用改良ABC—ELISA方法检测人体液中凝集素受体的研究

应用改良ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ方法检测９０例正常人唾液中的刀豆凝集素（Ｃｏｎ Ａ）和花生凝集素（ＰＮＡ）受体。结果表明，正常人唾液中ＣｏｎＡ、ＰＮＡ受体含量较丰富，且性别、年龄组间无明显差别。检测其中部分人血清中ＣｏｎＡ、ＰＮＡ受体，发现血甭中ＣｏｎＡ受体含量较唾液中更为丰富，其比值为２．６：１，而血清中ＰＮＡ受体为阴性。本研究的目的在于阐明凝集素受体在人体液中的分布情况以及它们与细胞间的关系，为进一     

如何用免疫组化ABC法做好脑组织冰冻切片

ABC法即抗生物素-生物素-过氧化酶法。ABC法是Hsu等人于1981年在BRAB法和LAB法的基础上改良的。其特点是利用抗生物素分别连接生物素标记的第II抗体和生物素标记的酶。其第I抗体不为标记物所标记,生物素标记的第II抗体与ABC复合物相连接。     

褪黑素受体亚型蛋白的免疫组化检测方法

1　方法介绍1.1　组织标本制备　新鲜待检组织立即用 4%多聚甲醇固定 ,常规脱水、透明、浸蜡 ,石蜡包埋组织 ,4℃冰箱贮存待检测。1.2　主要步骤　将石蜡包埋组织作 4μm的连续切片 ,在 37℃烘箱过夜。石蜡切片用二甲苯脱腊 10 min× 3,梯度乙醇洗 2min× 3,3%过氧化氢溶液处理 10 m in,以阻断内源性过氧化物酶活性。蒸馏水洗 2 min× 3,0 .0 1mol/ L ,p H 6 .0柠檬酸缓冲液微波修复抗原 10 min,冷却后蒸馏水洗 2 m in× 3,PBS洗 2 m in× 3。每张切片加 5 0 ml非免疫性动物血清温室孵育 10 min,每张切片加 5 0 ml鼠抗人 mt1 和 MT2 受体…     

C-erbB2蛋白和雌、孕激素受体与卵巢癌预后的关系

[目的]探讨原癌基因C—erbB2、雌激素受体和孕激素受体与卵巢癌预后的关系。[方法]应用免疫组化LSAB法检测原癌基因C—erbB2蛋白、雌激素受体和孕激素受体在卵巢上皮性良性、交界性和恶性肿瘤中的表达,探讨其与卵巢癌预后的关系。[结果]恶性卵巢上皮性肿瘤与良性卵巢上皮性肿瘤之问,C—erbB2蛋白的强阳性表达差异有显著性意义（P〈0．05）,雌激素受体（ER）的阳性表达有显著性差异（P〈0．05）,孕激素受体（PR）的阳性表达有显著性差异（P〈0．05）。在恶性程度较高,组织分化差,晚期的卵巢癌中C—erbB2蛋白的强阳性表达率高,其预后差;在组织分化好的卵巢癌中PR的表达率高,其预后好;ER与卵巢癌的临床分期、病理分级及预后均无关。三者联合检测时C—erbB2蛋白无过度表达和雌、孕激素受体均阳性的卵巢癌患者的5年生存率（71．4％）最高,而C—erbB2蛋白过度表达和雌、孕激素受体均阴性的卵巢癌患者的5年生存率（0．0％）最低,二者有显著性差异（P〈0．05）。[结论]C—erbB2蛋白无过度表达和ER、PR均阳性的卵巢癌患者的生存率（71．4％）显著高于C—erbB2蛋白过度表达和ER、PR均阴性的卵巢癌患者的生存率（0,0％）（P〈0．05）。三者联合检测对卵巢癌患者预后的估计及临床治疗的选择有一定的指导意义。     

用改良ABC-ELISA方法检测人体液中凝集素受体的研究

应用改良ABC- ELISA 方法检测90 例正常人唾液中的刀豆凝集素(Con A) 和花生凝集素(PNA) 受体。结果表明,正常人唾液中Con A、PNA受体含量较丰富,且性别、年龄组间无明显差别。检测其中部分人血清中Con A、PNA受体,发现血清中Con A 受体含量较唾液中更为丰富,其比值为2 .6∶1 ,而血清中PNA 受体为阴性。本研究的目的在于阐明凝集素受体在人体液中的分布情况以及它们与细胞间的关系,为进一步研究疾病状态下,体液中凝集素受体的变化规律提供依据     

