胃十二指肠疾病患者感染幽门螺杆菌的cagA基因和血清CagA抗体 …

目的：探讨幽门螺杆菌ｃａｇＡ基因和血清ＣａｇＡ抗体与胃十二指肠疾病的关系。方法：用聚合酶链反应方法测定６２３汕慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者感染ＨｐｃａｇＡ基因；用酶免疫方法测定同一患者血清ＣａｇＡ抗体。结果：ＨｐｃａｇＡ基因阳性率为５６．４５％。慢性胃炎、消化性溃疡胃癌患者感染ＨｐｃａｇＡ基因阳性率分别为５５．５６％、５４．１７％和６３．６４％。三种疾病患者之间感染Ｈｐ的ｃａｇＡ基因阳性率无显著     

幽门螺杆菌cagA基因与胃粘膜损伤及增殖间关系的探讨

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因（ｃａｇＡ基因）与胃粘膜损伤及增殖的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法检测５０例患者Ｈｐ的ｃａｇＡ基因，并经ＨＥ染色评定胃粘膜炎症程度、肠化生、淋巴小结及萎缩的发生率，免疫组化检测胃粘膜细胞核增殖抗原指数（ＰＣＮＡ　ＬＩ％）。结果：３７／５０例含有ｃａｇＡ基因，消化性溃疡ｃａｇＡ基因阳性率高于慢性胃炎（Ｐ＜０．０１）；ｃａｇＡ基因阳性者炎症程度和ＰＣＮＡ　ＬＩ％均高于阴性者（Ｐ　＜０．０５）；但两组肠化生﹑淋巴小结及萎缩发生率差异无显著性（Ｐ　＞０．０５）。结论：ｃａｇＡ基因阳性Ｈｐ感染后可增加胃粘膜的炎性损伤及细胞增殖。ｃａｇＡ基因为Ｈｐ毒力指标之一，但并非致病的单一指标。     

幽门螺杆菌亚型cagA+基因株与胃癌的关系

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关基因Ａ阳性株（ｃａｇＡ＾＋株）与胃癌的关系。方法：通过多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测９２例胃癌和２４例浅表胃炎组织石腊标本Ｈｐ和ｃａｇＡ＾＋亚型株的感染。结果：①Ｈｐ感染在胃癌和慢性浅表胃炎间无差异,而ｃａｇＡ＾＋株感染是前者高于后者（Ｐ〈０．０５）;②Ｈｐ感染早期胃癌地进展期癌、胃窦癌高于贲门癌、肠型胃癌高于弥漫型癌（Ｐ〈０．０５）。然而只有肠型胃癌ｃａｇＡ＾     

幽门螺杆菌CagA基因和细胞因子在致病中的作用

目的幽门螺杆菌（Ｈｐ）与活动性胃炎、消化性溃疡关系密切。而ＣａｇＡ基因被认为是幽门螺杆菌的毒力标志。探讨ＣａｇＡ基因型幽门螺杆菌和细胞因子——肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、白细胞介素（ＩＬ－６、ＩＬ－８）在上消化道疾病中的作用。方法（１）用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对１１８例胃十二指肠患者的胃粘膜进行ＣａｇＡ基因检测。（２）用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定胃粘膜培养上清中ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－８的含量。结果６７例Ｈｐ感染患者中５０例检出ＣａｇＡ基因。其中１５例十二指肠溃疡患者全部检出ＣａｇＡ基因，１０例胃溃疡患者中８例检出ＣａｇＡ基因，４２例慢性胃炎中２７例检出ＣａｇＡ基因。Ｈｐ阳性组的胃粘膜培养上清中ＴＮＦ－α、ＩＬ－８、ＩＬ－６的含量显著高于Ｈｐ阴性组（Ｐ＜０．０１），ＣａｇＡ＋Ｈｐ组胃粘膜培养上清中ＩＬ－８的浓度显著高于ＣａｇＡＨｐ组（Ｐ＜０．０１）。ＴＮＦ－α与ＩＬ－８、ＩＬ－６呈正相关。ＴＮＦ－α、ＩＬ－８、ＩＬ－６的浓度在有Ｈｐ感染的消化性溃疡和慢性胃炎之间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。组织学表明，ＣａｇＡ＋Ｈｐ与胃粘膜的中性粒细胞浸润程度有关，而与肠化生、腺体萎缩，不典型增生的程度无     

