腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2基因治疗骨缺损的研究

目的 探讨以胶原海绵为支架,用含腺病毒介导的骨形态发生蛋白(BMP)-2的鼠肌母细胞修复小鼠胫骨缺损的可行性.方法 制备鼠BMP-2腺病毒质粒并经PCR鉴定;将体外培养肌源性干细胞的贴壁细胞传代,取第3代细胞,在鼠肌母细胞中表达重组Ad-BMP-2质粒并孵育.采用间接免疫荧光法测定BMP-2阳性细胞的数量,碱性磷酸酶(ALP)法测定各组细胞ALP活性.建立胫骨近端骨缺损小鼠模型(n=80),分为4组:Ad-BMP-2转染组、Ad-LacZ转染组、空白组和Ad-BMP-2植入组.术后第3周观察各组小鼠植入区组织学变化和模型处放射学改变.结果 间接免疫荧光法测定显示,Ad-BMP-2转染组中BMP-2阳性细胞多见,而Ad-LacZ转染组和空白组中未见阳性细胞,仅见微弱的背景染色.Ad-BMP-2转染组中ALP活性含量较高,而Ad-LacZ转染组和空白组ALP活性含量极低.Ad-BMP-2转染组模型处有明显的骨缺损修复、愈合成像,Ad-BMP-2植入组次之,Ad-LacZ转染组和空白组表现不明显.结论 构建的Ad-BMP-2质粒能高效转染小鼠肌母细胞,且转染后的细胞能在机体持续分泌有效量的BMP-2.腺病毒介导的转染BMP-2的鼠肌母细胞具有明确的骨缺损修复能力,为临床促进骨折愈合提供了一种有效的方法和材料.     

腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2基因治疗骨缺损的研究

目的 探讨以胶原海绵为支架,用含腺病毒介导的骨形态发生蛋白(BMP)-2的鼠肌母细胞修复小鼠胫骨缺损的可行性.方法 制备鼠BMP-2腺病毒质粒并经PCR鉴定;将体外培养肌源性干细胞的贴壁细胞传代,取第3代细胞,在鼠肌母细胞中表达重组Ad-BMP-2质粒并孵育.采用间接免疫荧光法测定BMP-2阳性细胞的数量,碱性磷酸酶(ALP)法测定各组细胞ALP活性.建立胫骨近端骨缺损小鼠模型(n=80),分为4组:Ad-BMP-2转染组、Ad-LacZ转染组、空白组和Ad-BMP-2植入组.术后第3周观察各组小鼠植入区组织学变化和模型处放射学改变.结果 间接免疫荧光法测定显示,Ad-BMP-2转染组中BMP-2阳性细胞多见,而Ad-LacZ转染组和空白组中未见阳性细胞,仅见微弱的背景染色.Ad-BMP-2转染组中ALP活性含量较高,而Ad-LacZ转染组和空白组ALP活性含量极低.Ad-BMP-2转染组模型处有明显的骨缺损修复、愈合成像,Ad-BMP-2植入组次之,Ad-LacZ转染组和空白组表现不明显.结论 构建的Ad-BMP-2质粒能高效转染小鼠肌母细胞,且转染后的细胞能在机体持续分泌有效量的BMP-2.腺病毒介导的转染BMP-2的鼠肌母细胞具有明确的骨缺损修复能力,为临床促进骨折愈合提供了一种有效的方法和材料.     

腺病毒介导的BMP-2基因转染兔骨髓基质干细胞及对其增殖、成骨分化的影响

目的: 用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),研究转染对其增殖、成骨分化的影响.方法: 用Ad-BMP-2转染兔BMSCs,利用免疫细胞化学法、原位杂交染色和蛋白印迹法检测转染后细胞BMP-2的表达.流式细胞仪观察细胞周期的变化,分析转染对BMSCs增殖的影响.酶标法检测ALP活性;免疫荧光检测骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原表达,分析转染对BMSCs成骨分化的影响.结果: BMP-2基因在转染细胞内mRNA水平和蛋白水平均有较高表达,蛋白印迹法检测到培养液中有BMP-2蛋白阳性表达.流式细胞仪检测G1期、S期细胞比例与空白对照组无差异.ALP活性明显增高,骨钙素、Ⅰ型胶原免疫荧光检测,见胞浆内有大量显绿色荧光的阳性物质.结论: 在腺病毒载体介导下BMP-2基因成功导入BMSCs,细胞增殖未因转染而受影响,并可持续表达基因产物,向成骨细胞分化.     

