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相似文献
 共查询到19条相似文献,搜索用时 125 毫秒
1.
目的克隆并表达猪链球菌2型(S.suis 2)溶血素重组蛋白SLY,对其溶血活性及免疫学特性进行研究,为探讨SLY在S.suis 2感染中的致病机理及筛选有效的疫苗预防和控制猪链球菌病奠定基础。方法对S.suis2 05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,构建pET32a-sly原核表达质粒并诱导表达出S.suis 2重组溶血素SLY蛋白;采用高浓度尿素裂解包涵体和His-Tag亲和层析对重组SLY蛋白进行纯化并复性;免疫保护实验检验SLY的免疫保护作用。结果 SDS-PAGE显示70kD的SLY蛋白条带;重组SLY蛋白具有溶血活性并受多种因素的影响;SLY对感染S.suis 2的Balb/c小鼠有一定的免疫保护作用。结论优化原核表达体系可以有效提高SLY蛋白的表达量,经提纯并复性的重组SLY具有较高的溶血价,为进一步纯化及分析SLY蛋白的特性提供了必要的前提。  相似文献   

2.
目的 表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性.方法 用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gdh基因片...  相似文献   

3.
目的: galU基因是肺炎链球菌荚膜合成的关键基因,构建该基因的缺失突变体,获得肺炎链球菌荚膜缺陷菌株,研究其生物学功能,并为肺炎链球菌功能基因组研究提供实验菌株和技术平台. 方法:采用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法制备中间为红霉素耐药基因(erm),两侧为galU基因上、下游同源序列的连接片段,并将此片段转化入肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出缺陷菌株.用PCR鉴定缺陷菌株,小鼠实验研究其毒力.结果: PCR结果显示galU基因完全被erm基因所替代,小鼠毒力实验表明缺陷菌株毒力显著下降.结论: galU缺失突变体在小鼠体内不能形成荚膜导致其难以在小鼠体内存活,可作为筛选肺炎链球菌体内诱导启动子的宿主菌.用LFH-PCR作基因突变,可完全替代靶基因,简便、快速,是肺炎链球菌功能基因组研究的一种有效的方法.  相似文献   

4.
目的 构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株[BP(△BPSL1549)],建立有效的类鼻疽菌毒力基因敲除平台.方法 设计引物扩增类鼻疽菌BPSL1549基因上下游同源臂,连接至pK18 mobSacB自杀质粒上,通过大肠杆菌S17-1 λpir以接合方式将其转入类鼻疽菌中.利用同源重组原理替换野生株中的BPSL1549基因,经过蔗糖筛选靶标基因敲除株,并采用PCR、Western blot检测方法鉴定敲除株,利用动物模型评价敲除株表型变化.结果 BP(△BPSL1549)菌株与野生株的BPSL1549基因两侧同源臂片段PCR产物相比缺少600 bp,Western blot检测敲除株不表达BPSL1549基因编码蛋白,成功构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株.动物实验证实敲除株相比野生株毒力显著降低(P<0.05).结论 利用同源重组原理成功构建类鼻疽菌BPSL1549基因敲除株,完善了类鼻疽菌敲除平台和评价体系.  相似文献   

5.
βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型.方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型.采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定.结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小鼠未检测到βB2晶体蛋白的表达.结论:成功构建了βB2晶体蛋白基因敲除的小鼠模型.  相似文献   

6.
利用DNA同源重组原理敲除S.lincolnensis NRRL 2936中lmbU基因,筛选获得该基因缺陷株S.lincolnensis JLUa2,其不具备林可霉素生物合成能力.利用构建的不同重组质粒转化缺陷株,发现含有质粒pHBUYX335的缺陷株重新获得了林可霉素生物合成能力.单一回补下游基因lmbY和lmbX不能使缺陷株重新恢复林可霉素合成能力;而同时回补lmbU基因和下游基因lmbY和lmbX却能回补这种缺陷,缺陷株林可霉素合成能力的丧失不仅是由下游基因的破坏而引起,证实了lmbU基因是林可霉素生物合成的关键基因.根据不同重组质粒上装载的基因片段性质推测了lmbU基因可能的启动子.  相似文献   

