CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理

目的：研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机制。方法：小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３ｄ后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒ＡｄＣＤ,然后连续１０ｄ腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）、单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组、单用ＡｄＧＭ－ＣＳＦ组、注射对照病毒ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ组或ＰＢＳ组。结果：与接受ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭ－ＣＳＦ、ＡｄｌａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长（Ｐ＜０．０１）。经ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、ＣＤ８＋Ｔ细胞浸润,黑色素瘤细胞表达ＭＨＣ－Ⅰ和Ｂ７－１分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强。结论：联合应用自杀基因和ＧＭ－ＣＳＦ基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用。     

GM—CSF诱导红白血病细胞向树突状细胞分化及其抗原提呈功能的研究

目的探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）诱导小鼠红白血病细胞分化过程中，树突状细胞的产生及其抗原提呈功能的变化。方法采用流式细胞仪分析、电镜技术和４小时５１Ｃｒ释放法等，进一步观察了ＧＭ－ＣＳＦ的诱导分化作用。结果１００ｎｇ／ｍｌＧＭ－ＣＳＦ处理３天后的ＦＢＬ－３细胞，树突状细胞的特异性标志３３Ｄ１和ＮＬＤＣ１４５的表达阳性率显著升高；同时，ＭＨＣ－Ⅱ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｉ－ＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１和ＣＤ４０表达水平均增加；扫描电镜显示ＧＭ－ＣＳＦ处理的ＦＢＬ－３细胞，表面出现许多树突状突起，透射电镜下可见细胞浆内有丰富的线粒体，核呈分叶状。同时，能够显著刺激同种异体Ｔ淋巴细胞增殖，促进ＩＬ－２的产生；可显著提高细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）细胞对ＦＢＬ－３细胞的特异性杀伤活性。结论ＧＭ－ＣＳＦ诱导的红白血病细胞可向树突状细胞分化，本身具有抗原提呈功能。     

小鼠脾来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用

目的：观察ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾来源树突状细胞（ｓｐｌｅｅｎｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ,ｓＤＣ）与肿瘤细胞融合体的抗肿瘤效应。方法：以灭活的ＮＳ１细胞免疫活化ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其ｓＤＣ与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,并筛选出融合细胞;用此融合细胞作为瘤苗,免疫治疗皮下荷ＮＳ１瘤的小鼠２次,间隔１周。结果：融合细胞瘤苗本身无致瘤性。用融合细胞瘤苗免疫治疗荷瘤小鼠后,其瘤体消失,且在观察期６０ｄ内未见肿瘤转移和复发。结论：脾来源树突状细胞与ＮＳ１细胞融合瘤苗免疫荷瘤小鼠后,激发其体内存在的抗ＮＳ１肿瘤效应。     

GM—CSF基因转导的肿瘤疫苗研究

目的：观察ＧＭ－ＣＳＦ基因转导的肿瘤细胞免疫小鼠的抗肿瘤效果。方法：用电穿孔法将小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的表达质粒导入ＲＭＡ淋巴瘤细胞,经Ｇ４１８筛选后,将ＧＭ－ＣＳＦ高表达克隆（ＲＭＡ－ＧＭ）细胞皮下接种Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,观察成瘤性,以及经丝裂霉素－Ｃ处理灭活的ＲＭＡ－ＧＭ细胞免疫小鼠,观察抗肿瘤作用。结果：ＲＭＡ－ＧＭ细胞免疫小鼠及亲代肿瘤细胞攻击后与对照组相比,肿瘤生长速度减慢,小鼠生存期明显延长     

