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相似文献
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1.
Fu YW  Zhu P  Zhao XW  Li HF  Zeng ZZ  Zhang R  Wang YJ  Zhang Y  Liu JH 《中华医学杂志》2003,83(19):1648-1652
目的 通过系统性红斑狼疮(SLE)自体外周血干细胞移植(APBSCT)前后T细胞受体B(TCRβ)CDR3基因表达谱型的变化,探讨SLE发病机理以及患者干细胞移植后T淋巴细胞克隆的免疫重建特征。方法 应用RT-PCR扩增APBSCT的SLE患者外周血的TCRβ可变区(V)25个家族的基因序列,在长泳道测序胶上电泳,形成TCRβCDR3基因表达谱型图。通过谱型图上电泳条带分析SLE移植前T细胞克隆增生的特征以及移植后T细胞克隆群的变化,做增生T细胞克隆的TCRβ基因序列分析,了解TCRβ基因与自身免疫病的相关性。结果 正常HCRβV25个家族的基因序列电泳后分别出现呈高斯分布的10余条电泳条带,组成CDR3基因表达谱型图。8例SLE患者谱型图均出现异常,4例TCRβ在β3V13.1基因家族T细胞出现寡克隆增生,3例在βV8,βV9,βVl5家族中出现寡克隆性增生。APBSCT后T细胞克隆分布趋于正常,CDR3恢复多态性,部分恢复到正常TCRβ基因分布。测序结果显示谱型图上单一条带过度浓集往往是单克隆或者寡克隆T细胞增殖;发现SLE一个异常T细胞克隆的TCRβV8 CDR3氨基酸序列与已报道强直性脊椎炎疾病相关克隆完全一致。结论 SLE患者出现T细胞寡克隆增生,增生的T细胞克隆可能与自身免疫病发病有关。APBSCT后免疫重建,抑制了致病的T细胞寡克隆,可能是移植后SLE治疗缓解的主要因素。  相似文献   

2.
目的:探讨寻常型天疱疮(PV)患者外周血T细胞受体(TCR)互补决定区(CDR3)基因谱型变化,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫性疾病的相互关系。方法:采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常人外周血单个核细胞TCR β链可变区(BV) CDR3谱型分布特征以及6例PV患者CDR3谱型变化情况。结果:6例正常人TCR BV CDR3谱型均符合正态分布,6例PV患者TCR BV CDR3谱型均出现多态性降低,BV亚家族单/寡克隆增生。结论:PV患者外周血TCR可变区β链CDR3谱型异常可能与PV发病有关。  相似文献   

3.
目的 初步探讨外周造血干细胞(PBSC)移植后以及出现移植物抗宿主疾病(GVHD)时,外周血T细胞a链的CDR3谱型变化和特征.方法 采用免疫扫描谱型分析技术,监测1例重型β-地中海贫血移植前、移植后23 d、GVHD时(移植后28 d)患者外周血单核细胞(PBMC)及供者PBSC标本T细胞a链的CDR3谱型变化,基因扫描(GeneScan)和测序分析克隆性增生T细胞TCR分子特征.结果 患者移植前PBMC的24个TCR BV家族CDR3谱型均呈高斯分布,部分家族在移植后23 d、和GVHD时呈现为寡峰和单峰,同时部分家族消失,单克隆增生T细胞TCR beta链的测序结果 显示不同的CDR3区组成,设计特异的CDR3引物进一步分析提示其可能来源于干细胞移植后的分化.结论 PBSC移植后23 d,PBMC中的多数24TCRBV家族CDR3谱型表现为多克隆,GVHD时,部分家族出现明显的单、寡克隆增生,这些特异T细胞可能在GVHD中发挥重要作用.对移植前后TCRCDR3谱型和特异TCR分子特征的分析将有助于PBSC移植后免疫重建的评估和出现排斥反应时的特异性治疗.  相似文献   