7.
目的探索外膜蛋白T(OmpT)基因在尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)CFT073致尿路感染中的作用。方法利用RED重组技术构建UPEC CFT073 ompT基因缺失株(命名为COTD),并建立小鼠急性尿路感染模型,体内外实验比较野生株与敲除株之间在膀胱组织的定植能力。结果 PCR分析及测序鉴定证实ompT基因缺失株构建成功;体外实验结果显示野生株粘附率为(8.3±1.9)%,敲除株粘附率为(6.7±2.2)%,敲除株粘附率明显低于野生株(P<0.05)。体内实验膀胱组织内,野生株定植细菌数为(7±2)×105cfu,敲除株定植细菌数为(17±8)×104cfu,ompT敲除株定植于膀胱组织的能力明显降低(P<0.05)。结论证实OmpT作为毒力因子参与细菌定植膀胱组织,在UPEC致尿路感染的过程中发挥重要作用。  相似文献   

8.
目的 构建小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为建立TDO2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法 根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以TDO2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除TDO2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,获得阳性F0小鼠,再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果 结果证实所构建的TDO2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-TDO2em1Cflox/Gpt小鼠。结论 成功构建了小鼠TDO2基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建TDO2基因条件敲除小鼠奠定了基础。  相似文献   

9.
目的:了解肺炎克雷伯菌调控因子CRP对细菌毒力的影响及其对毒力相关因子磷酸转移酶系统的作用及其机制。方法:构建肺炎克雷伯菌CRP调控因子的基因缺失突变株与回补株,小鼠毒力试验检测CRP对细菌LD50的影响及小鼠生存率的影响,qRT-PCR与lac Z报告基因检测CRP对果糖磷酸转移酶系统EIIC蛋白frwC基因的影响并通过凝胶阻滞试验(EMSA试验)检测CRP调控frwC基因的机制。结果:CRP基因敲除菌株的小鼠毒力明显下降,野生株、CRP基因缺失株及回补株的LD50分别为<100,3.2×10~5和4.5×10~4CFUs。qRT-PCR与lac Z报告基因发现CRP基因敲除后,果糖磷酸转移酶系统EIIC蛋白frwC基因表达量明显下降,EMSA试验发现CRP蛋白能够结合在frwC启动子区。结论:肺炎克雷伯菌CRP调控子与细菌毒力密切相关,并且能够直接正调控frwC基因的表达。除影响细菌荚膜、菌毛、生物膜的形成而影响细菌毒力外,CRP调控子可能通过影响磷酸转移酶系统而影响细菌毒力。  相似文献   

10.
目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)细胞毒素相关基因致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI)中的第1个编码基因hp0520/cag1基因缺陷株,为进一步研究cag1基因在cag PAI中的功能奠定基础。方法:使用同源重组技术,通过PCR扩增出cag1基因两侧同源臂序列,酶切纯化后分别连接于带卡那霉素抗性标志的载体两端,构建成cag1基因自杀质粒。将该质粒通过电穿孔导入受体野生株中,通过抗性筛选与PCR验证得到cag1基因缺陷株,与人胃上皮GES-1细胞共培养后,与野生株比较,观察细胞形态变化。结果:成功敲除H.pylori cag1基因,获得cag1基因缺陷株;与野生株相比,cag1基因缺陷株破坏细胞的能力降低。结论:成功获得幽门螺杆菌cag1基因缺陷株;cag1基因缺失后H.pylori对GES-1细胞的毒力减弱。  相似文献   

11.
目的 研究猪链球菌的生物学特征,为病例诊断、治疗以及疫情控制提供科学依据。方法 对患者血液和脑脊液用脑心肉汤增菌,再接种羊血琼脂平板进行分离培养,并对分离的菌株做血清凝集,用API 20 Strep生化条进行生化鉴定,用PCR技术检测猪链球菌菌种基因、荚膜多糖编码基因、溶菌酶释放相关蛋白基因及溶血素基因。结果 从患者的脑脊液和血液中均分离出链球菌,经鉴定均为猪链球菌2型,猪链球菌菌种基因、荚膜多糖编码基因、溶菌酶释放相关蛋白基因及溶血素基因均为阳性。结论 经生物学特征分析,患者为猪链球菌2型的实验室确诊病例。  相似文献   

