实验性大鼠隐睾中eNOS的表达与生精细胞凋亡

①目的 研究内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)的表达与实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡的关系.②方法 通过手术建立单侧大鼠隐睾模型,术后第7天采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法及RT-PCR检测隐睾及对侧睾丸eNOS基因表达的变化.③结果 术后第7天隐睾侧重量明显减轻,生精细胞凋亡指数较对侧睾丸明显增加;RT-PCR显示隐睾中eNOS mRNA的表达较对侧睾丸增强;免疫组化显示对侧睾丸生精上皮内未见eNOS表达,隐睾侧睾丸生精上皮中有eNOS表达.④结论 隐睾生精细胞凋亡明显增加,eNOS参与介导生精细胞凋亡.     

大鼠单侧隐睾对侧睾丸生精细胞凋亡与T-AOC、MDA和Bcl-2基因表达的关系

目的探讨大鼠单侧隐睾对侧睾丸生精细胞凋亡发生机制。方法将SD雄性大鼠20只随机分为实验组(10只)和对照组(10只),建立单侧隐睾大鼠模型。术后90d取手术对侧睾丸,采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SP法检测Bcl-2基因表达,化学比色法测定睾丸组织中总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的含量。结果实验组手术对侧睾丸重量减轻,生精细胞凋亡指数(AI)增高,Bcl-2基因表达降低,总抗氧化能力下降,丙二醛含量增高,与对照组相比,两组差别具有显著性(P<0.01)。结论大鼠单侧隐睾可导致对侧睾丸生精细胞过度凋亡,生精功能严重受损,致使生育能力下降。     

热应激对大鼠睾丸iNOS表达的影响及其意义

目的 研究热应激对大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的影响及其意义。方法42d龄SD雄性健康大鼠12只建立单侧隐睾作为热应激处理的模型,术后第7d处死大鼠留取双侧睾丸,采用RT—PCR及免疫组化SABC法分别检测生精细胞iNOSmRNA和蛋白表达的变化,TUNEL法检测生精细胞凋亡。结果热应激处理后生精上皮内可见iNOS强阳性表达,而对侧睾丸生精上皮内无iNOS表达;热应激处理后睾丸iNOSmRNA也较对侧睾丸增强,生精细胞凋亡指数明显高于对侧睾丸,差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论热应激导致生精上皮内iNOS表达增强,生精细胞凋亡增加,iNOS参与介导生精细胞凋亡。     

L-NAME对大鼠生精细胞p53表达的影响

目的探讨NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）对隐睾下降固定术后生精细胞p53表达的影响。方法将75只雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型。术后12d将隐睾组大鼠随机分为假手术组,隐睾固定组、隐睾固定＋生理盐水组、隐睾固定＋L-NAME组,建立隐睾下降固定模型。术后分别于腹腔内注射生理盐水或L-NAME。术后第12d于腹腔内给药后2h大鼠尾部采血,取血清测定NO含量及NOS活性。术后第24d脱颈椎处死大鼠,TUNEL原位末端标记法检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡;免疫组化检测p53的表达。结果隐睾固定＋L-NAME组血清中NO浓度、NOS活性以及生精细胞凋亡率及p53的表达低于隐睾固定组和隐睾固定＋生理盐水组P〈0.05,差异有统计学意义假手术组最低,低于其它各组（P〈0.05）,差异有统计学意义。结论 L-NAME降低隐睾下降固定后NO的产生,降低p53的表达,减少生精细胞凋亡,提示NOS抑制剂能促进隐睾下降固定术后的睾丸提高生精能力。     

L-NAME对大鼠生精细胞p53表达的影响

目的 探讨NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对隐睾下降固定术后生精细胞p53表达的影响.方法 将75只雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型.术后12d将隐睾组大鼠随机分为假手术组,隐睾固定组、隐睾固定+生理盐水组、隐睾固定+L-NAME组,建立隐睾下降固定模型.术后分别于腹腔内注射生理盐水或L-NAME.术后第12d于腹腔内给药后2h大鼠尾部采血,取血清测定NO含量及NOS活性.术后第24d脱颈椎处死大鼠,TUNEI原位末端标记法检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡;免疫组化检测p53的表达.结果 隐睾固定+L-NAME组血清中NO浓度、NOS活性以及生精细胞凋亡率及p53的表达低于隐睾固定组和隐睾固定+生理盐水组P＜0.05,差异有统计学意义假手术组最低,低于其它各组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 L-NAME降低隐睾下降固定后NO的产生,降低p53的表达,减少生精细胞凋亡,提示NOS抑制剂能促进隐睾下降固定术后的睾丸提高生精能力.     