4.
目的 研究异基因造血干细胞移植后合并慢性移植物抗宿主病(cGVHD)时的T细胞免疫状态。方法 应用RT-PCR扩增14例白血病异基因造血干细胞移植后合并cGVHD患者及5名正常供者的外周血T细胞受体(TCR)BV24个家族的基因序列,并通过基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达情况、CDR3克隆性质,并计算BV家族的利用率。结果 在移植后6~19个月,所有患者TCRBV家族的利用仍处于不均一状态,检测到部分BV家族缺失,部分家族出现寡克隆、单克隆T细胞增殖。在24个BV家族的表达为6/24~15/24,并且均出现1~5个单克隆家族表达。单克隆及双克隆表达分布在不同的BV家族,未发现共用的BV家族。结论 异基因造血干细胞移植后合并cGVHD患者的T细胞免疫存在缺陷。在不同的TCRBV家族出现与cGVHD相关的克隆增殖的T细胞克隆。  相似文献   

5.
目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移,为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法 采用免疫扫描谱型分析技术,分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果 5例正常献血员PBMC TCR BV CDR3谱型均呈高斯分布,5例活动型SLE患者24TCR BV CDR3家族均出现不同的优势表达。对单/寡克隆性增生T细胞B链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论 SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关。特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定,将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。  相似文献   

6.
Fu YW  Wu DP  Cen JN  Feng YF  Chang WR  Qiu QC  Zhu ZL  Zhu P 《中华医学杂志》2007,87(32):2265-2267
目的通过T细胞受体重排删除环(TREC)和T细胞受体(TCRBV)克隆谱型研究异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)后T细胞免疫重建。方法应用实时PCR的方法定量检测43例3组不同类型allo—HSCT后及70名正常供者TREC水平;应用RT—PCR扩增其中24例3组不同类型allo—HSCT后及5名正常供者的外周血的TCRBV24个家族的基因序列,利用基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达、互补决定区3(CDR3)克隆性质及计算BV家族的利用率。结果移植前患者TREC定量检测结果为(335.1±782.5)拷贝/10^5细胞,明显低于正常人。3组在移植后3个月TREC含量均明显下降,同胞相合骨髓移植(MSD—BMT)组TREC恢复快于其他两组,且在移植后24个月基本恢复到移植前水平。单倍型骨髓移植(HID—BMT)组的TREC恢复延迟。在移植后3—19个月内TCRBVCDR3克隆谱型仍处于不均一状态,在6~16个BV家族中有表达。多克隆表达率在33%~48%,其余为单克隆或寡克隆增生,且分布在24个不同的BV家族,未见共用的BV家族。结论通过TREC和TCRBV克隆谱型分析,移植后3~24个月,胸腺输出初始T细胞数量低水平及TCRBV家族克隆性利用。单倍型骨髓移植后T细胞免疫缺陷更严重,与临床经过一致。  相似文献   

7.
[摘要] 目的 探讨活动性肺结核患者外周血T细胞TCR α、 链CDR3 谱系漂移,为肺结核患者特异性T细胞免疫应答机制和免疫治疗研究提供基础。方法 采用基因扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员及6例活动性肺结核患者PBMC中T细胞TCR CDR3谱型分布特征及患者TCR Vα和Vβ基因家族的优势取用情况,对克隆性增生T 细胞CDR3区进行序列分析。结果 6例正常献血员外周血中TCR 32 Vα、24 Vβ家族CDR3谱型均呈高斯分布(gaussian distribution),6例活动性肺结核患者出现不同Vα和Vβ家族优势取用,对部分单/寡克隆增生T细胞α、 链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论 肺结核患者活动期外周血T细胞TCR α、 链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达与结核患者细胞免疫应答机制有关,优势取用Vα、Vβ家族T细胞TCR CDR3序列的确定,为肺结核患者特异性T细胞免疫治疗研究提供基础。  相似文献   