12.
Streptococcus suis(S.suis)is a Gram-positive,facultatively anaerobic coccus that has been implicated as the cause of a wide range of clinical disease syndromes in swine and other domestic animals.S.suis has also been implicated in disease in humans,especially among abattoir workers,swine and pork handlers.Here we report a case of streptococcal toxic shock syndrome(STSS)caused by S.suis in a 59-year-old man.Despite of intensive treatment,the patient died of shock with multiple organ failure 14 h after admission.One bacterial isolate obtained from blood culture was identified to the species level by biochemical tests and serological tests as S.suis serotype 2.Identification was confirmed by PCR amplification of genes encoding 16sRNA of S.suis and the capsule of S.suis serotype 2(cps 2J).Genes encoding virulence factors were also detected.An investigation to identify the source of S.suis revealed that several days before admission the affected man had been handling sick pigs or their meat.Transmission may occur through breaks in the skin of feet with tinea due to that no measures for personal protection was taken.This case should highten awareness of the potential for occupational exposure and human infection with S.suis.  相似文献   

13.
目的分析广东省2005-2006年分离的10株2型猪链球菌菌株的病原学特征,为诊断、治疗和制定今后防控措施提供科学依据。方法对10株菌进行常规方法鉴定及PCR技术检测。结果经血清学分型和生化鉴定,10菌株均为猪链球菌2型,其中9株菌三种基因(菌种基因(16SrRNA)、荚膜多糖编码基因(CPS2J)和溶菌酶释放相关蛋白基因(mrp))均阳性,1株菌mrp基因检测阴性。结论广东省人感染猪链球菌病由2型猪链球菌引起。  相似文献   

14.
目的研究布鲁菌S2感染死亡的巨噬细胞在启动细胞免疫应答中的作用。方法以布鲁菌S2株体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,并以未感染的正常细胞作为对照,感染后1h用不含血清的RPMI1540培养基饥饿培养5d,待细胞完全死亡后与骨髓源性树突状细胞共培养24h后,ELISA法检测细胞上清中IL-12、TNF—α水平;同时将树突状细胞与淋巴结T细胞共培养,在共培养的不同时间点ELISA法检测培养上清中IFN-γ含量。结果正常死亡的巨噬细胞和S2株感染死亡的巨噬细胞与树突状细胞共培养后均可刺激树突状细胞分泌TNF—α,但S2株感染死亡组的TNF—α分泌水平明显高于正常死亡组(P〈0.05),但不刺激IL-12分泌,且与T细胞共培养各时间点IFN-γ的分泌水平均高于对照组(P〈0.05)。结论感染布鲁菌S2株死亡的巨噬细胞可激活树突状细胞,并可使其提呈抗原、诱导T细胞产生IFN-γ。  相似文献   

15.
目的分析2型猪链球菌89K致病岛的结构特征,探索其进化历程。方法通过BLAST比对,获取89K致病岛的同源序列,构建其同源序列数据库;分析89K致病岛的碱基组成特征,寻找重组热点区域,并对89K进行分区;对各ORF进行功能预测,划分功能模块;对89K致病岛与其同源序列进行系统发育分析及共线性分析,推测其可能的进化历程。结果 89K致病岛可分为4个保守区,4个主要的非保守区及一段Tn916转座子,呈现多个异源序列相嵌合的结构特征。功能分析发现保守区基因主要参与致病岛的横向转移及其在宿主菌基因组中的稳定,保守区的基因呈现出进化上的一致性,且在某些菌株中保守区以连续状态存在。结论保守区在祖先状态时是一个连续整体,不同来源的非保守区经过多次水平转移和重组事件插入到保守区之间,形成了89K致病岛的嵌合结构。  相似文献   

