心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

目的 探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase,cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用.方法 纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点.制作野生型cMLCK (WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感...     

人心肌肌球蛋白轻链的提取、纯化和电泳分析

用一种简便有效的方法，从１３０ｇ成人心室肌中先提职心肌肌球蛋白纯品３１８ｍｇ，再从中进一步分离和纯化得到肌球蛋白轻链１８ｍｇ。纯化肌球蛋白轻链的核酸含量＜０．０１％，基本不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，人肌球蛋白轻链１和轻链２的分子量为２４ｋＤ和２０ｋＤ。纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性为０．４６μｍｏｌＰｉ／ｍｇ／ｍｉｎ，其分离后的轻链亚基则无此活性。本文对人和猪的心室肌肌球蛋白轻链的电泳行为进行了分析。     

人血小板肌球蛋白轻链激酶的研究

报道了人血小板匀浆上清液肌球蛋白轻链酶微量快速测定方法，对该酶的性质进行了初步研究，并建立了较为合适的测定酶活性的体系。该酶活性依赖于Ｃａ＾２＋和ＣａＭ，其半激活浓度分别为０．３５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ，ＴＦＰ能抑制该酶活性，其半抑制浓度为１５０μｍｏｌ／Ｌ。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞曹受过氧化损伤，同时使用硒、维生素等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。     

肌球蛋白轻链激酶和肌球蛋白轻链9基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究肌球蛋白轻链激酶（MYLK）及肌球蛋白轻链9（MYL9）在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达情况及其与NSCLC临床特征的关系。方法采用荧光定量PCR方法检测60例NSCLC组织、癌旁组织和60例正常肺组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA的表达情况,并分析癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达值与临床分期的相关性。结果 MYLK mRNA、MYL9 mRNA在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织及正常肺组织（P均〈0.05）,癌旁组织和正常肺组织中MYLK mRNA、MYL9 mRNA表达量无统计学差异（P均〉0.05）。在癌症患者中,淋巴结转移组MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量比无淋巴结转移组高（P〈0.05）。腺癌组织与鳞癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量无统计学差异（P〈0.05）。MYLK mRNA与MYL9 mRNA的表达呈正相关（P〈0.001）,MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达与肿瘤临床分期呈正相关（P〈0.05）。结论 NSCLC组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA表达均明显低于癌旁组织及正常组织,MYLK mRNA及MYL9 mRNA的表达与临床分期呈正相关。     

心肌急性损伤肌球蛋白轻链激酶酶促反应动力学研究

以内毒素休克狗作为急性心肌损害的动物模型，从心肌中提纯肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）和肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ），根据酶动力学分析法研究急性损害对ＭＬＣＫ活性的影响。结果发现在此种状态下狗心肌ＭＬＣＫ活性显著降低，推测ＭＬＣＫ活性降低导致可磷酸化轻链（ＰＬＣ）磷酸化的磷酸酶相对占优势，磷酸化型Ｐ－ＬＣ向去磷酸化型转变。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。     

心肌梗死患者抗肌球蛋白轻链抗体检测的临床意义

目的；观察急性心肌梗死（AMI）患者血清中是否存在抗心肌肌球蛋白链抗体，探讨该抗体与AMI患者心功能和预后的关系。方法：67例AMI患者分别于发病第1周末和6个月进行免疫印迹法检测血清中的抗肌球蛋白轻链抗体和超声心动图检查。根据抗体结果分为抗体阳性组和阴性组，比较两组的心功能指标和预后，结果：67例AMI患者血清抗肌球蛋白轻链抗体阳性有17例，阳性率为25．4％，30例健康对照均为阴性；抗体阳性组和阴性组的梗死部位和范围相似，但抗体阳性组Killip分级心功能明显差于抗体阴性组（P＜0．05），而室壁运动减弱，室壁瘤形成和死亡率均明显高于阴性组（P＜0．05）。结论：急性心肌梗死患者血清中可检测到抗肌球蛋白轻链的自身抗体，自身免疫反应可能参与心肌损伤和心室重构，影响心肌梗死患者的心功能和预后。     

肌球蛋白轻链激酶抑制剂的临床应用前景

目的：探索肌球蛋白轻链激酶（ ＭＬＣＫ） 抑制剂的作用机制及其与临床某些疾病的关系。方法：综述了国内外近年来对ＭＬＣＫ及其抑制剂的研究情况。结果：ＭＬＣＫ的活性与某些临床疾病的发生密切相关，而广泛存在多种植物中的ＭＬＣＫ抑制剂抑制ＭＬＣＫ的活性，具有抗癌，抗病等多种生理功能。结论：ＭＬＣＫ抑制剂的研究从一个方面揭示了某些药物的作用机理，将对体外筛选此类化合物提供一种有用的研究途径。     

肌球蛋白轻链激酶与炎症性疾病关系的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)可以调控肌球蛋白轻链的磷酸化,进而调控基于肌动蛋白与肌球蛋白之间相互作用的细胞骨架活动.近几年研究报道,长链MLCK与短链MLCK的异常表达在不同的炎症性疾病中多有发生,炎症相关因子能诱导MLCK表达升高.本文对MLCK在肺炎、血管损伤以及炎性肠病中的作用,及MLCK参与炎症性疾病的可能信号通路进行了综述.     