腺相关病毒介导bFGF基因转染促进人骨髓基质细胞成骨实验研究

目的:观察腺相关病毒介导人碱性成纤维细胞因子(bFGF)基因转染对人骨髓基质细胞(hMSCs)成骨能力的影响。方法:从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞,体外扩增纯化后随机分为4组。①腺相关病毒介导人碱性成纤维细胞因子(AAV-bFGF)组:培养液中加入人碱性成纤维细胞因子基因重组腺相关病毒1×1010OPU/ml,孵育24h后换普通培养液继续培养;②β半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒(AAV-LacZ)组:用半乳糖酐酶基因重组腺相关病毒替换bFGF,其余处理与AAV-bFGF组相同;③阳性对照组:培养液中添加地塞米松(1nmol/L)、抗坏血酸(10mmol/L)和β-甘油磷酸钠(50mg/L);④空白对照组:不给予特殊处理。各组细胞处理后2wk,免疫组化观察bFGF表达,Von Kossa染色检测人骨髓基质细胞中骨胶原结节形成,全自动生化分析仪检测培养上清碱性磷酸酶(ALP)活性。结果:经多次换液传代,人骨髓基质细胞呈均一梭形形态。处理后AAV-bFGF组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。AAV-LacZ组和空白对照组形态无明显变化。免疫组化染色见bFGF主要在胞浆内表达,AAV-bFGF组bFGF表达明显强于其他3组。von Kossa染色AAV-bFGF组与阳性对照组可见大量红色骨胶原结节形成,显著多于AAV-LacZ组和空白对照组。培养上清液ALP活性检测AAV-bFGF组与阳性对照组显著高于AAV-LacZ组和空白对照组。结论:基因重组腺相关病毒人碱性成纤维细胞因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用。     

重组逆转录病毒hVEGF165基因转染对人骨髓基质细胞成骨影响

目的:观察重组逆转录病毒人血管内皮生长因子165(retrovirus pLXSN/hVEGF165)基因转染对人骨髓基质细胞(hM-SCs)成骨能力的影响。方法:从健康志愿者全骨髓中分离培养人hMSCs,体外扩增纯化后随机分为4组:①retrovirus pLXSN/hVEGF165组:培养液中加入人血管内皮生长因子基因重组逆转录病毒1×1010OPU/ml,孵育24h后换普通培养液继续培养;②retrovirus pLXSN组:培养液中加入逆转录病毒空载体,其余处理与retrovirus pLXSN/hVEGF165组相同;③阳性对照组:培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠;④空白对照组:不给予特殊处理。各组细胞处理后2周,免疫组化观察VEGF表达,Von Kossa染色检测人hMSCs中骨胶原结节形成,全自动生化分析仪检测培养上清碱性磷酸酶活性。结果:经多次换液传代,人hMSCs呈均一梭形形态。处理后retrovirus pLXSN/hVEGF165组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。retroviruspLXSN组和空白对照组形态无明显变化。免疫组化染色见VEGF主要在胞浆内表达,...     

低氧抑制人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的 探讨低氧对人间充质干细胞(hMSCs)分化为成骨细胞的影响,为骨组织工程学提供实验依据.方法 根据培养氧浓度及培养液类型随机分为4组:正常氧组(n)(20%O2 DMEM-LG),低氧组(h)(1%O2WDMEM-LG),正常氧成骨诱导组(nos)(20%O2 条件培养液)及低氧成骨诱导(hos)(1%O2 条件培养液).观察细胞形态变化,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,定量分析ALP、I型胶原蛋白(COLIA2)、骨钙素(OC)及骨粘连蛋白(BSP)mRNA表达情况,钙结节使用茜素红染色.结果 与nos组相比,n、h及hos组hMSCs生长形态改变不明显,并且不受条件培养液的影响.hos组hMSCs的ALP活性逐渐增高,但明显低于nos组,两者差异有统计学意义(P<0.01);培养4周后,与其它组相比,nos组的hMSCs可见到明显的染成红色的钙结节及钙盐沉积.定量RT-PCR检测,nos组hMSCs的ALP、OC、COLIA2及BSP mRNA表达量从7 d时开始明显增加,ALP 14 d后达到峰值,随后活性开始降低,OC、COL1A2及BSPmRNA继续增高,hos组ALP及BSP mRNA 14 d后开始增加,但明显低于nos组(均P<0.05).结论 低氧环境在体外抑制hMSCs成骨细胞分化,延迟hMSCs成骨.     