脊髓损伤对生精细胞bcl-2和Bax基因表达的影响

目的 :探讨脊髓损伤后生精细胞减少的原因。方法 :应用链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶 (S P)免疫组织化学法检测脊髓损伤大鼠术后第 2周、第 4周睾丸生精细胞bcl 2 ,Bax蛋白表达的情况。结果 :术后第 2周 ,手术组大鼠睾丸生精细胞bcl 2 ,Bax基因蛋白表达与假手术组比较差异无显著性意义。术后第 4周 ,手术组大鼠与假手术组比较 ,睾丸生精细胞bcl 2基因蛋白表达显著性减少 (P <0 0 5 ) ,Bax基因蛋白表达则显著性增高 (P <0 0 5 )。结论 :bcl 2及Bax基因蛋白表达的改变是脊髓损伤后睾丸生精细胞显著减少的原因之一。     

睾丸固定术对隐睾大鼠生殖细胞凋亡与eNOS表达的影响

目的 探讨睾丸固定术对隐睾大鼠生殖细胞发育与凋亡的影响.方法 22日龄 SD 雄性大鼠复制左侧隐睾模型.实验随机分为假手术组、隐睾组和隐睾固定术组,每组10 只.建立左侧隐睾模型,隐睾固定术组于建立左侧隐睾模型后14 d行隐睾下降固定术.以生物素-dUTP/ 酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡数目,用免疫组化SABC法检测eNOS 基因表达.结果 与假手术组相比,隐睾组和隐睾固定术组隐睾侧睾丸发生生精细胞凋亡的数目显著增加(P＜0.01).与隐睾组相比,睾丸固定术后生殖细胞凋亡明显减少(P＜0.01).隐睾组睾丸退化的生精细胞胞浆中eNOS 基因表达明显增强.结论 隐睾大鼠生殖细胞凋亡增多,睾丸固定术可降低生精细胞的凋亡水平.eNOS表达与生精细胞凋亡有密切关系.     

睾丸复位固定术对大鼠隐睾Bcl-2表达及生精细胞凋亡的影响

目的研究实验性大鼠隐睾复位固定术对Bcl-2表达及生精细胞凋亡的影响。方法24只雄性SD大鼠建立左侧隐睾模型,右侧睾丸切断引带后还纳入阴囊作为假手术组;模型建立7天后实施左侧隐睾复位固定术,隐睾复位固定术前、术后第24天及48天分别处死大鼠8只,采用免疫组织化学检测各组睾丸Bcl-2表达的变化,运用TUNEL法检测各组睾丸生精细胞凋亡。 结果隐睾内生精细胞凋亡增加,复位固定术能降低生精细胞凋亡,增强睾丸内Bcl-2表达。假手术组凋亡指数(4.86%±0.27%)与复位固定术后48天组(5.59%±0.67%）比较差异无显著性（P＞0.05),但均低于复位固定术后24天组(14.48%±0.70%）及复位固定术前的隐睾组(29.45%±1.19%）（P＜0.05);Bcl-2表达在假手术组、复位固定术后24天组及复位固定术后48天组之间比较差异无显著性（P＞0.05),但均明显高于隐睾组（P＜0.05)。结论睾丸复位固定术能通过促进隐睾内Bcl-2表达来抑制生精细胞凋亡。     

p53、p63在SD大鼠隐睾中的表达

目的 探讨p53、p63在SD大鼠隐睾中的表达及其在隐睾所致生精障碍过程中的可能作用.方法 本实验将30只健康雄性SD大鼠随机分为隐睾组和假手术组,建立单侧隐睾模型.术后7天脱颈椎处死大鼠,留取各组大鼠双侧睾丸称湿重,常规组织学切片观察各组睾丸生精上皮形态,免疫组化分别检测p53、p63蛋白表达的变化.结果 术后第7天,与正常侧睾丸相比,隐睾侧睾丸重量明显减轻,生精小管内生精细胞排列紊乱,生精细胞与精子的数量减少,可见较多多核巨细胞;免疫组化显示p53在各组睾丸的生精小管的各级生精细胞的胞质中均有表达,尤其是在精母细胞胞质中,但在隐睾中表达最强;p63在假手术组表达较少且较弱,而在隐睾组中表达较多且较强.结论 隐睾能导致睾丸内p53、p63表达增高,从而促进生精细胞凋亡增加.     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾Bcl-2表达的影响

