我国14个城市散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

目的 调查我国戊型肝炎病毒基因型分布。方法 应用聚合酶链反应法和直接测序法对从我国１４个城市分离的４５株戊型肝炎病毒开放读码框架２（ＯＲＦ２）的部分核苷酸序列（ｎｔ６４６１－６８６０及ｎｔ５９９４－６２９４）进行分析。结果 ４５株散发性戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）中,４１株（９１％）与缅甸株（Ｂ）属同一个基因型,与典型中国株ＨＥＶ核苷酸序列的同源性均在９８％以上。其余４株变异较大,其序列与ＨＥＶ缅甸株（Ｂ）／中国株、墨西哥株（Ｍ）、美国株／猪（ＵＳ／Ｓｗｉｎｅ）的同源性仅分别为７７％～８０％、７４％～７６％和７４％～７７％;氨基酸序列的同源性分别为９１％～９５％、８９％～９２％和９３％～９７％。基因进行树分析表明,该４株ＨＥＶ变异株可能为一个新基因型,它不同于ＨＥＶ（Ｂ）、ＨＥＶ（Ｍ）和ＨＥＶ ＵＳ／Ｓｗｉｎｅ,按其     

庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区部分序列的一级结构及其变异

测定庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构基因５（ＮＳ５）区部分基因序列。方法从３例献血员，２例肝硬化患者及１例非甲－戊型肝炎患者血清中通过逆转录－套式－聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长９９４ｂｐ的ｃＤＮＡ序列，ＰＣＲ产物纯化后以双脱氧末端终止法测定其序列。结果所分离的６株ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与国外报道的３株（ＧＢＶ－Ｃ、ＰＮＦ２１６１、Ｒ１０２９１）比较，同源性为８７．２％～９３．９％；６株间同源性为９０．１％～９３．８％。根据所测得的６株ｃＤＮＡ序列推导出其编码的氨基酸序列，与国外发表的３株序列相比，同源性在９３．６％～９８．７％，６株之间为９３．６％～９８．４％。在此区内发现有１６个保守的脯氨酸残基及８个保守的半胱氨酸残基。结论从不同慢性肝脏疾病患者及献血员血清中分离出６株ＨＧＶ，其ＮＳ５区部分序列在核苷酸水平及氨基酸水平均较保守。可依赖此区序列设计诊断试剂     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病人血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性。对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－３）基因组５＇端非翻译区（５＇ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％、８８．７％、８７．１％。本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染。ＨＧＶ高度保守区５＇ＵＴＲ的分子克隆与核苷酸序列的测定对开展ＨＧＶ感染的基因诊断具有重要意义。     

一株庚型肝炎病毒NS3区和NS5区部分基因序列的分析

用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病人血清中检测到一株庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）。其中扩增ＮＳ３区基因采用５６例循环周期减温ＰＣＲ方法；扩增ＮＳ５区基因采用３５个循环周期的正常ＰＣＲ方法。并对其ＰＣＲ产物进行了克隆测序。在ＮＳ３区，样品与ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ的核苷酸序列同源性分别为８４．２％和８９．９％；而在ＮＳ５区样品与ＨＢＶ－Ｖ和ＨＧＶ的核苷酸同源性分别为９４．９％和９８．     

HCVNS3区C33c抗原基因cDNA的克隆及序列分析

自上海市及江苏省慢性丙型肝炎患者血清中分离丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，采用自行设计的引物，经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），获得长为６９４ｂｐ的Ｃ３３ｃ抗原基因ｃＤＮＡ，将其克隆于表达载体并作序列分析。结果表明，上海株ＨＣＶ－Ｓ１及江苏株ＨＣＶ－Ｓ２该区域核苷酸水平有很高的同源性（＞９９％），上海及江苏株ＨＣＶ与美国原型ＨＣＶ－１、日本株ＨＣＶ－Ｊ及河北株ＨＣＶ－ＨＢ在该区域核苷酸水平的差异分别为１８．６４％、５．５５％及８．０１％～８．１７％，氨基酸水平的差异在２．３１％～６．０２％之间。上海株同一份血清三个独立克隆间核苷酸水平有０．６％～０．９％的差异。本实验为进一步表达Ｃ３３ｃ蛋白作好了准备。     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性，对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－Ｓ）基因组５端非翻译区（５′ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％，８８．７％，８７．１％，本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ高度保     

Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因的克隆与序列分析

目的构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的真核表达载体，分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法利用逆转录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１基因片段，通过定向克隆将其克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上，采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的克隆，该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６）的同源性为８８．３７％，Ⅱ型中国株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｃ２）的同源性为７０．６９％，其推定的氨基酸同源性分别为８９．２９％和７５．５５％。结论基因的核苷酸一级结构在同一基因型中有较高的同源性，而不同基因型之间的同源性则相对较低。对不同基因型之间Ｅ２／ＮＳ１基因一级结构的研究将有助于ＨＣＶ疫苗的研制。     

