的平均Fst值为0.1056,表明两个种群的遗传分化程度为中等;Nei’(1972)遗传距离和Nei’(1978)无偏遗传距离分别为0.3302和0.3204。结论两个种群都符合封闭群动物的群体遗传特征。个别位点偏离遗传平衡,推测在饲养繁殖过程中有一定程度的近交现象存在。     

三个远交系豚鼠微卫星遗传结构分析

目的评估我校培育的三个远交系豚鼠种群的微卫星遗传结构,筛选不同种群间呈现差异等位基因的微卫星位点,为今后豚鼠遗传育种及应用提供资料。方法使用45对引物通过PCR及电泳技术,对我校三个豚鼠种群的微卫星DNA进行扩增分析,计算各位点等位基因多态性等参数,并筛选出种群间等位基因呈差异变化的微卫星位点。结果所有微卫星位点在豚鼠种群中呈多态性变化,各位点等位基因数2～7不等,平均位点基因数2.29,平均有效基因数1.74;平均期望杂合度为0.39,平均观测杂合度为0.21,多态信息含量的可信范围为0.0739～0.6443,平均PIC为0.32,68.9%的位点呈中度多态性;总Hardy-Weinberg平衡P值平均为0.1734,各种群均为P 0.05,但对每个位点的基因平衡状态来讲,共有20个位点极显著偏离Hardy-Weinberg平衡,种群平均偏离指数D为-0.407;平均分化指数Fst为0.136,平均基因流Nm为5.835,还阐明了种群间的Nei遗传距离及遗传相似度。结论三个豚鼠种群遗传呈中度多态性变化,种群间平均遗传差异无显著性,遗传相似度较高。群体遗传偏离Hardy-Weinberg平衡较突出,出现严重的近交现象,群体处于中等遗传变异水平,但较高的基因流动阻止了遗传分化发生。分析这些问题的原因,主要是本群体繁殖数量偏小,种子选择范围不广泛等,今后在培育过程中要引起重视。本课题还筛选到与不同种群或毛色豚鼠相关的微卫星位点12个,种群特征性微卫星位点7个,可能用于性状基因定位。     

应用微卫星标记研究Dunkin Hartley豚鼠封闭群的遗传背景

目的 检测我国现有Dunkin Hartley 豚鼠封闭的遗传背景,分析评估其遗传多样性水平和遗传分离情况,为建立标准化的豚鼠封闭群监测方法提供基础资料.方法 应用筛选获得的8个微卫星位点,从一个数量为1000的豚鼠封闭群中随机选择72个个体,通过PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,进行等位基因检测.并根据检测结果分析评估了该豚鼠封闭群的遗传现状.结果 共检测到28个等位基因,每个座位的等位基因数为2～5个,有效等位基因数为1.5191～3.4422,平均2.3093.平均期望杂合度为0.5294.各位点多态信息含量在0.3154～0.6545之间,平均值为0.4687.有5个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡.结论 豚鼠封闭群的遗传多态性处于中等水平,遗传平衡检测结果提示种群的繁殖过程未能实现完全随机交配,近交现象一定程度上存在.本研究的结果将为豚鼠封闭群遗传监测方法和标准的建立提供基础.     

上海地区实验用免微卫星多态性分析

目的对上海地区的3个品系5个种群的家兔进行微卫星多态性分析。方法选择兔的13个微卫星位点,分析了上海地区3个品系家兔群体的遗传变异。结果新西兰兔、日本大耳兔、青紫兰兔3个品系（种）兔群体内的平均多态信息含量分别为0．3123、0．2012、0．1328;平均杂合度分别为0．4091、0．3472、0．2222;对三种群兔之间的遗传距离分析发现新西兰兔和日本大耳兔之间的遗传距离较低,青紫兰兔和其他两种兔的遗传距离较远。结论新西兰兔种群杂合度较高,青紫兰兔种群杂合度相对较低。     

乙状窦形态学研究

目的探讨硬脑膜静脉窦的组织结构.方法运用组织化学、ABC免疫组织化学和电镜技术对家兔各部的静脉窦加以研究.结果硬脑膜静脉窦有平滑肌存在,其存在部位分布在乙状窦,其它部位未有发现,并且证实了所存在的这些平滑肌接受胆碱能神经纤维的支配.结论有平滑肌的硬脑膜静脉窦可参与对颅内容量的调节.     

转基因兔与克隆兔高效胚胎移植体系的建立

目的建立高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植实验技术平台。方法通过外科手术移植的方法将受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎分别移植到同步发情或异步发情的受体兔输卵管。结果移植受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎的受体兔怀孕率分别为100％、66．67％、36.36％,产仔数分别为19、24及17只,仔兔的成活率分别为90.48％、92．31％、17．65％。出生仔兔与移植胚胎数的比率分别为43．75％、21．31％、8．54％。结论成功建立了高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植的实验技术平台。     

兔总呼吸系、肺及胸廓压力－容积曲线滞后的原因探讨

为探讨兔的总呼吸系、肺和胸廓压力－容积之间的关系，作者根据黑伯反射原则，对１１只日本大耳白兔在体肺充以一定容积空气时的松弛压进行观在。每只兔均进行４组充气实验：第１组先作递增性潮气充气，再作递减性潮气充气；第２组在每次递增性和递减性充气之前，预先充气７０ｍｌ；第３组每次递增性充气之前，先充比计划量多１０ｍｌ的气体；第４组重复第１组实验。结果表明：第１组递增和递减性充气曲线之间有明显滞后；第２、３组滞后基本消失；第４组滞后又重复出现，但小于第１组。以上结果初步验证了充气排气过程中肺单位的相继开放和关闭是产生肺滞后的主要原因。     