淋巴细胞趋化因子基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞的抗肿瘤免疫效果

目的：通过选择性增强树突状细胞（ＤＣ）与Ｔ细胞的体内相互作用,优化其体内抗原提呈的微环境,为进一步增强ＤＣ介导的肿瘤免疫治疗效果。方法：体外培养的小鼠骨髓树突状细胞体外经Ｌｔｎ重组腺病毒感染后（Ｌｔｎ－ＤＣ）,用３ＬＬＬｅｗｉｓ肺癌细胞株的Ｍｕｔｌ抗原肽冲击致敏,按不同剂量免疫正常同系小鼠体内,观察其体内诱导的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性保护性免疫反应;通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分子在ＤＣ诱导肮肿瘤免疫应答中的作用;建立肺癌的自发性肺转移模型,观察免疫治疗作用。结果：抗原肽Ｍｕｔｌ刺激的Ｌｔｎ－ＤＣ能更有效地诱导特异ＣＴＬ活性,能使免疫动物产生更有效的免疫保护作用,抵抗肿瘤细胞的攻击。在抗肿瘤免疫排斥反应的诱导过程中,必需有ＣＤ４＋Ｔ和ＣＤ８＋Ｔ细胞的参与;而在其效应阶段,则依赖于ＣＤ８＋Ｔ细胞、Ｂ７／ＣＤ２８的共刺激信号途径及γ干扰素（ＩＦＮ－γ）的参与,并在诱导过程中起着重要作用。抗原肽刺激的Ｌｔｎ－ＤＣ能有效抑制３ＬＬ细胞的自发性肺转移,具有更明显的治疗作用。结论：通过基因修饰增强树突状细胞对Ｔ细胞的体内选择性趋化活性,能更有效地诱导抗肿瘤免疫反应,为树突状细胞介导的肿瘤免疫治疗开辟了     

转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移与生存(摘要)

目的　观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突状细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法　从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭ－Ｃ...     

pSVL／GM—CSF真核表达质粒的构建及其表达活性观察

以真核瞬时表达质粒ｐＳＶＬ为载体构建ｐＳＶＬ／ＧＭＣＳＦ真核表达质粒,用电穿孔法导入Ｃｏｓ－７细胞,以ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ１为靶细胞,检测其生物学活性;将不同剂量的ＰＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ质粒直接注射Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠股四头肌,动态观察小鼠血清中ＧＭ－ＣＳＦ的表达;     

小鼠脾来源树突状细胞与NS1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用

观察ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾来源树突状细胞与肿瘤细胞融合体的抗肿瘤效应。方法以灭活的ＮＳ１细胞免疫活化ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其ｓＤＣ与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,并筛选出融合细胞,用此融合细胞作为瘤苗,免疫治疗皮下荷ＮＳ１瘤的小鼠２次,间隔１周。     

SEA诱导树突状细胞抗膀胱肿瘤免疫应答的实验研究

目的 研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素Ａ（ＳＥＡ）刺激后的树突状细胞（ＤＣ）体内诱导的抗膀胱肿瘤免疫效应。方法 分离小鼠Ｔ７３９脾脏ＤＣ,加ＳＥＡ贴壁培养并富集细胞,观察其对ＤＣ功能特性的影响及体内诱导的抗肿瘤免疫保护反应。结果 经ＳＥＡ刺激后的ＤＣ共刺激分子Ｂ７表达显著增加,刺激Ｔ细胞增殖能力明显增强（Ｐ〈０．０５）;在体内诱导出更强的细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）,有效抵抗膀胱肿瘤细胞ＢＴ１７３９的攻击。结论 ＳＥＡ可活化ＤＣ,使后者在体内诱导出显著的抗膀胱肿瘤保护性免疫反应。     

转化生长因子β1基因修饰的小鼠树突状细胞在移植体内的迁移？…

目的 观察β型转化生长因子（ＴＧＦβ１）基因修饰的Ｂ１０小鼠骨髓树突关细胞（ＤＣ）在Ｃ３Ｈ小鼠体内的迁移和存活,以探讨ＤＣ生物学特性与移植耐受性的关系。方法 从Ｂ１０小鼠骨髓分离ＤＣ前体细胞,在粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子＋β型转化生长因子（ＧＭ－ＣＳＦ＋ＴＧＦβ）条件下培养增殖（ＧＣ１）并转导Ａｄ－ＬａｃＺ（Ｄｃ２）或Ａｄ－ＴＧＦβ１（ＤＣ３）,每组５×１０＾５个细胞注入Ｇ３Ｈ小鼠后掌皮下,分别     