云南汉、白、纳西族人群幽门螺杆菌 vacA基因m混合亚型及iceA基因混合型的致病性研究

目的探讨云南白族、纳西族与汉族幽门螺杆菌（Hpylori）菌株含有vacA基因m混合亚型及iceA基因混合型的感染情况及其致病性。方法选取H．pylori相关慢性胃炎和消化性溃疡患者的胃黏膜,分离培养麒pylori菌株;用PCR方法检测云南白族、纳西族与汉族菌株的vacA基因亚型及iceA基因。结果云南109例Hpylori菌株的混合感染率为32．1％。iceA混合基因亚型的检出率明显高于vacA基因m混合亚型检出率（均P〈0．05）。其中白族混合感染率（67．7％）高于纳西族（20．0％）和汉族（12．1％）（均P〈0．001）;白族中iceA1＋iceA2的混合感染率（61．3％）明显高于纳西族（17.8％）和汉族（9．1％）（均P〈0.001）。云南菌株34例Hpylori混合感染患者中含vacA基因m混合亚型＋iceA混合基因型的混合感染与消化性溃疡有关;只含iceA混合基因亚型的混合感染与慢性胃炎有关。结论不同国家和地区的混合感染率差别很大,云南白族、纳西族与汉族Hpylori菌株含有vacA基因m混合亚型及iceA混合基因型者的混合感染具有多态性。汉族以vacA基因混合亚型来判断混合感染较敏感,白族、纳西族患者中以iceA基因混合亚型判断混合感染较敏感。云南Hpylori菌株含iceA基因亚型和含vacA基因m混合亚型以及白族菌株的vacA基因m区亚型的混合感染与麒pylor致病性有关;以iceA基因混合亚型判断混合感染较敏感。     

CagA^＋Hp与溃疡边缘上皮细胞增殖的关系

目的：研究ＣａｇＡ＾＋Ｈｐ与消化性溃疡边缘上皮细胞增殖的关系。方法：粘膜涂片Ｇｉｅｍｓａ染色及ＲＵＴ确定Ｈｐ感染,ＳＰ免疫组织化学方法检测溃疡边缘ＰＣＮＡ阳性表达情况,对Ｈｐ阳性者抽取静脉血１ｍｌ按ＨｐＣａ－ｇＡＩｇＧ检测盒说明操作检测ＣａｇＡ抗体。结果：ＧＵ患者ＣａｇＡ＾＋Ｈｐ的检出率为７２．７２％,ＤＵ患者ＣａｇＡ＾＋Ｈｐ的检出率为６８．１８％。溃疡边缘上皮ＰＣＮＡ阳性表达上皮ＰＣＮＡ阳性表达明显高于无显著病变者;Ｈｐ阳性溃疡边缘ＰＣＮＡ阳性表达显著高于Ｈｐ阴性者（Ｐ〈０．００１）;但ＣａｇＡ阳性溃疡边缘ＰＣＮＡ阳性表达与阴性者相比无统计学差异。结论：在Ｈｐ相关溃疡ＣａｇＡ＾＋Ｈｐ菌株占优势,且Ｈｐ感染可导致溃疡边比上皮细胞增殖加速,但ＣａｇＡ可能不是导致细胞增殖加速的原因。     

三种幽门螺杆菌致病作用的实验研究

目的 为观察３种幽门螺杆菌株在小鼠胃内集落形成能力及感染后对小鼠胃粘膜组织学影响。方法 Ｃ５７ＢＬ／Ｃ小鼠４０只,分野生型株,突变株,悉尼株及对照组４组,每组１０只鼠。野生型ＣＰＹ３４０１株（表达细胞相关基因（Ｃｙｔｐｔｏｘｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅＡ,ＣａｇＡ）菌株（ＣａｇＡ）与野生型ＣＰＹ３４０１株同源并去掉ＣａｇＡ的突突株（ＣａｇＡ）及悉尼株（ＣａｇＡ）分别以０．５ｍｌ（１０＾９菌落     