8.
目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的CDR3区,FQ—PCR溶解曲线技术分析CDR3谱系特征,并测序分析单克隆家族CDR3区氨基酸序列的组成。结果4例健康志愿者PBMC中(α/βT细胞的CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,均表现为多峰图;而15例白血病患者PBMC中α/βT细胞CDR3谱系FQ—PCR溶解曲线峰型图,多数患者出现寡或偏峰型图、低或无峰型图、典型的单峰型图;不同白血病患者异常峰的频率不一致;单峰型图TRAV和TRBVPCR产物基因测序,未发现不同患者存在完全相同的CDR3区。结论FQ-PCR溶解曲线技术能很好的分析白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3谱系的单、寡、多克隆性增殖;非T细胞白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3的单峰(或寡峰)家族T细胞,可能来源于机体对肿瘤应答的T细胞,而在T细胞白血病患者,可能为肿瘤T细胞或机体抗肿瘤T细胞。本实验可为进一步研究白血病的免疫应答机制和个体化治疗提供基础。  相似文献   

9.
目的利用荧光定量PCR溶解曲线分析技术检测多系统萎缩病人TCRβ链CDR3谱序。方法提取1例多系统萎缩病人外周血单个核细胞中的总RNA逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,用荧光定量PCR(FQ—PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,根据其溶解曲线图分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果该病例外周血T细胞TCRβ链26个家族CDR3表达频率不一致,有的家族呈现缺失状态,有的家族出现寡克隆状态。结论该多系统萎缩病人TCRβ链CDR3存在谱系漂移,有的表达呈寡克隆,有的无表达呈缺失。  相似文献   

10.
目的:通过结直肠癌患者术前外周血T淋巴细胞的T细胞受体(TCRβ)基因谱型,了解肿瘤患者外周血中T细胞克隆特征以及机体抗肿瘤免疫状况.方法: 采用RT-PCR方法扩增结直肠癌患者术前外周血、肿瘤组织和术后外周血TCRβ基因的24个V基因片段,经过特殊的测序凝胶分离和银染色后,确定它们的TCRβV基因表达谱型.通过PCR产物直接测序的方法,分析克隆性增殖的特征和CDR3区氨基酸序列.结果: 结直肠癌患者术前外周血的TCRβ基因谱型中具有克隆性表达条带,其中有些克隆的CDR3区与肿瘤组织肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)中克隆性表达的TCRβ基因的CDR3区具有相同的氨基酸基序;临床特征表现为肿瘤局部有淋巴结转移,但是术后10个月没有复发.结论: 结直肠癌患者外周血具有与肿瘤负荷相关的T淋巴细胞克隆性增生,可能是肿瘤相关抗原特异性的抗肿瘤T淋巴细胞克隆.  相似文献   

11.
Zhu X  Zhu P  Guo XL 《中华医学杂志》2005,85(47):3316-3322
目的研究与特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病相关的反应性T细胞克隆的T细胞受体13链可变区(TCRBV)基因特征。方法应用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)扩增25例ITP患者和20名正常人外周血以及20例脐带血的TCRBV24个家族的基因序列,在长泳道测序胶上电泳,形成TCRBV互补决定区3(CDR3)基因表达谱型图。通过谱型图上电泳条带分析TCRBV基因分布特征,切割代表性条带测序。结合临床特点进行分析。结果(1)急性ITP(aITP)和慢性ITP(cITP)的TCRBV CDR3基因表达谱型图有明显不同,15例aITP浓集条带与正常对照组相比,差异无统计学意义(P=0.179)。10例cITP则都出现以一些浓集条带为代表的寡克隆T细胞增生,浓集条带明显多于正常对照组(P〈0.05)。其中6例cITP在TCRBV8亚家族分别出现1~2条浓集条带,共8条浓集条带,3例cITP在TCRBV 13.1亚家族各出现1条浓集条带,4例cITP在TCRBV 14亚家族出现5条浓集条带,3例cITP在TCRBV17亚家族出现4条浓集条带。将这20个浓集条带直接测序,有19个条带测序为单克隆T细胞扩增,1条BV14条带测序呈多克隆性。(2)比较10例cITP患者T细胞克隆的TCRBV基因或者编码CDR3的氨基酸,其中2例患者的TCRBV8全部基因序列相同,另有3例患者的TCRBV13.1全部基因序列相同。4例cITP患者中有2例的T细胞克隆TCRBV17的CDR3完全一致,全部序列仅仅框架区4有3个氨基酸不同,另有2例的T细胞克隆的TCRBV17的CDR3序列仅有4个氨基酸不同,表明不同cITP患者有同样或者功能类似的TCRBV基因编码的T细胞克隆增殖。不同患者分属不同TCRBV基因家族的19个T细胞克隆的CDR3区共用3种模体,有7个T细胞克隆的TCRBV CDR3共用模体E(D)TQYFGPG;4个T细胞克隆的TCRBV CDR3共用模体N(K)EQFFGPG;4个TCRBV17的T细胞克隆中有3个T细胞克隆的TCRBV17 CDR3共用模体GANVLTTGAG。结论cITP发病与特定的T细胞寡克隆扩增有关,这些T细胞克隆的CDR3共享3种可能结合同样抗原的模体。aITP没有明显的T细胞克隆变化。  相似文献   

