GABAA受体在爪蟾卵母细胞的表达

目的 将鼠源γ-氨基丁酸A型（GABAA）受体表达于爪蟾卵母细胞膜上并行功能测定。方法 微量注射仪将纯化的大鼠脑mRNA注入准备好的爪蟾卵母细胞内并于19℃温浴48h以上使其表达；使用常规双电极电压钳记录卵母细胞表达的受体特性。结果 爪蟾卵母细胞注射大鼠脑mRNA 48h后有GABAA受体的表达，此受体具有天然GABAA受体的氯通道特性。结论 爪蟾卵母细胞具有表达外源GABAA受体的特性，是研究GABA受体生理和药理功能的一种重要工具。     

非洲爪蟾卵母细胞内源性及外源性ATP和GABA受体介导的膜反应比较

目的 :对非洲爪蟾卵母细胞表达的ATP和GABA激活电流进行比较。方法 :包括mRNA和cDNA的提取、卵母细胞的微量注射及双电极电压钳技术。结果 :①在表达P2X2 或P2X4 的卵母细胞上 ,外加ATP可分别诱导一被Zn2 + 增强的内向电流。②在表达鸡脑mRNA的卵母细胞上 ,可记录到GABA激活电流 ,且此电流可被bicucul line(一种GABAA 受体选择拮抗剂 )所阻断。③在表达了人视网膜 ρ1亚基cRNA的卵母细胞上 ,外加GABA可引起一不被bicuculline阻断的内向电流 ,后者可被I4AA(一种GABAC 受体特异性拮抗剂 )阻断。④在具有滤泡膜的卵母细胞上可记录到 3种形式的ATP激活电流和一外向的慢的GABA激活电流。⑤在除去滤泡膜的卵母细胞上均未记录到ATP和GABA激活电流。结论 :卵母细胞上存在内源性的嘌呤受体、GABAB 和GABAC 受体 ;且此内源性受体存在于滤泡膜上 ;P2X2 、P2X4 嘌呤受体及GABAA 和GABAC 受体均可在卵母细胞上表达 ,表达的受体所介导的激活电流与内源性受体介导的激活电流有明显区别     

丙戊酸钠对大鼠脑NMDA受体在爪蟾卵母细胞表达的影响

目的 :观察丙戊酸钠对大鼠脑 N-甲基 - D-天冬氨酸 ( NMDA)受体在非洲爪蟾卵母细胞表达的影响。方法 :采用电压钳位技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞膜上的大鼠脑 NMDA受体通道电流及特性并观察 0 .1和 0 .5 mmol· L-1 丙戊酸钠对大鼠脑 NMDA受体通道电流的影响。结果 :丙戊酸钠 ( 0 .1和 0 .5 mmol· L-1 )对表达于非洲爪蟾卵母细胞的大鼠脑 NMDA受体功能有抑制作用 ,电流峰值由 ( 97.5± 9.8) n A降至 ( 79.7± 1 0 .5 ) n A、( 61 .3± 1 2 .5 ) n A ( P<0 .0 5和P<0 .0 1 )。结论 :丙戊酸钠对大鼠脑 NMDA受体有明显的抑制作用     

大鼠脑N-甲基-D-门冬氨酸受体在非洲爪蟾卵母细胞的表达

从成年和14d龄大鼠脑中提取mRNA,并分别注入到非洲爪蟾卵母细胞内,以全细胞电压钳位法测N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）引起内向膜电流,成年组为（5.2± 1.3）nA,14d龄组为（13.3±0.8）nA,组间比较差异显著（P<0.01）;以最小反应模型分析14d龄组的NMDA量效反应曲线呈S形,K值为86μmol/L。结果表明14d龄鼠脑NMDA受体在非洲爪蟾卵母细胞表达较成年鼠好。     

异戊酸对非洲爪蟾蝌蚪的制动作用及其相关机制

目的观察异戊酸对非洲爪蟾蝌蚪运动的影响,探讨异戊酸对非洲爪蟾卵母细胞膜上甘氨酸耦联的抑制性氯离子通道的影响及其与异戊酸麻醉样作用的关系。方法对非洲爪蟾的蝌蚪在体观察异戊酸的制动效应;采用微注射法使非洲爪蟾卵母细胞上过度表达α1甘氨酸受体,并通过双电极电压钳技术测量异戊酸对甘氨酸耦联的抑制性氯离子通道功能的影响。结果异戊酸在非洲爪蟾蝌蚪中可产生类麻醉效应,其EC50为（44.8±3.7）mmol/L;Hill系数为4.1±1.2;浓度为5.0、7.5、10、20mmol/L的异戊酸可明显增强甘氨酸诱发的氯离子通道电流强度,增强程度为（19.4±4.9）%、（78.6±5.6）%、（107±27）%、（187±39）%,有显著性差异（P＆lt;0.01）。异戊酸可呈浓度依赖性地增加通过非洲爪蟾卵母细胞上甘氨酸耦联抑制性氯离子通道的电流。结论异戊酸对非洲爪蟾蝌蚪具有制动作用,其机制可能与增强对甘氨酸耦联抑制性氯离子通道的电流有关。     