幽门螺杆菌空泡毒素基因的单链构象多态性研究

目的 应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性,借此区分不来源的Ｈｐ。方法 用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃,十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增,其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交,对３例具不同ＳＳＣＰ带型的十二指肠溃疡（ＤＵ）患者的Ｈｐ进行基因序列分析。结果 ｖａｃＡ的两种产物ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７６．５％（１１４／１４９）和２３．５     

免疫印迹法检测幽门螺杆菌及VacA和CagA抗体在上消化道疾病中意义的研究

目的：探讨幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）与上消化道疾病的关系。方法：采用免疫印迹法,对慢性胃炎１７４例（其中浅表性胃炎６２例,弥漫性胃窦胃炎５７例,多灶性萎缩性胃炎５５例）和十二指肠溃疡５４例患者血清Ｈｐ进行检测分析,对Ｈｐ阳性的１３２例慢性胃炎和５０例十二指肠溃疡患者进行ＶａｃＡ、ＣａｇＡ抗体检测。结果：慢性胃炎１７４例中检测出Ｈｐ阳性１３２例,阳性率为７５．８６％（其中浅表性胃炎Ｈｐ阳性率为７５．８１％,弥漫性胃窦胃炎为７８．９５％,多灶性萎缩性胃炎７２．７３％）;十二指肠溃疡患者Ｈｐ阳性率为９２．５９％。在１８２例Ｈｐ阳性者中ＶａｃＡ、ＣａｇＡ抗体检测出阳性率为５３．８５％,而慢性胃炎与十二指肠溃疡有显著的差异。结论：提示Ｈｐ感染与上消化道疾病的发生有重要的生物学意义。     

幽门螺杆菌CagA因子与胃粘膜病理变化的关系

分析３２２例接受胃镜检查患者的胃粘膜病理变化与幽门螺杆菌（ＨＰ）细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）因子的关系。结果表明,ＣａｇＡ＾＋ＨＰ＾＋患者胃炎的严重程度比ＣａｇＡ＾－ＨＰ患者重,且发展为萎缩、溃疡及癌症的机率较高,尤以男性为甚。     

沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体.将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达.结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达.结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究Ct致病机制及DNA疫苗的研究提供理论依据.     

Ｌｉｍｓ Ｅ：一个新的ＬＩＭ同源域基因的克隆和初步分析

目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因.方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定.结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1 164 bp.编码387个氨基酸.结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的小鼠Liras基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础.     

哺乳动物性别决定基因的研究进展

目的了解哺乳动物性别决定基因的作用与功能。方法查阅本领域国内外文献并进行综述。结果SRY、SOX9、WT1、SF1、AMH及DAX1等基因都参与哺乳动物性别决定。结论性别决定基因的研究对性分化与发育异常等临床疾病的诊断和治疗具有十分重要的意义。     

人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达

目的：构建人共刺激分子CD80(B7-1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3)融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法：采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281bp)．此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7-1 cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1，测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达。结果：构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7sart3／pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致．阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强．免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应，融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当。结论：成功构建真核表达载体B7Sart3／pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。     

穿梭质粒pZH32的构建

以pS189、pSV_2gpt、pMCi5为材料,构建了以EB病毒为基础,以酪氨酸tRNA琥珀突变校正基因SupF为靶基因,以黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因Eco gpt为选择标记基因的穿梭质粒pZH32。pZH32长9.4kb,克服了以SV40为基础的穿梭质粒自发突变率高以及宿主范围局限的缺点。SupF基因遗传背景清楚,长度126bp,便于进行序列分析。gpt基因使转化克隆的筛选更加方便。有利于建立一种化学诱变剂的分子检测系统,研究基因突变的类型和突变机制。     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因，ｐｌ６基因为目的基因，将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游，构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６，并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

Rh(-)献血者128例基因分型

目的：探讨Rh(-)献血者RhD基因分型的临床意义。方法：采用PCR－－SSP技术检测郑州市128例Rh（－）献血者的RhD基因结构，用氯仿／三氯甲烷法放散检测D^u检测，结果：RhD基因多态性存在3种基本形式，其中外显子完整存在32例（25．00％），全部为D^u型，完全缺失85例（66．41％），部分缺失11例（8．59％），其中2例为D^u型。结论：RhD基因的丰富多态性对于确保输血安全具有指导意义。     