献血员庚型肝炎病毒感染情况和部分基因序列分析

为探讨河南省献血员中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染情况和病毒基因的变异特征。方法：利 用逆转录－巢式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）检测 ＨＧＶ ＲＮＡ;克隆人 Ｔ载体并测序。结果：在 ３００名义务献血员 中发现１例庚型肝炎病毒ＲＮＡ阳性;２００例初检合格献血员标本中无１例阳性。河南株ＨＧＶ与ＧｅｎＢａｎｋ中ＨＧＶ 对应位置序列的同源性为９０.９％～９８．８％。结论：河南省义务献血员中有ＨＧＶ携带者;河南株ＨＧＶ与国内（河 北株ＨＧＵ７５３５６）分离株的同源性为９８．８％,其同源性高于国外分离株（９０．９％～９５．２％）;建议对献血员增加 ＨＧＶ 检测。     

病毒性肝炎患者EBV感染的临床意义

目的：探讨ＥＢＶ感染对病毒性肝炎的作用及临床意义，方法：用ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ法分析检测５７０例病毒性肝炎患者血清中ＥＢＶ－ＩｇＧ和ＥＢＶ－ＤＮＡ。结果；（１）血清中ＥＢＶ现行感染率（ＥＢＶＩｇＭ）和ＰＣＲ阳性）在乙型肝炎１３．０７％（２６／１９９），混合型肝炎２２．９５％（１４／６１），高于甲型３．３７％（３／８９），丙型９．９３％（１４／１４１）和戊型肝炎２．５０％（２／８０），Ｐ〈０．０５，     

庚型肝炎病毒不同地理株5'端非编码区序列的变异性分析

目的：为明确了解中国不同地区（广东、云南、香港）庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）株５′端非编码区（ＮＣＲ）序列的差异。方法：采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术,从广东省２例、云南省１例、香港３例共６例ＨＧＶ感染者血浆中扩增ＨＧＶ５′ＮＣＲｃＤＮＡ片段,为２３８ｂｐ,ＰＣＲ产物纯化后直接经双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。结果：中国ＨＧＶ株间５′ＮＣＲ相应序列的同源性介乎９２９３％～９７９８％,与国外分离株比较,同源性介乎８６３６％～９１９２％。结论：中国ＨＧＶ株间５′ＮＣＲ相应序列的同源性较大,与国外分离株的同源性较小;碱基变异在序列中呈散在分布,部分区段变异较大;ＨＧＶ核酸变异与地域因素有关。     

甲型与戊型肝炎的临床对比分析

目的 比较甲型肝炎（甲肝）与戊型肝炎（戊肝）的临床特点。方法 用ＥＬＩＳＡ法对７５５例肝炎患者进行甲,乙,丙,戊,庚型肝炎的病原学检测,结果 甲肝和戊肝的检出率分别是１１．１％和９．７％,差异无显著性（Ｐ〉０．０５）而两者在发病年龄,病程,总胆红素及与其他肝炎病毒的重叠或混合感染率方面差异有显著性（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）。结论 与甲肝相比,该地区戊肝同样常见,戊肝具有发病年龄较大,黄痘较深,     

戊型肝炎患者粪便中病毒RNA的半定量检测

目的探讨戊型肝炎病毒(HEV)RNA半定量检测的意义和可行性,为HEVRNA的定量PCR(多聚酶链反应)检测提供科学依据。方法在逆转录-套式PCR基础上,采用样品倍比稀释法对戊型肝炎患者粪便中病毒RNA作半定量检测。结果20份粪便标本中有14份检测结果阳性,其中病毒RNA拷贝水平为8×105、8×107、8×108、8×109PCR单位·ml-1的分别为2、10、1、1份。对同一标本而言,在不同稀释度时,其PCR产物在量上无显著差异。结论定量PCR技术检测戊型肝炎病毒RNA是可行的,但应以起始模板来定量而不是以终产物定量。     

戊型肝炎患者肝组织中HEV抗原的检测研究

目的：用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单克隆抗体和抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体研究急性戊型肝炎的免疫病理学,探讨二者在临床病理诊断中的应用价值。方法：（１）以杂交瘤技术制备的抗－ＨＥＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ,ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）作为第一抗体,用免疫组化ＬＳＡＢ法检测急性戊型肝炎患者肝组织中的ＨＥＶ抗原。（２）用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体以间接酶标法检测肝组织内的ＨＥＶ抗原。结果：用抗－ＨＥＶ单克隆抗体从１４例急性戊型肝炎肝标本中检出９例ＨＥＶ抗原阳性者（６４．２８％）,其中８例阳性标本用抗－ＨＥＶ ＯＲＦ２单链可变区抗体检测ＨＥＶＡｇ均为阳性。ＨＥＶ抗原在肝细胞浆表达以胞浆弥漫型为主,尚可见膜型表达。ＨＥＶ抗原阳性细胞集中分布有病变明显区,伴淋巴细胞浸润,病变较轻区也可见随机散在分布,部分     

我国戊型肝炎研究

戊型肝炎既往被称为肠道传播的非甲非乙型肝炎.1989 年 Reyes 等[1]应用分子克隆技术获得本病毒的基因克隆,并正式将此型肝炎及其相关病毒分别命名为戊型肝炎( hepatitis E ) 和戊型肝炎病毒( hepatitis E virus, HEV ).     