①目的研究一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡过程中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）表达的影响。②方法 42天龄雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型,随机分为隐睾组、隐睾＋L-NAME组、隐睾＋生理盐水（溶媒）组、假手术组,每组12只大鼠,隐睾＋L-NAME组和隐睾＋生理盐水组大鼠术后分别腹腔内注射L-NAME或生理盐水,每天1次,定时定量（50mg/Kg）,术后第7天分别采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组隐睾Bcl-2mRNA和蛋白表达的变化。③结果与假手术组睾丸相比,隐睾组、隐睾＋生理盐水组睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bcl-2mRNA和蛋白表达降低,差异有显著性（P〈0.05）;而隐睾＋L-NAME组Bcl-2 mRNA和蛋白与假手术组睾丸无明显差别。④结论 L-NAME可通过调节Bcl-2的表达抑制热应激导致的生精细胞凋亡。     

PFT-α对隐睾所致生精细胞凋亡的影响

目的：通过研究PFT-α对隐睾生精细胞中p53和bcl-2/bax表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方
法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+p53抑制剂(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)组、隐睾+ PFT-α溶
媒(DMSO)组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组分别于大鼠腹腔内注射PFT-α和PFT-α溶媒,每天1次,定时定量。
7 d后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。观察手术侧睾丸生精细胞组织形态,采用TUNEL法结合流式细胞术(flow
cytometry,FCM)检测生精细胞凋亡程度,免疫组织化学和Western 印迹分别检测p53和bcl-2/bax的表达。结果：隐睾+PFT-α组
与隐睾组和隐睾+PFT-α溶媒组比较,生精上皮排列有序,细胞层数厚,凋亡指数较低,p53和bax表达弱,bcl-2表达强。结
论：PFT-α可能通过上调bcl-2,下调p53和bax的表达,抑制隐睾生精细胞的过度凋亡。     

氨基胍对隐睾所致生精细胞凋亡中p53表达的影响

目的:通过研究氨基胍对隐睾生精细胞中p53表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+氨基胍(Aminoguanidine,AG,iNOS抑制剂)组、隐睾+生理盐水组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组术后分别于腹腔内注射AG和生理盐水,每天一次,定时定量。7天后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。手术侧睾丸H.E染色观察常规组织学及免疫组化检测p53的表达。结果:隐睾+AG组睾丸生精上皮较隐睾组及隐睾+生理盐水组排列有序,细胞层数厚,该组中p53表达弱于隐睾组。结论:AG可降低隐睾中p53的表达,抑制隐睾生精细胞的凋亡,提示NO可能通过增强隐睾生精细胞中p53的表达而促进生精细胞凋亡。     

大鼠隐睾固定后生殖细胞发育凋亡与iNOS基因表达

目的 :研究大鼠隐睾固定后生殖细胞的发育和凋亡 ;探讨诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达与生殖细胞发育和凋亡的关系。方法 :SD雄性大鼠 ,日龄 2 2d时复制双侧隐睾模型 ,术后 14d复制隐睾固定模型。用生物素 dUTP 酶标亲和素测定法检测生殖细胞凋亡 ;用免疫组化SP法检测iNOS基因表达。结果 :与对照组相比 ,隐睾组发生凋亡的生殖细胞数显著增加 (P <0 .0 1) ,隐睾固定组发生凋亡的生殖细胞数无显著变化 (P >0 .0 5 )。发生凋亡的生殖细胞胞浆中iNOS基因表达明显增强。结论 :手术建立的隐睾生殖细胞凋亡增加。隐睾固定后生殖细胞凋亡减少。iNOS基因表达与生殖细胞发育和凋亡关系密切     