骨形态发生蛋白2基因转染对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的：评价携带骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒（Ad-BMP-2）转染人骨髓间充质干细胞（MSC）对其成骨分化的影响。方法：由健康青年男性髂骨抽取骨髓培养MSC，BMP-2基因转染后，用RT-PCR及免疫组化染色证实转基因MSC的BMP-2基因表达，原位杂交及免疫组化染色检测转染后细胞成骨活性，并进行透射电镜观察。结果：转染后细胞稳定表达BMP-2基因，核心结合因子a1、骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶呈阳性表达，透射电镜显示细胞外有胶原分泌和钙盐沉积。结论：Ad—BMP-2基因转染可以提高MSC的体外成骨能力。     

骨形态发生蛋白-2、-3对胚胎小鼠椎间盘细胞的成软骨及成骨作用

目的探索成骨作用的骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及抑制成骨作用的骨形态发生蛋白-3(BMP-3)对胚胎小鼠椎间盘细胞的成软骨及成骨作用,为BMPs临床治疗椎间盘相关疾病提供实验依据。方法运用腺病毒介导的BMP-2和BMP-3在胚胎小鼠椎间盘细胞中表达,RT-PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、蛋白多糖(ACAN)、骨钙素(OC)、骨保护素(OPG)和骨桥蛋白(OPN)成软骨及成骨相关指标mRNA水平的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨基质的表达,碱性磷酸酶(ALP)读数及ALP染色检测ALP的活性。结果 BMP-2和BMP-3表达对于椎间盘纤维环(AF)细胞的成软骨和成骨均没有作用。对椎间盘髓核(NP)细胞的软骨相关指标ColⅠ、ColⅡ、ACAN mRNA的表达同样没有影响,但可促进NP细胞的成骨,其中BMP-2和BMP-3均可促进OC mRNA的表达升高,而仅BMP-2可促进其OPG和OPN的mRNA表达升高。甲苯胺蓝染色证明BMP-2和BMP-3对椎间盘细胞软骨基质分泌的影响并不显著。NP细胞在BMP-2和BMP-3腺病毒感染后ALP活性明显增强,在AF细胞中则未观察到这种变化。结论 BMP-2和BMP-3均可促进胚胎小鼠NP细胞的成骨作用,但对AF细胞的成骨及成软骨作用及对NP细胞的成软骨作用没有影响。     

二磷酸盐对成骨细胞增殖及分化成熟作用的实验研究

目的研究二磷酸盐类药物—阿伦磷酸对成骨细胞增殖及分化成熟的作用。方法将人成骨样MG-63细胞体外培养、传代后分为5组:空白对照组、阳性对照组(加入10-8M地塞米松)、3个实验组(分别加入10-6M、10-8M、10-10M阿伦磷酸)。培养数日后,行细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨形态发生蛋白-(2BMP-2)、骨钙素(OC)、I型胶原(Coll.I)基因表达等检测。结果加入阿伦磷酸的3个实验组MG-63细胞数目较对照组显著增加,其峰值出现在浓度为10-8M时;同时,阿伦磷酸使ALP活性增强,而且BMP-2、OC、Coll.I等成骨细胞相关基因的表达增加。结论阿伦磷酸具有促进成骨细胞增殖及分化成熟,诱导骨形成的能力。     

腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染人骨髓间充质干细胞成骨特性研究

目的 通过腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染人骨髓间充质干细胞(human marrow mesenchymal stem cells, hMSCs),观察被修饰细胞CTLA-4Ig蛋白表达情况,以及基因修饰对hMSCs诱导成骨特性的影响.方法 采用荧光显微镜观察腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染hMSCs的绿色荧光蛋白表达,流式细胞术检测确定转染率,观察对比转染前后细胞形态和细胞周期,用免疫细胞化学方法检测转染hMSCs的CTLA-4Ig蛋白表达,转染hMSCs成骨诱导培养3周后进行成骨特异性标记检测.结果 分离培养的hMSCs CD105表达阳性, CD34表达阴性.重组腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染hMSCs的转染率为81.14%, CTLA-4Ig基因转染hMSCs(CTLA-4Ig-hMSCs)的形态无明显变化,生长良好.免疫细胞化学结果显示,CTLA-4Ig-hMSCs的CTLA-4Ig蛋白表达阳性,诱导培养3周的CTLA-4Ig-hMSCs,碱性磷酸酶染色呈强阳性,免疫细胞化学检测骨钙素表达阳性,钙的四环素荧光标记法显示细胞间有钙的沉积.结论 腺病毒介导的CTLA-4Ig基因转染hMSCs能够分泌CTLA-4Ig蛋白,并保持了成骨分化潜能,可用于异基因hMSCs作为骨组织工程种子细胞的应用研究.     

An experiment study of osteogenesis of Ad-VEGF165 transfected human bone marrow mesenchymal stem cells in vitro

Objective:To evaluate the effect of osteogenic potential on human marrow mesenchymal stem cells (hMSCs) transferred with human vascular endothelial growth factor(VEGF) gene by adenovirus. Methods :hMSCs were isolated from human marrow, cultured in vitro and randomly divided into 3 groups:Ad-VEGF165 group: adding 1×1010OPU/ml Ad-VEGF in hMSCs culture fluid after incubating 24 hours, changing into ordinary complete culture and continuing culturing; Positive control group: Cultured hMSCs with 1 nmol/L dexamethasone, 10 mmol/L glycerophosphate and 50 mg/L vitamin C,exchanging this conditioned medium twice a week; blank control group :no special treatment but culturing hMSCs in DMEM.To evaluate osteogenesis competence, Von Kossa's staining and a quantitative alkaline phosphates (ALP) activity analysis were performed after 2 weeks treatment. Results :The calcified nodes formed after 2 weeks treatment in Ad-VEGF165 group and Positive control group but not in blank control group. ALP activities in Ad-VEGF165 group,Positive control group and blank control group were (7.91 ± 0.90)u/L, (8.18 ± 0.76 u/L) and (3.46 ± 0.49)u/L respectively. The differences were no statistical significance between Ad-VEGF165 group and positive control group (P ＞ 0.05), but Ad-VEGF165 group and Positive control group were significantly different with blank control group (P ＜ 0.05). Conclusion:Adenovirus mediated VEGF165 gene can transfect hMSCs and promote osteogenesis of hMSCs.     

骨碎补各种提取成分对人骨髓间充质干细胞的影响

目的初步探讨骨碎补水提液、醇提液以及骨碎补的有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells，hMSCs）增殖、分化的影响。方法将骨碎补水提液、醇提液和骨碎补的有效成分柚皮甙与hMSCs共同体外培养，倒置显微镜观察描述细胞生长情况、CCK-8法检测每组药液对细胞的毒性和增殖作用、碱性磷酸酶（ALP）活性测定，图文报告分析系统检测Von Kossa染色的钙结节，统计学处理所得数据。结果与空白对照组比较，1mg／L骨碎补水提液、50μg／L骨碎补醇提液与50μg／L柚皮甙能促进hMSCs增加（P〈0．05），50μg／L骨碎补醇提液与50μg／L柚皮甙能促进其向成骨细胞分化（P〈0．05）。结论骨碎补水提液、醇提液与柚皮甙对hMSCs有保护作用并能分别促进其增殖、分化。     