乙型肝炎病毒与戊型肝炎病毒重叠感染研究进展

乙型肝炎（乙肝）是一种常见的严重肝脏疾病。据世界卫生组织（WHO）2008年报告,全球约有20亿人曾感染过乙肝病毒（HBV）,其中3.5亿人为慢性HBV感染者。戊型肝炎（戊肝）是由戊型肝炎病毒（HEV）引起的一种自限性疾病,它主要在发展中国家流行,但在发达国家也有散发病例[1]。     

戊型肝炎重叠慢性乙型肝炎病毒感染临床分析

目的 了解戊型肝炎患者重叠慢性乙型肝炎病毒感染后的临床表现、肝功能变化及预后.方法 收集急性戊型肝炎患者65例和急性戊型肝炎重叠慢性乙型肝炎感染48例,对两组患者进行临床分析,应用酶联免疫吸附试验检测两组患者HBV标志物及抗HEV IgM.结果 总胆红素、凝血酶原活动度、白蛋白、重型肝炎发病率及病死率在重叠感染组和单纯急性戊型肝炎组之间比较,差异有显著性.结论 戊型肝炎重叠慢性乙型肝炎病毒感染患者肝功能损害严重,病死率高,预后差.     

丙型肝炎病毒感染人群的戊型肝炎流行特征分析

目的了解丙型肝炎病毒(HCV)感染人群中的戊型肝炎病毒(HEV)重叠感染流行情况,为更有效地开展丙型肝炎和戊型肝炎防治工作提供科学依据。方法采集2015年10月~2016年12月孝感地区HCV感染者的血清进行抗-HEV Ig G、抗-HEV IgM筛查。对调查发现的抗-HEV IgM阳性样本进行核酸检测和基因分型。对HCV感染者进行肝功能筛查以及收集其人口学资料进行分析。结果 164例HCV感染者中抗-HEV Ig G阳性率为34.15%,抗-HEV IgM阳性率为2.44%%(4/164)。抗-HEV Ig G阳性率在性别和年龄上差异均无统计学意义(P0.05),4个抗-HEV IgM阳性个体中异常指标2个,异常个体值分别为ALT 328.05 U/L、AST 259.80 U/L、总胆红素(TBIL)107.65μmol/L、直接胆红素(DBIL)5.32μmol/L和ALT 32.01 U/L、AST 40.20 U/L、总胆红素(TBIL)10.65μmol/L、直接胆红素(DBIL)9.32μmol/L,其中1个HEV RNA为阳性,基因型为Ⅳd亚型。结论 HCV感染者HEV既往感染和急性感染较高。对有HCV感染史的人群进行HEV筛查很有必要,同时要采用综合治疗。     

戊型肝炎临床特征研究

目的研究戊型肝炎患者肝炎临床特征、病程经过及可能反映患者预后的预测指标。方法91例戊型肝炎患者,按年龄分为青壮年组（n=22）、中年组（n=48）、老年组（n=21）,比较各组间肝功能水平和住院时间的差别。根据肝功能各指标异常程度分组,比较各组间患者住院时间的差异,同时分析肝功能指标与住院时间的关系。结果老年组血胆红素水平高于青壮年组和中年组（P〈0．05）,血白蛋白水平低于青壮年、中年组（P〈0．05）。老年组患者住院时间明显长于青壮年组和中年组（P〈0．05）。血胆红素水平显著升高及血白蛋白水平降低的患者住院时间较长（P〈0．05）。结论戊型肝炎发病年龄高峰在46—65岁。戊型肝炎住院患者胆红素升高显著,胆红素水平是反映患者预后的较重要指标。戊型肝炎患者的年龄、血白蛋白水平是与肝炎轻重程度以及预后相关的因素。     

戊型肝炎病原学及流行病学研究进展

戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus, HEV）属于戊肝病毒科（Hepeviridae）,HEV引起的肝炎称戊型肝炎（Hepatitis E,HE）,是发展中国家引起急性病毒性肝炎的常见病因。现该科病毒分为2个属：正戊肝病毒属（Orthohepevirus）和鱼戊肝病毒属(Piscihepevirus)。正戊肝病毒属包含了A、B、C和D 4种：A主要感染人和猪、骆驼、兔、雪貂、鼠、鹿、猫鼬等哺乳动物;B主要感染禽类;C主要感染鼠和雪貂;D主要感染蝙蝠。鱼戊肝病毒属只包含了一个A种,主要感染鲑鱼。在疾病流行区,饮用被污染的水源可以导致急性HE的大暴发,粪口途径传播是引起HE暴发流行的主要原因。青少年和成人为好发人群,其中孕妇感染HEV导致的疾病更为严重。HEV是一种典型的人兽共患病,由其引起的人HE在亚洲、非洲、美洲、欧洲等地区均有暴发流行,全世界大约三分之一的人口受到HEV的威胁,它已成为我国乃至全球关注的公共卫生问题。本文就HEV的分类、基因组结构、宿主以及HE的流行病学研究进展进行了综述。