生殖股神经对单侧隐睾睾丸组织INSL3基因表达的影响

目的:研究生殖股神经(GFN)在单侧隐睾动物模型中,对睾丸组织中胰岛因子3(INSL3)基因表达的影响。探讨GFN在单侧隐睾对侧睾丸损害的可能机制。方法:通过注射17-β雌二醇获得隐睾大鼠动物模型,取单侧隐睾大鼠12只设为A组;另取12只单侧隐睾大鼠在出生后第30天切断隐睾侧GFN设为B组;双侧隐睾大鼠10只设为C组;10只正常大鼠设为对照D组。在第8周采集各组大鼠血清,放射免疫法测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、促卵泡激素浓度(FSH)。睾丸组织用Trazol法提取总RNA,通过RT-PCR和Northernblot检测INSL3基因mRNA表达水平。结果:隐睾大鼠血清T水平下降;A、B两组血清LH升高,B组较A组升高明显(P<0.05);A、B两组隐睾侧INSL3 mRNA表达量低于D组(P<0.05);B组正常侧睾丸表达量高于A组(P<0.05)。结论:INSL3基因表达量在单侧隐睾睾丸组织中降低,GFN可能是影响INSL3基因表达水平,从而造成对侧已降睾丸的生精功能的损害。     

大鼠单侧睾丸扭转/复位后对双侧睾丸生殖细胞凋亡及MDA水平的影响

目的探讨大鼠单侧睾丸不同时间扭转、复位对双侧睾丸生殖细胞的影响以及可能机制。方法选用健康雄性SD大鼠35只,随机分成假手术组、单纯扭转组及扭转复位组。单纯扭转组采用Turner方法建立左侧睾丸扭转模型(左侧睾丸逆时针扭转720°),分别在扭转持续2、61、2h后即处死;扭转复位组在左侧睾丸扭转后26、1、2h再复位,复位后24h处死。留取双侧睾丸标本进行HE染色观察、生殖细胞凋亡检测及丙二醛(MDA)含量测定。结果睾丸扭转2h,单纯扭转及扭转复位后与假手术组比较扭转侧生殖细胞凋亡增加(P<0.05),而对侧生殖细胞凋亡增加差异无统计学意义(P>0.05);双侧MDA含量均增加(P<0.05)。随着扭转时间的延长,单纯扭转及扭转复位后细胞凋亡和MDA含量均明显增加(P<0.05)。结论随着扭转时间的延长,扭转复位后睾丸的损伤加重,其中缺血-再灌注的氧自由基损伤是造成睾丸损伤的可能机制之一。     

还原型谷胱甘肽对大鼠隐睾生精上皮保护作用的实验研究

目的:探讨单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞变化和还原型谷胱甘肽(GSH)对睾丸的保护作用。方法:30只SD雄性大鼠分为对照组(A组),隐睾组(B组),隐睾加GSH组(C组),每组各10只。采用化学比色法测定双侧睾丸GSH、丙二醛(MDA)含量;生物素-dUTP/酶标亲和素法检测睾丸生殖细胞的凋亡;透射电镜观察Sertoli细胞的超微结构。结果:术后2周,与A组比较,B组双侧睾丸GSH明显降低,MDA和细胞凋亡明显增加(P<0.01),Sertoli细胞线粒体和滑面内质网扩张。C组这种变化则明显减轻(P<0.01),与A组比较无差别(P>0.05)。结论:外源性GSH对单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞有保护作用。     

邻苯二甲酸二丁酯致大鼠隐睾睾丸和附睾病理组织学改变研究

目的：邻苯二甲酸二丁酯（DBP）孕晚期染毒诱导子代雄鼠隐睾的发生和探讨隐睾睾丸、附睾病理组织学的改变。方法：孕鼠40只，随机分组，在怀孕14-18天期间，每天分别灌胃给予大豆油（A组）、DBP100mg／kg（B组）、500mg／kg（C组）、800mg／kg（D组）。出生70天后观察雄仔鼠隐睾发生率及隐睾睾丸、附睾病理组织学改变。结果：C、D组雄仔鼠隐睾发生率为10．8％和63．5％；隐睾睾丸、附睾的脏器系数显著减轻；睾丸生精上皮萎缩，生精细胞层减少甚至消失，曲精小管体积减小；同时附睾管腔中精子缺如。电镜下隐睾睾丸中出现异常的支持细胞。结论：睾丸是DBP主要作用的靶器官；中、高剂量DBP孕晚期染毒可致雄仔鼠隐睾的发生、睾丸生精上皮的损害，从而影响其生育能力。