早期糖尿病大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶表达

目的观察早期糖尿病大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达及意义。方法腹腔注射链尿佐菌素（65mg／ks）诱发糖尿病模型,应用胰岛素控制血糖,心脏取血检测血糖及肾功能相关指标。通过免疫组化与Western-blot检测肾组织肌球蛋白轻链激酶表达。结果与正常对照组相比,模型组血糖及肾功能相关指标发生显著性变化。正常组肾小球、肾小管及肾脏血管均有MLCK的表达。模型组与正常对照组相比,肾小球表达MLCK有一定的减弱,治疗组与正常对照组相比无明显变化。结论早期糖尿病肾病形成可能是由于肌球蛋白轻链激酶表达降低所致。胰岛素治疗糖尿病肾病机制可能是增加肾脏肌球蛋白轻链激酶的表达。     

人心肌内肌球蛋白轻链mRNA测定新方法

采用异硫氰酸胍－苯酚－氯仿一步法提取心肌内总ＲＮＡ，随机引物将所有ｍＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ；用特异肌球蛋白轻链２（ＭＬＣ２）ｃＤＮＡ扩增引物增产ＭＬＣ２ｃＤＮＡ，以１８ｓｒＲＮＡ为内标，用激光光密度扫描仪扫描ＭＬＣ２及１８ｓｒＲＮＡ之扩增条带，计算出ＭＬＣ２ｍＲＮＡ的相对量。依此确定在不同心脏疾病状态下心肌内ＭＬＣ２ｍＲＮＡ的量。此方法重复性好，为直接从人心肌研究ＭＬＣ２对心肌收缩力的调节作用提供     

SHR不同脏器肌球蛋白轻链磷酸酶水平的研究

目的 通过对肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的130kDa、38kDa、21kDa 3个亚单位的检测,分析其在SHR和WKY的大动脉、心脏、肾脏、脑等4个重要脏器的分布规律,对比高血压发生后SHR这3个亚单位的变化规律,探讨MLCP 3个亚单位在高血压的病理生理的过程中的衍变和可能的机制.方法 在4℃的环境下,取SHR与WKY大鼠各10只断头处死,迅速取其大动脉、心脏、肾脏、脑称重速冻后磨成匀浆,置于缓冲液中并通过离心提取蛋白质,校正两组总蛋白的浓度后,分别应用SDS-PAGE、Western印迹杂交和化学发光的方法测定SHR与WKY大动脉、心脏、肾脏、脑MLCP的130kDa、38kDa、21kDa 3个亚单位的含量,对显影结果进一步进行吸光度扫描分析.采用t检验和方差分析,进行两组间和多组间的比较.结果 SHR的ML-CPl30kDa亚单位在大动脉中含量最高;38kDa亚单位在肾脏中含量高;21 kD亚单位在大动脉中含量高.结论 SHR和WKY大鼠不同器官组织MLCP的130kDa、38kDa、21kDa 3个亚单位含量有着明显的差异,提示MLCP含量或功能的异常可能与SHR高血压的病理机制有关.     

风湿性心脏病患者心肌肌球蛋白轻链的变化

目的:研究风湿性心脏病(RHD)心衰时心室肌中肌球蛋白轻链(VMLC)的变化与心脏重塑的关系。方法:采用Western blotting技术对13例RHD心衰患者及7例意外死亡者VMLC-1,VMLC-2含量进行定量分析。结果:RHD组VMLC-1,VMLC-2含量均显著低于正常对照组,以VMLC-2含量下降最明显,VMLC-1/VMLC-2比值在1∶0.95-1∶0.61。结论:RHD心衰发展过程中涉及了VMLC-1,VMLC-2蛋白水平的改变,这种改变可能对心功能的进行性恶化有直接影响。     

肌球蛋白轻链激酶在急性肺损伤模型的表达及意义

目的 通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用.方法 20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻内注入30μL含20 μg LPS的生理盐水,对照组仅用生理盐水.比较两组的病理学、湿干比重、肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数的不同,并采用免疫组化法观察MLCK在肺组织的表达,用RT-PCR法检测肺组织中MLCK mRNA的表达.结果 与对照组比较,LPS组表现为明显的肺充血、水肿、中性粒细胞浸润,肺含水量增加,BALF细胞总数含量增高(P＜0.05或P＜0.01);免疫组化结果显示,LPS组MLCK表达较对照组更明显;RT-PCR结果显示LPS组MLCK mRNA吸光度值较对照组高.结论 LPS能导致急性肺损伤,MLCK活性上调在其发病机制中起一定作用.     

哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶的表达

目的探讨哮喘模型大鼠支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶（MLCK）表达的变化。方法SD大鼠24只,随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型激发1周组（B组）和哮喘模型激发2周组（C组）。以卵蛋白（OVA）致敏和激发建立大鼠支气管哮喘模型,用免疫组织化学和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果哮喘模型激发1周组大鼠支气管平滑肌MLCK表达较正常对照组明显增加,2周组增加更明显,差异均有显著性（P〈0．05）。结论支气管平滑肌MLCK表达增加可能与哮喘发病有关。