人骨形成蛋白-7基因在人骨髓间充质干细胞中的表达和对其分化表型的影响

目的：观察人骨形成蛋白-7(BMP-7)基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)中的表达及对其成骨表型的影响。方法：利用AdEasy腺病毒表达系统构建人BMP-7基因表达腺病毒AdB7V，体外感染hMSC后观察绿色荧光蛋白(GFP)表达及RT-PCR、免疫组化方法鉴定外源基因的表达，通过对感染细胞的碱性磷酸酶(ALP)染色和钙盐染色鉴定其成骨分化表型。结果：hMSC经AdB7V感染后72h可观察到GFP表达，RT-PCR、免疫细胞化学方法证实外源性BMP-7在hMSC中表达，感染细胞的ALP染色和钙盐染色均为阳性。结论：外源性的人BMP-7基因可在hMSC中表达并诱导其向成骨细胞分化。     

Human bone morphogenetic protein-2 gene transfer induces human mesenchymal stem cell proliferation and differentiation in vitro

To identify eukaryotie expression veetor of human bone morphogenetie protein 2 peDNA3/BMP2, verify its expression in transfected hulnan mesenchynlal stem cells(hMSCs) and the effect on hMSCs differentiation. Methods: The BMP2 gene was cloned into a eukaryotic expression veetor pcDNA3. Transfeeted the reeombinant into hMSCs by liposome, Lmmunnohistochemistry and it situ hybridization methods were used to identify the expression of BMP2 mRNA and protein; ALP and Von Kossa stains were performed to identify the BMP2 gene differentiated effect on the hMSCs. Resuits: The pcDNA3/BMP2 fragments were as large as theory. BMP2 mRNA and protein were espressed and synthesized both in 48 h and 4 weeks after transfeetion, the ALP and Ca deposit eshibitiio, which marked the osteogenie lineage of hMSCs, were enhanced and Sped. Conclusion: Transfeetion of pcDNA3/BMP2 is able to provide transient and persistent expressionin hMSCs, and promote the MSCs differentiation to osleogenic lineage.     

人Ad-BMP-2基因转染兔骨髓基质干细胞对其Ⅱ型胶原和碱性磷酸酶表达的影响

目的：用人骨形态发生蛋白2腺病毒表达载体（Ad-BMP-2）转染兔骨髓基质干细胞（BMSC）,观察Ad-BMP-2转染对细胞分化的影响。 方法：将Ad-BMP-2转染体外培养的兔BMSC,7 d后利用原位杂交和免疫组化方法检测细胞内BMP-2及Ⅱ型胶原的表达,同时行碱性磷酸酶染色。 结果：BMP-2和Ⅱ型胶原原位杂交法显示实验组细胞胞浆中有棕黄色阳性杂交信号,对照组阴性。BMP-2和Ⅱ型胶原免疫组化法显示实验组细胞胞浆棕黄色阳性着色,胞核阴性表达,对照组阴性;碱性磷酸酶染色见实验组细胞胞浆呈棕黑色阳性着色,可见细小的棕黑色颗粒,对照组染色阴性。结论：Ad-BMP-2可高效转染BMSC,且促进其向成骨细胞和软骨细胞方向转化。     

神经营养因子-3通过Wnt通路促进人骨髓间充质干细胞生长和成骨分化的研究

目的  阐明神经营养因子-3（NT-3）促进人骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的能力,并分析Wnt通路的作用机制。方法  正常培养的人骨髓间充质干细胞为对照组;NT-3刺激的人骨髓间充质干细胞为NT-3组;加入ICG-001作用30 min后,用NT-3刺激者为Wnt抑制剂组,每组进行成骨诱导实验。利用噻唑蓝细胞增殖、酶联免疫吸附试验、Western blot检测、茜素红染色等实验分别检测各组人骨髓间充质干细胞增殖、细胞凋亡、碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白-1（BMP-1）等蛋白表达及钙结节形成能力。结果  与对照组比较,NT-3组间充质干细胞（MSC）增殖吸光度值增高（P <0.01）;NT-3组碱性磷酸酶活性、BMP-1等蛋白表达或茜素红染色效果均高于对照组（P <0.01）;与NT-3组比较,Wnt抑制剂组MSC增殖吸光度值降低（P <0.01）;而Wnt抑制剂组的碱性磷酸酶活性、BMP-1等蛋白表达均低于NT-3组（P <0.01）。结论  NT-3通过Wnt通路,促进人骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。

     