WHBE兔与日本大耳白兔不同生长阶段肠道免疫功能的比较研究

目的 比较WHBE兔与日本大耳白(JW)兔不同生长阶段肠道免疫功能的差异.方法 分别选取离乳和2月龄WHBE兔,日本大耳白兔各8只,采用ELISA法,分别测定其血清及小肠匀浆液中分泌型IgA(SIgA)、P物质(SP)、IL-4、IFN-γ、生长抑素(SS)和血管活性肠肽(VIP)的含量水平.结果 成年WHBE兔血清及小肠组织sIgA分泌水平,SS、SP含量较离乳WHBE兔明显降低,IFN-γ/IL-4比值明显升高,特别是与成年JW兔在小肠组织IgA分泌水平,SS、IFN-γ和IL-4含量方面具有显著性差异.结论 WHBE兔的肠道免疫功能明显低于JW兔,可作为肠易激综合症研究的实验动物.     

日本大耳白兔染色体核型

采用骨髓细胞染色体直接制片法，以及染色体Ｇ－分带和银染技术，对日本大耳白兔的染色体进行了研究。结果表明，日本大耳白兔核型为：２ｎ＝４４，１８ｍ＋７ｓｍ＋１０ｓｔ＋９ｔ；染色体Ｇ－带型与文献报道基本一致；银染核仁组成区定位于１２、１４和２０号染色体的短臂端部，单个细胞染色体银染颗粒范围为１～６个，平均２．９３个。     

锰离子对兔眼视网膜毒性的形态学研究

目的 观察玻璃体腔注射不同浓度Mn2+对兔眼视网膜的毒性,从而筛选出合理的玻璃体腔注射浓度,为临床应用和实验研究提供依据.方法 36只青紫兰兔,随机分为9组,其中8个实验组分别于单眼玻璃体内注入不同浓度MnCl2溶液(0.5、1、2、5、10、15、20、40mmol·L-1)25μL,对照组单眼注射同容积生理盐水,均于注药7d后取材,光学显微镜、电子显微镜观察评价Mn2对眼视网膜组织结构的毒性作用.结果 1)玻璃体腔注入0.5 ～ 15mmol·L-1 MnCl2 7d后,视网膜外节盘膜完整,排列规则,各级神经元之间的排列正常,细胞核染色质分布均匀,超微结构未发现明显异常;2)当浓度＞ 20 mmol·L-1病理损伤渐明显.结论 注射剂量25 μL,浓度＜15mmol·L-1的MnCl2溶液是青紫兰兔玻璃体腔注射的安全剂量.     

家兔失血性休克时促滤泡激素含量的变化

据报道,休克可能对生殖功能有影响。本文用失血休克兔模型证明:失血性休克能抑制促滤泡激素(FSH)的分泌;抢救休克的某些措施能部分恢复该激素的分泌功能。     

壳聚糖家兔眼刺激试验

目的：观察家兔眼睛接触壳聚糖液所产生的刺激反应。方法：按照国家颁发的眼刺激试验标准进行。结果：4只家兔给1％壳聚糖液及0．5％醋酸液后6、24、48、72h至7天，观察每只家兔的眼角膜、虹膜、结膜均无异常发现，眼刺激反应评分为0，眼刺激程度评价为无刺激性。结论：1％壳聚糖液对家兔眼无刺激性。     

兔膝骨性关节炎模型建立的现状

膝骨性关节炎是一种慢性退行性骨关节疾病,其病因和发病机制尚不十分明确。因此,需用动物模型来研究和防治该疾病。基于该疾病的发病特点和兔膝关节的生理特性,目前兔膝关节炎模型是膝骨性关节炎最经典的常用模型,其主要建模方式有自发性和诱发性模型两种,以诱发性为主,包括骨内高压、关节内手术、腔内药物注射、关节制动诱发性模型。这4种诱发性模型与人的骨关节炎在发病机制和组织病理学等方面相似,可用于药物的筛选、评价及病理基础研究。     

兔后囊膜混浊模型的制作

目的:研究兔眼的解剖特点及制作后囊膜混浊模型的方法。方法:测量新西兰兔30只(60只眼)的前房深度、晶状体厚度和眼球轴长度。每只兔随机选取左眼或右眼进行超声乳化晶状体摘除联合人工晶状体植入术,对手术中的乳化功率、时间等参数进行统计。观察术后并发症和后囊膜混浊的形成情况。结果:30只兔60只眼的平均前房深度是2.39±0.24mm,平均晶状体厚度是6.61±0.26mm,眼球轴长度是15.17±0.40mm。30只兔眼均顺利进行了晶状体摘除联合人工晶状体植入术,未发生后囊膜破裂等并发症。乳化平均功率15.43%±4.31%,平均时间91.19±21.78秒。术后1个月后囊膜混浊开始形成,术后3个月每只眼都形成了明显的后囊膜混浊。结论:利用兔进行晶状体摘除联合人工晶状体植入术可作为研究后发性白内障的动物模型。