银杏叶提取物对百草枯致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨百草枯(PQ)对PC12细胞的损伤作用,观测银杏叶提取物(EGB761)对该损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法MTT比色试验检测细胞活性;乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞损伤程度;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;caspase-3免疫细胞化学染色观察细胞凋亡.结果40mg/L EGB761对300μmol/LPQ作用于PC12细胞24h,具有一定的保护作用;EGB761可明显抑制PQ诱导的PC12细胞LDH的释放(0.25±0.01)(与PQ组比较,P<0.05);EGB761可降低PC12细胞的凋亡百分率,PQ组凋亡百分率为66.7%,使用EGB761保护后凋亡百分率降为17.1%;并可减少PQ诱导的PC12细胞caspase-3过度表达.结论EGB761可减轻PQ诱导的PC12细胞损伤和凋亡,该作用可能与抑制caspase-3蛋白酶的激活有关.     

姜黄素通过抗氧化作用拮抗鱼藤酮致PC12细胞损伤的研究

目的 探讨姜黄素(Cur)对鱼藤酮(Ro)致PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用鱼藤酮建立PC12细胞损伤模型;用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活力;苏木精-伊红染色观察细胞形态学变化;比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)的活性;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平;流式细胞术(Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法)检测PC12细胞的凋亡.结果 0.5 μmol/L姜黄素和1.0 μmol/L姜黄素均可减轻0.1 μmol/L鱼藤酮对PC12 细胞增殖活力的抑制,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P＜0.01);明显减轻了细胞损伤的形态学改变;明显增加了 PC12 细胞内SOD的活性,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P＜0.05);明显降低了PC12细胞内ROS的含量,明显抑制了鱼藤酮对PC12 细胞凋亡的诱导作用,与鱼藤酮组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 姜黄素可拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关.     

川芎嗪对PC12细胞抗凋亡作用的实验研究

目的　探讨川芎嗪对多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法　用多巴胺 (DA)刺激PC12细胞使其发生细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测PC12细胞二倍体比率表征细胞凋亡率 ,用MTT法测定细胞活性 ,用Griess法间接测定NO的浓度 ,比较分析加入不同剂量的川芎嗪后对上述指标的影响。结果　加入 0 .3 0、0 .60mmol L的DA两组的PC12细胞的凋亡率、培养上清NO含量均显著高于无DA组 (P <0 .0 5 ) ,细胞活性显著低于无DA组 (P <0 .0 5 )。加入川芎嗪后 ,细胞凋亡率、NO含量均显著低于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )、细胞活性显著高于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )。结论　川芎嗪可抑制DA引起的PC12细胞凋亡 ,此作用可能与降低NO生成有关。     

帕金森病细胞模型的建立及鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用

目的：建立帕金森病细胞模型,研究鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用及机制。方法：PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元,加入不同浓度鱼藤酮（0、10、25、50、75和100 nmol•L^-1）,观察细胞形态改变;鱼藤酮处理PC12细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活性;免疫组化和免疫荧光法观察α-synuclein 在胞内聚集情况;AO/EB双染检测细胞凋亡。结果：神经生长因子（NGF）诱导后PC12细胞形状不规则,突起增多变长,细胞间连接增多;染毒后细胞突起结构逐渐消失,细胞体积变小、形态变圆。50 nmol•L^-1鱼藤酮作用24 h后PC12细胞活力开始低于对照组（P<0.05）,随着浓度增大,细胞活力进一步下降,呈浓度依赖性（P<0.01）;随着作用时间延长,细胞活力亦逐渐下降,不同时间组间比较差异有显著性(P<0.01)。免疫组化结果显示,胞浆中出现棕色的类圆形α-synuclein染色阳性颗粒;免疫荧光显示,胞浆中有α-synuclein标记的强绿色荧光的蛋白聚集。染毒细胞逐渐呈现出早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞状态。结论：鱼藤酮对多巴胺能神经元有毒性作用,可形成类包涵体样蛋白聚集并诱导细胞凋亡。α-synuclein 代谢异常及细胞凋亡可能在鱼藤酮所致的帕金森病发病机制中发挥重要作用。     

H2S对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的影响。方法采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色荧光显微镜观察PC12细胞形态和核的形态。结果PC12细胞自然凋亡率为3.23%±0.64%,1和3μmol/L鱼藤酮作用于PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别为26.24%±2.92%(P<0.05)和48.82%±6.66%(P<0.01)。400μmol/L NaHS不诱导细胞凋亡,但可使1和3μmol/L鱼藤酮组细胞凋亡率分别下降到11.13%±3.82%(P<0.05)和31.28%±6.85%。结论H2S可以抑制鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡。     