碱性成纤维细胞生长因子对羊骨髓间充质干细胞体外增殖和分化的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对羊骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外增殖与分化的影响。方法：体外分离培养的羊原代BMSCs分为实验组和对照组,实验组添加bFGF(2 μg•L^-1)于L-DMED培养液中,对照组使用L-DMED常规培养液。分别测定2组BMSCs生长曲线以及碱性磷酸酶（ALP）活性。应用诱导剂对2组细胞进行成骨、成脂肪诱导,分别在显微镜下观察其分化潜能。 结果：单个核细胞接种大约1周成纤维细胞样集落开始出现,2周后形成的集落数量增加,每个集落的体积变大。当第1代BMSCs细胞生长到汇合期时,实验组细胞数是对照组的2.5倍。于第16天实验组ALP活性比对照组明显降低（P＜0.05）。2组BMSCs经成骨诱导培养3周后,经Von Kossa染色,已经成骨的细胞内均可见钙盐沉积;已经成骨的细胞内油红-“O”染色显示,成脂肪诱导培养2周后,2组BMSCs均能分化形成脂肪细胞,2组每高倍视野下脂肪细胞计数差异无显著性（P>0.05）。 结论：bFGF能提高羊BMSCs集落形成数量及扩增效率,并抑制其ALP活性,同时保持了BMSCs向成骨细胞、脂肪细胞的分化潜能。     

骨形态发生蛋白2／7异二聚体对人脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

目的：探讨新型成骨诱导生长因子骨形态发生蛋白2/7异二聚体（bone morphogenetic protein 2/7 heterodimer,BMP-2/7）在诱导人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived stem cells,hASCs）成骨分化中的作用。方法：体外培养hASCs,以成骨诱导培养基（osteogenic medium,OM）中添加150 μg/L BMP-2/7为实验组,以单纯OM为阳性对照组（OM组）, 以常规增殖培养基（proliferation medium,PM）为阴性对照组（PM组）。体外诱导的第1、4和7天检测细胞DNA含量,第7和14天进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色及定量检测,第21和28天进行茜素红染色及定量检测,第1、4、7和14天分别进行成骨相关基因的检测。体内实验使用6只裸鼠,于其背部正中做皮肤切口,向两侧分离出4个皮下植入腔,分别植入：（1）单纯β 磷酸三钙（β-tricalcium phosphate,β-TCP）支架（支架对照组）;（2）β-TCP支架+hASCs（体外PM培养1周）（增殖细胞对照组）;（3）β-TCP支架+hASCs（体外OM培养1周）（诱导细胞对照组）;（4）β-TCP支架+hASCs（体外OM+150 μg/L BMP-2/7培养1周）（实验组）。植入后4周进行取材,标本制成组织学切片,进行HE和Masson三色染色分析。结果：体外诱导后第1天,实验组细胞DNA含量与PM组差异没有统计学意义（P>0.05）,第4天时实验组细胞DNA含量较PM组升高（P<0.05）,第7天时组间DNA含量没有明显差异（P>0.05）。诱导7天和14天后,实验组的ALP染色及定量检测均高于OM组和PM组（P<0.05）;第21和28天矿化结节染色及钙沉积定量检测均高于OM和PM组（P<0.05）。诱导第1天时实验组的成骨相关基因（Runx2、ALP、COL-1A1）的表达量即高于PM组 (P<0.05),诱导第4天时骨钙素（osteocalcin,OC）基因表达量即开始升高,第4、7和14天的基因表达量较OM和PM组显著升高（P<0.05）。HE染色分析可见实验组和诱导细胞对照组的hASCs能分泌出嗜酸性较强的均质细胞外基质,出现了强嗜酸性的类骨组织;与诱导细胞对照组相比,实验组的细胞外基质嗜酸性更强,类骨组织的面积更大,结构更加典型;其他两对照组均未见矿化基质和类骨组织生成。Masson三色染色分析可见实验组呈强阳性表现,细胞基质中充满绿染的胶原;诱导细胞对照组和增殖细胞对照组的细胞基质中有不同程度的阳性表现,但较之实验组,胶原的数量明显减少;单纯支架组未见胶原的表达。结论：BMP-2/7在hASCs的成骨分化过程中发挥了重要作用,能够有效促进hASCs的体外和体内成骨分化。