NMDA受体亚基NR1的体外表达及功能检测

目的：体外表达ＮＭＤＡ受体亚基ＮＲ１并了解其电生理学特性,探讨体外表达受体亚基的意义。方法：将克隆的ＮＭＤＡ受体亚基ＮＲ１质粒ＤＮＡ经体外转录成ＲＮＡ,显微注射到爪蟾卵母细胞后进行受体表达,采用双电极电压钳位技术记录表达的ＮＲ１亚基的激活电流。结果：注射ＮＲ１亚基ＲＮＡ的爪蟾卵母细胞能表达出具有电生理学功能的受体,其激活电流能被Ｄ－ＡＰ５阻断等特性,说明该表达的ＮＲ１亚基具有ＮＭＤＡ受体的功能。结     

利用双电极电压钳检测rs12899798单核苷酸多态性对α7烟碱受体功能的影响

目的 检测α7烟碱受体（α7 nicotinic receptor,nAChR）的一个错义突变（W55G）对受体功能的影响。方法 利用双电极电压钳在非洲爪蟾卵母细胞检测了突变体W55G的功能。首先将nAChR α7亚基的cDNA克隆进入pGEMHE载体中,利用定点突变的方法构建突变体W55G。然后在体外利用T7 RNA聚合酶合成cRNA,并利用显微注射的方法将cRNA注射进入非洲爪蟾卵母细胞中。1~3 d后,利用双电极电压钳检测野生型nAChR α7及其突变体W55G的功能。结果 W55G突变体对乙酰胆碱敏感性降低约6倍,但最大电流（I_max）则显著增加;对胆碱的敏感性降低了约3倍。此外,W55G突变体明显比野生nAChR有更高的时间常数,明显降低了α7烟碱受体的脱敏速率。结论 nAChR α7 突变体功能的改变可能重塑突触后反应,对于脑疾病的发生可能会有较大影响。     

兔脑γ-氨基丁酸结合蛋白(受体)在非洲爪蟾卵母细胞上的重建

作者采用盐酸胍法提取兔脑RNA,并经寡聚-(dT)-纤维素亲和层析分离获得完好的总mRNA,这种异源mRNA注入非洲爪蟾卵母细胞胞浆后经放射受体分析证实,γ-氨基丁酸结合蛋白(受体)能被重建于细胞膜上。该重建技术稳定可靠,为进一步进行γ-氨基丁酸受体的体外研究奠定了基础。     

卵母细胞基因表达系统的应用研究

目的 :建立研究神经生理及药理的卵母细胞表达模型 ,并对鸡脑mRNA在卵母细胞上表达的氨基酸类受体进行研究。方法 :采用盐酸胍或异硫氰酸胍法抽提总RNA ,经寡聚脱氧胸苷 (oligo -dT)纤维素柱纯化得mRNA。mRNA微注射到卵母细胞内进行表达 ,以双电极电压钳技术研究表达的受体。结果 :模型能明显表达外源性mRNA表达的受体 ,而阴性对照无表达。在卵母细胞膜上表达的γ -氨基丁酸 (γ -aminobutyricacid ,GABA) ,甘氨酸(Glycine ,Gly)及红藻氨酸 (Kainate ,KA)受体 ,施加GABA ,Gly及KA均能引起一剂量依赖的内向电流 ,相应的拮抗剂可阻断其电流。剂量效应曲线显示GABA及KA诱导电流的半有效浓度 (EC5 0 )分别为 2 .9× 10 -5mol/L及 6 .3× 10 -5mol/L。结论 :卵母细胞可明显表达鸡脑mRNA编码的KA ,Gly及GABA受体 ,其药理特性与天然受体相似 ,是一个良好的神经生理及药理研究模型。     

电压钳位法检测细胞内钙振荡

目的 建立一种电压钳位技术检测细胞内钙振荡的方法。方法 采用全细胞电压钳位法检测非洲爪蟾卵母细胞微量注射CaCl2诱发的振荡电流。结果 振荡电流为钙诱发的振荡电流，以同样的方法也能测得氨甲酰胆碱激动表达于非洲爪蟾卵母细胞膜之大鼠脑胆碱受体而产生的振荡电流。