骨髓树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫预防与治疗的实验研究

目的：进一步研究树突状细胞与肿瘤细胞的融合瘤苗细胞主动免疫诱导体内抗肿瘤免疫反应及对荷瘤小鼠的免疫治疗效果。方法：直接分离骨髓树突状细胞和体外生长因子诱导扩增培养相结合,获得大量高纯度的树突状细胞,再以５００ｇ／ＬＰＥＧ诱导其与ＮＳ１骨髓细胞融合,ＨＡＴ选择培养得到两者的融合细胞,体外进行混合淋巴细胞培养,并进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：融合细胞也能诱导淋巴细胞的增殖反应,而ＮＳ１无此作用。体内免疫预防试验表明,融合细胞活瘤苗１次免疫后,诱导出较强的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）,并获得抵抗野生型ＮＳ１攻击的保护性反应,但对无关瘤株则无此抵抗力。融合细胞对荷瘤小鼠的免疫治疗试验显示,融合细胞静脉注射后,能够明显抑制肿瘤生长,延长其生存期。结论：树突状细胞与肿瘤细胞融合后的瘤苗体内免疫,能有效地诱导抗肿瘤免疫反应,可望成为肿瘤免疫预防和免疫治疗的新途径。     

淋巴细胞趋化因子基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞的 …

目的 通过选择性增强树突状细胞（ＤＣ）与Ｔ细胞的体内相互作用。优化其体内抗原提呈的微环境,为进一步增强ＤＣ介导的肿瘤免疫治疗效果。方法 体外培养的小鼠骨髓树突太细胞体外经Ｌｔｎ重组腺病毒感染后（Ｌｔｎ－ＤＣ）,用３ＬＬＬｅｉｗｓ肺癌细胞株的Ｍｕｔｌ抗原肽冲击致敏,按不同剂量免疫正常同系小鼠体内,观察其体内诱导的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性保护性免疫反应。通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分     

小鼠内源性抗原提呈树突状细胞疫苗的抗瘤作用

目的：将pcDNA3-hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞（dendritic cell,DC），观察内源性抗原提DC疫苗诱导BALB／C小鼠对CT26－hCEA^ 的抗肿瘤免疫效应。方法：采用细胞因子rmGM-CSF和rmIL-4诱导培养法制备小鼠骨髓DC，利用Lipofectamine将pcDNA3-hCEA和肿瘤来源的RNA分别转染DC，制备能够内源性表达CEA的DC疫苗。使用DC疫苗预防免疫BALA／C小鼠，观察其对于荷CT26－hCEA^ 小鼠的抗肿瘤效应。结果：内源性抗原提呈DC疫苗明显延长荷CT26－hCEA^ 瘤小鼠生存期；与其他方法制备的DC疫苗相比，有较强的针对性抗肿瘤免疫效应和较长的持续效应。结论:地于免疫逃逸的肿瘤，内源性抗原提呈DC疫苗更具有免疫预防效应。     

Enhancing Antitumor by Immunization with Fusion of Dendritic Cells and Engineered Tumor Cell

Antitumor immune responses are consideredto be primarily mediated by T cells.Based on theprevious data that genetically engineered tumorcells can be used to be against tumor as a source ofwhole- cell antigens,and as well as the secretion ofcytokines and,or costimulatory molecules,manyof the immunotherapeutic approaches developed totreat tumor in animal model or clinical trials[1— 3 ] .However,tumor cells are poor antigen- presentingcells (APCs) ,because of the lack of costimulatorymolecule e…     

白细胞介素12基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用

目的：研究白细胞介素12（IL-12）基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用。方法：用含IL-12基因的腺病毒载体,在体外以不同感染系数感染Lewis肺癌细胞,并分别接种于C57BL/6小鼠皮下,观察其致瘤性的变化;并用Lewis肺癌细胞及B16黑色素瘤细胞再 次攻击免疫后的C57BL/6小鼠,观察肿瘤发生情况。 结果：以各种感染系数AdCMVIL-12制备的瘤苗,接种于小鼠皮下后,无肿瘤生长,完全消除了Lewis肺癌细胞的致瘤性;瘤苗注射6 d后,用Lewis肺癌细胞再次攻击,仍无肿瘤生长,抑瘤率达100%;用B16黑色素瘤细胞攻击,10~12 d均有肿瘤生长,说明此瘤苗具有肿瘤特异性。结论：AdCMVIL-12能消除Lewis肺癌细胞的致瘤性,并能诱导显著的抗肿瘤免疫反应,对肿 瘤的复发及转移有较好疗效。     