银杏叶提取物对6-OHDA致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨6-羟基多巴胺（6-OHDA）对PC12细胞的损伤作用，观测银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，GBE）对该损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用细胞培养的方法，建立PC12细胞的6-OHDA损伤模型。MTT比色试验检测细胞活性，Hoechst33342荧光染色观察细胞形态变化，ELISA法检测胞质多巴胺（DA）的含量，免疫印迹法检测caspase～3观察细胞凋亡。结果40mg／LGBE对100umol／L6～OHDA作用于PC12细胞24h具有一定的保护作用，GBE可明显升高6-OHDA诱导的PC12细胞DA的含量（与损伤组比较，P〈0．05），GBE可减少6-OHDA诱导的PCI2细胞caspase-3过度表达。结论GBE可减轻6-OHDA诱导的PCI2细胞损伤和凋亡，其作用可能与抑制caspase-3蛋白酶的激活有关。     

松针油诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制研究

目的 研究松针油对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用,探讨Hela细胞发生凋亡的分子机制.方法 采用水蒸气蒸馏法提取松针油,气相色谱-质谱联用仪分析成分.MTT法测定松针油对Hela细胞增殖的影响.流式细胞仪和Hochest 33258检测药物作用前后细胞凋亡的情况.应用Western blotting观察Hela细胞caspase-3酶原的变化.用caspase活性检测试剂盒检测caspase-3,8,9的活性.结果 MTT结果显示松针油对Hela细胞生长有明显的抑制作用.呈显著的时间和浓度依赖性.流式细胞仪分析显示松针油诱导Hela细胞发生凋亡,细胞表现出典型的凋亡特征,并且可见凋亡小体,且凋亡率具有时间依赖性.松针油诱导Hela细胞凋亡过程中caspase-3被激活.Caspase-8,9活性增高,又有时间依赖性,且有时间顺序.结论 松针油对Hela细胞的生长有明显的抑制作用,其作用机制是松针油可诱导Hela细胞发生凋亡.在诱导细胞凋亡的过程中,caspase-3的激活是介导Hela细胞发生凋亡的共同通路.同时,活化的caspase-8,9可能参与了caspase-3的激活,从而诱导凋亡的发生.     

半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系.方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化.结果:鱼藤酮(0.3 ～30 μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤.1～ 10 μnol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高.鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆.结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤.     

EGCG拮抗鱼藤酮致PC12细胞凋亡的研究

目的:探讨表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对PC12细胞的保护作用及机制。方法:采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞24 h,建立帕金森病细胞模型;EGCG(5μmol/L)预处理PC12细胞30 min。采用CCK-8测定细胞活力;Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测Caspase-3酶活性和线粒体膜电位,并检测Bcl-2表达。结果:1μmol/L鱼藤酮处理后,细胞活力为(38.5±4.3)%,细胞凋亡率为37.7%,DHE和DHR123荧光强度均明显增加,分别为正常组的231%和335%,线粒体膜电位为正常组的45%,caspase-3活性为正常组的145%,Bcl-2表达显著下调。而5μmol/L EGCG预处理后,细胞活力为(69.6±5.6)%,细胞凋亡率降至21.4%,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的178%和287%,线粒体膜电位为正常组的57%,caspase-3活性为正常组的120%,Bcl-2表达上调,与鱼藤酮组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:EGCG对PC12细胞具有保护作用,保护机制与其抗氧化活性及抗凋亡有关。     

黄芪对胰岛β细胞保护作用的研究

目的 探讨链脲佐菌素(STZ)对大鼠胰岛β细胞产生一氧化氮(NO)和胰岛素的影响,以及黄芪对胰岛β细胞的保护作用.方法 以大鼠胰岛β细胞-RINm5F为研究对象,不同浓度黄芪注射液预处理细胞,STZ诱导细胞破坏,检测培养上清中NO水平;葡萄糖刺激胰岛素释放试验进行细胞功能检测,流式细胞检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活力.结果 10%和20%黄芪注射液预处理组均能显著减少细胞培养液中NO水平,保护β细胞胰岛素分泌、抑制细胞凋亡和促进细胞的增殖.结论 黄芪注射液对STZ所致的胰岛β细胞破坏有保护作用,对1型糖尿病具有防治作用.STZ诱导胰岛β细胞凋亡可能与NO介导有关.