12.
目的探讨抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-1)介导的αβT细胞CDR3谱系漂移,为双特异性抗体介导的T细胞免疫应答机制提供理论基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员T细胞在人卵巢癌SKOV3细胞联合BHL-1刺激前后的TCR库多样性变化(CDR3谱型分布特征)及刺激后T细胞TCRα、β链CDR3优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果刺激前6例正常献血员TCR CDR3谱型均呈高斯分布,刺激后发生CDR3谱系漂移,部分TCR Vα、Vβ家族出现优势增生,明确了BHL-1介导下单克隆增生T细胞的α、β链CDR3序列。结论 SKOV3联合BHL-1诱导的T细胞CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与BHL-1介导的特异性T细胞免疫反应有关,特异应答T细胞TCR CDR3序列的确定,将为卵巢癌的T细胞免疫治疗提供基础。  相似文献   

13.
Jurkat细胞TCR基因重排对 BV CDR3的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BV CDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCR BV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCR BV CDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCR BV8家族的单克隆细胞株Jurkat,在增殖传代过程中,以及经刺激诱导48或72h后,未监测到有TCR BV8以外的新的BV亚家族出现,BV8 CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCR BV CDR3改变,因而对TCR BV CDR3区抗原识别特异性(即抗原特异性漂移)并未产生影响,但并不排除TCR发生改变的可能性。  相似文献   

14.
15.
目的了解慢性乙型肝炎(CHB)患者细胞免疫功能,并探讨与干扰素-α抗病毒治疗早期病毒学应答的关系。方法入选19例接受干扰素-α治疗的CHB患者,治疗前收集外周血5 mL,分离并提取单个核细胞(PBMC)中的总RNA,利用反转录-荧光定量聚合酶链反应扩增T细胞受体(TCR)各β链可变区(BV)家族互补决定区3(CDR3)基因,溶解曲线分析各BV家族CDR3谱系的克隆性增生情况,同时观察治疗前及治疗3个月乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、肝功能水平变化。结果 19例CHB患者治疗前外周血TCR BV家族CDR3谱型均发生不同程度的单、寡及偏峰性克隆增生;治疗3个月时谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及HBV-DNA载量较治疗前均显著下降(P<0.01);病毒学应答组较无应答组TRBV CDR3克隆增生异常率、HBV-DNA载量及ALT水平差异均无统计学意义(P>0.05),应答组AST水平显著高于无应答组(P<0.05)。结论 CHB患者外周血T淋巴细胞存在不同程度的克隆性增生,且细胞免疫功能与干扰素-α抗病毒治疗的早期病毒学应答效果间无相关性,采用细胞免疫功能状态来评估干扰素抗病毒近期疗效存在局限性。  相似文献   

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