肿瘤特异性报告基因载体的构建

目的：将构建一种能在肿瘤组织中进行肿瘤行异性表达的逆转录病毒载体，增强肿瘤基因治疗的靶向性。方法：PCR法获得HER2基因的启动子片段并将其克隆至逆转录病毒载体P^LXSN中，再将突变型绿色荧光蛋白（mtGFP)基因克隆至该启动子下游。结果：质粒P^LHSN经EcoR I和BamH I酶切后可切出510bp和5.8kb两条片段；质粒P^LHGSN经BamH I酶切可切出520bp和6.7kb两条片段。结论：成功构建了携带HER2基因启动子和mtGFP报告基因的逆转录病毒载体。     

慢性胃炎胃粘膜上皮细胞中bax、fas、p16基因的表达

目的:探讨bax、fas和p16在胃粘膜病变发生发展过程中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学方法,检测慢性浅表性胃炎(CSG)和轻、中、重度慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃粘膜上皮细胞中bax、fas(促凋亡基因)和p16(增殖负调控基因)基因蛋白的表达情况.结果:CSG和轻、中、重度CAG胃粘膜中bax的表达率分别为41.75%、72.41%和78.26%,fas的表达率分别为39.81%、65.52%和78.26%,p16的表达率分别为9.71%、24.14%和30.43%.轻、中、重度CAG与CSG比较,bax、fas、p16的表达差异有显著性意义P<0.05～0.01.轻、中、重度CAG间比较,差异无显著性意义.结论:bax、fas和p16的高表达,使得细胞增殖/凋亡的比例失衡,在胃粘膜病变的发生发展中可能有重要意义.     

胃癌发生过程中DNA修复蛋白表达的意义

[目的]探讨错配修复蛋白hMSH2、损伤直接逆转蛋白MGMT、同源重组修复蛋白XRCC2和XRCC3蛋白表达在胃癌诊断中的意义及用于胃癌预警的可能性.[方法]免疫组织化学(SP)法检测56例胃癌患者的癌组织(癌组)、癌旁黏膜上皮(癌旁组)与30例非肿瘤患者(正常组)胃黏膜上皮hMSH2、MGMT、XRCC2及XRCC3蛋白表达情况.[结果]胃癌、癌旁与正常组hMSH2蛋白阳性表达率为76.8%(43/56)、33.9%(19/56)与33.3%(10/30),胃癌组明显高于癌旁和正常组(P<0.05).MGMT蛋白阳性表达率分别为26.8%(15/56)、32.1% (18/56)与73.3%(22/30),胃癌组和癌旁组明显低于正常组(P<0.05);XRCC2蛋白阳性表达率分别为32.1%(18/56)、3.6% (2/56)与0%(0/30),胃癌组明显高于癌旁和正常组(P<0.05);XRCC3蛋白阳性表达率分别为76.8%(43/56)、35.7% (20/56)与36.7%(11/30),胃癌组明显高于癌旁和正常组(P<0.05).粘液癌、低分化与高中分化癌组hMSH2蛋白阳性表达率分别为62.5%(10/16)、76.9%(20/26)与85.7%(12/14); MGMT分别为12.5%(2/16)、34.6%(9/26)与28.6%(4/14);XRCC2分别为18.8%(3/16)、42.3%(11/26)与 28.5%(4/14);XRCC3分别为56.3%(9/16)、84.6%(22/26)与85.7%(12/14),这些蛋白表达在各组间差异无显著性意义(P>0.05).胃癌组织中hMSH2阳性组和阴性组MGMT蛋白阳性表达率分别为34.9%(15/43)和 0%(0/13),两种蛋白表达明显正相关(r＝0.333,P<0.05).[结论]hMSH2、MGMT、XRCC2及XRCC3蛋白的异常表达说明胃癌中存在多种形式的DNA损伤.检测它们的表达会有助于诊断和预警胃癌.