间接免疫酶标法检测白血病细胞表面的运铁蛋白受体

用间接免疫酶标法检测急性单核细胞性白血病(急单)、急性粒细胞性白血病(急粒)、急性淋巴细胞性白血病(急淋)、慢性粒细胞性白血病(慢粒)、慢性淋巴细胞性白血病(慢淋)患者外周血细胞表面的运铁蛋白受体(TR)。47例患者中43例阳性,4例阴性;而48例正常血象者及非白血病患者外周血细胞的TR均为阴性。表明白血病细胞表面TR增加。用此法检测2例白血病及5例正常骨髓片TR阳性细胞的百分率与形态检查幼稚细胞总数的百分率基本相符,而1例急性巨核细胞性白血病及1例急淋骨髓片TR阳性细胞百分率明显高于幼稚细胞,提示白血病细胞TR表达可能较早于形态变异。     

睾酮对血管平滑肌细胞中雄激素受体蛋白表达调控的研究

目的观察睾酮对雄性大鼠血管平滑肌细胞中雄激素受体(AR)蛋白表达的调控作用,并对其调控水平作初步探讨。方法贴块法培养雄性SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,分别用细胞裂解和高盐提取法制备细胞质和细胞核抽提物,Western印迹法检测提取物中AR水平。结果不同浓度(0～4μmol／L)睾酮与静止的血管平滑肌细胞作用24h呈剂量依赖性地增加胞质和胞核内AR蛋白含量,生理水平(40nmol／L)睾酮与细胞作用10min引起胞质内AR蛋白水平的快速下调,继而呈时间依赖性(1～48h)地增加胞质和胞核内AR蛋白表达;预先给以转录抑制剂更生霉素和翻译抑制剂cycloheximide则能使上调的胞质内AR蛋白分别降至单纯睾酮刺激组水平的46％和12％;雄激素拮抗剂氟他胺也能够部分抑制(50％)睾酮对细胞内AR蛋白水平的上调作用。结论血管平滑肌细胞中存在睾酮对AR蛋白表达的自身上调作用,其中伴随着受体的核转位;调控过程既有转录机制、也有转录后机制的参与,并且需要功能性AR的介导。     

用BA-ELSA法测定高胆固醇血症患者单个核细胞LDL受体活性

用生物素标记低密度脂蛋白(LDL),并建立了测定单个核细胞LDL受体活性的生物素-亲和素-酶联吸附测定法。应用该法测定了20例高胆固醇血症患者和55例正常人新鲜分离的单个核细胞LDL受体活性。结果显示:高胆固醇血症患者(血胆固醇浓度7.97±1.61mmol/L)的受体活性为50.1±16.0ng/mg细胞蛋白,正常人(血胆固醇浓度4.16±0.65mmol/L)的受体活性为79.1±34.6ng/mg细胞蛋白,两者比较P<0.01。这表明患者血胆固醇浓度的升高与其受体活性的降低有着密切的关系。BA-ELSA法用血量仅5ml/人,且敏感、简便、安全,适用于大规模临床检测。     

层连接蛋白受体、E-钙粘附蛋白和增殖细胞核抗原在胃癌中的表达及其意义

目的探讨层连接蛋白受体、E-钙粘附蛋白和增殖细胞核抗原在胃癌中的表达及其意义.方法对我院1994～1998年经病理诊断明确、随访资料完整的65例胃癌组织标本、35例癌旁组织,采用免疫组化法检测LN-R、E-cad和PCNA的表达情况,并分析其与胃癌临床特征、预后间的关系.结果胃癌中LN-R阳性表达率为38.5%,癌旁组织为9.7%,二者间差异有统计学意义(P=0.004);E-cad阳性表达率为72.3%,癌旁组织为94.3%,差异有统计学意义(P＜0.01);PCNA胃癌中的阳性表达率为100%,癌旁组织为76.5%,差异有统计学意义(P＜0.001).胃癌组织中LN-R阳性表达与肿瘤大小、大体形态、浸润深度、淋巴结转移、临床分期密切相关(P＜0.05);阳性表达者根治术后复发转移率及病死率均高于阴性者(P＜0.05).胃癌组织中E-cad阳性表达与淋巴结转移密切相关(P＜0.05);胃癌组织中PCNA阳性表达与临床各参数无关.结论胃癌组织中存在着LN-R、PCNA蛋白高表达、E-cad蛋白低表达现象,LN-R与胃癌侵袭转移的发生密切相关.