用射线照射的B7-1转基因细胞进行肿瘤疫苗的研究

目的探讨用放射的B71转基因细胞进行肿瘤疫苗疗法的效果。方法将重组人B7-1基因真核表达载体导入CAK-1肾细胞瘤细胞,利用转基因细胞治疗观察其抗肿瘤效果。结果转基因细胞的肿瘤原性较CAK-1／Wt、CAK-1／pCDNA3组明显降低（P〈0．001）。同时免疫原性明显增强,以^60Co照射的CAK-1／B7-1细胞免疫后,小鼠体内诱发了抗CAK-1／Wt的系统性、保护性免疫。用^60Co灭活的转基因细胞作为瘤苗进行实验性治疗,能够延长小鼠的生存时间,减慢肿瘤的生长速度,CAK-1／H7-1的应用提高了肿瘤治疗效果（P〈0．01）。结论放射的转基因细胞及其表达的H7细胞因子可以有效地激发机体的抗肿瘤免疫应答,B71表达肿瘤细胞应用可以成为一种很有前景的肿瘤疫苗。     

GM-CSF基因修饰的肿瘤疫苗

肿瘤细胞瘤苗是最早的瘤苗形式,至今仍是人们研究的热点。近些年随着基因转染技术的发展,人们在增强用于疫苗的肿瘤细胞免疫原性方面做出了不懈的努力,其中采用了转基因的方式提高肿瘤疫苗的免疫效果。在众多转染细胞因子的瘤苗中,转染粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因的肿瘤疫苗效果相对显著。GM-CSF是一种强烈刺激巨噬细胞和树突细胞等抗原呈递细胞的增殖、分化、活化、成熟和趋化的细胞因子。GM-CSF基因修饰的肿瘤细胞用放射线灭活后体内注射,可增加局部炎性反应,大量多核细胞、巨噬细胞、树突状细胞（DC）浸润,促进了肿瘤抗原的呈递,能够诱导强烈的抗肿瘤免疫反应。GM-CSF转导疫苗为GVAX系列肿瘤疫苗,对GVAX肿瘤疫苗进行了大量的I/Ⅱ期临床研究,其中包括黑色素瘤、前列腺癌、非小细胞肺癌（NSCLC）和肾癌。这些临床试验均证实这种方法是十分安全的,并能有效刺激机体产生抗肿瘤免疫反应。     

小鼠骨髓干细胞体外诱导成熟的树突状细胞对T细胞增殖的影响

目的：研究小鼠骨髓干细胞体外诱导分化的树突状细胞对T细胞增殖的影响,为进一步研究树突状细胞的功能及临床肿瘤的治疗提供有效的实验方法。 方法：应用IL-4和GM-CSF培养小鼠骨髓细胞5~7 d,光镜下观察细胞形态学变化;培养至第5~6天,加入黑色素瘤（B16）冻融抗原继续培养1~2 d,流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86,并与同种异体T细胞混合培养72 h,终止培养前16 h加入³H-TdR（18.5 kBq/孔）,γ-液体闪烁仪测定cpm值。 结果：用IL-4和GM-CSF培养3 d可见细胞形态发生改变,细胞形状不规则,培养5~6 d时,有刺状突起、拉长,为典型树突状细胞形态学特征;抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达,IL-4+GM-CSF+TNF-α组（61.68%、71.25%）及IL-4+GM-CSF+冻融抗原组（63.11%、76.88%）明显高于对照组（2.41%、3.88%）及单纯IL-4+GM-CSF培养组（21.86%、28.69%）（P<0.001）,IL-4+GM-CSF+TNF-α组与IL-4+GM-CSF+冻融抗原组比较,CD83和CD86表达差异无显著性;液闪仪检测结果显示,IL-4+GM-CSF+冻融抗原组刺激T细胞增殖的能力明显强于其他组,且差异具有显著性（P<0.001, P<0.05）。 结论：小鼠骨髓细胞体外培养成功地诱导扩增出足量树突状细胞,经肿瘤抗原刺激后绝大部分成熟,并能够刺激同种异体T细胞大量增殖,参与免疫应答。