16.
2-型猪链球菌保护性抗原RfeA的B细胞表位预测   总被引:1,自引:0,他引:1  
以2-型猪链球菌(SS2)保护性抗原RfeA推定的氨基酸序列为基础,采用Kyte-Doolittle法分析蛋白的亲水性,Emini法预测蛋白的表面可能性,以及Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法对蛋白二级结构中柔性区域...  相似文献   

17.
Objectives To explore the relationship between the polymorphisms of the selected short tandem repeats (STRs) of the candidate genes and type 2 diabetes mellitus (DM) in a Chinese population,the role of genetic and environmental factors in the development of type 2 diabetes. Methods STRs including D11S916 of uncoupling protein 3 (UCP3) gene,binucleotide repeat (CA)n within intron 6 [HSLi6(CA)] of hormone-sensitive lipase(HSL)gene and D20S501 of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B)gene polymorphisms were detected, by poiymerase chain reaction(PCR) ,poly-acrylamide gel electrophoresis and silver staining in 106 patients with type 2 DM and 102 control subjects. Results The allele distribution of UCP3 and HSL gene differed significantly between patients with type 2 diabetes and control subjects (X2 = 26. 12,P<0. 005; X2 = 10. 33,P<0. 005,respectively). For UCP3 and HSL gene,the frequencies of alleles A6,A7,A8 and allele B9 were much higher in diabetic patients than in control subjects (0. 090 vs 0. 020,P  相似文献   

18.
目的:寻找一种更适合全膝关节置换术(TKA)的氨甲环酸(TXA)应用途径。方法选取2014年1月至2015年8月石河子大学第一附属医院符合纳入标准的60例患者,根据不同的给药方法将其分为A、B两组,A组(n=30)静脉滴入100 mL TXA ,B组(n=30)局部注入100 mL TXA ,两组术后均夹闭引流管3 h。记录术中、术后显性失血量与隐性失血量相关指标、总失血量,定期监测两组患者的凝血指标及D‐二聚体水平,观察血栓发生率与术后不良事件。结果 B组患者总失血量[(895.41±239.02)m L ]低于A组[(1020.89±210.83)m L ],差异有统计学意义( P<0.05);且术后总引流量B组[(294.33±54.25)m L ]亦低于A组[(373.33±48.02)m L ],差异有统计学意义( P<0.05);术后的凝血指标、D‐二聚体和隐性失血量两组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组均未出现输血、症状性深静脉血栓、致死性肺栓塞。结论初次行TKA的患者局部应用TXA其初期止血效果优于静脉滴注。  相似文献   

19.
目的:探讨转录因子GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA3)对解整合素金属蛋白酶33(a disintegrin and metalloproteinase 33, ADAM33)基因启动子活性及mRNA表达的影响。方法: 以人正常肺上皮BEAS-2B细胞DNA为模板经PCR扩增得到ADAM33基因启动子区1 953 bp片段。通过双酶切、连接、转化等步骤将该片段克隆至pGL3-Basic载体构建ADAM33启动子重组质粒,并将其转染至人HEK293T、BEAS-2B细胞中;利用双荧光素酶报告基因技术检测HEK293T、BEAS 2B细胞中所构建的质粒启动子活性。将HEK293T、BEAS-2B细胞分为pcDNA-GATA3组和pcDNA3.1对照组,分别转染GATA3过表达质粒和空白对照质粒,用双荧光素酶报告基因技术检测荧光素酶活性;用实时荧光定量PCR检测BEAS-2B细胞中ADAM33 mRNA相对表达水平。结果: 通过PCR、双酶切和测序鉴定,成功构建含ADAM33启动子片段的重组质粒;重组质粒的ADAM33启动子活性较pGL3-Basic对照组明显增高。与pcDNA3.1组相比,HEK293T、BEAS-2B细胞中pcDNA GATA3组ADAM33启动子区荧光素酶活性明显增高(P<0.05或P<0.01);BEAS-2B细胞中pcDNA-GATA3组ADAM33 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01)。结论: 转录因子GATA3上调哮喘易感基因ADAM33启动子活性及mRNA表达。  相似文献   

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