凉血通瘀方对脑出血大鼠脑水肿及基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响

目的：探讨中药凉血通瘀方对脑出血大鼠脑水肿的作用及其机制。方法：采用自体血纹状体注射方法制备大鼠脑出血模型。实验大鼠分为假手术组、模型组和凉血通瘀方组。凉血通瘀方组给予凉血通瘀煎剂灌胃,余两组给予生理盐水灌胃,每日1次。脑出血后24、48、72和120 h观察大鼠脑水肿情况,明胶酶谱法检测脑血肿周围组织内基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）活性,荧光定量实时聚合酶链式反应法检测MMP-9和基质金属蛋白酶组织抑制剂1（tissueinhibitor ofmetalloproteinase-1,TIMP-1）的表达水平。结果：凉血通瘀方组大鼠脑水肿程度在各时间点均显著低于模型组（P〈0.01）,仅在72 h其脑组织含水量高于假手术组（P〈0.01）。与模型组相比,凉血通瘀方组的MMP-9酶原水平及活性均显著降低,其mRNA水平亦在脑出血后48、72、120 h低于模型组（P〈0.01）,而TIMP-1 mRNA水平在各时间点均显著升高（P〈0.01）。结论：凉血通瘀方可能通过上调TIMP-1表达来抑制MMP-9水平,从而减轻脑出血大鼠脑水肿。     

立体定向血肿抽吸术对大鼠脑出血后NSE表达的影响

目的 在Ⅳ型胶原酶诱导的实验性脑出血模型的基础上,实施立体定向血肿抽吸术并研究抽吸术后血肿周围血浆神经元特异性烯醇化酶(NSE)的变化及意义。 方法 成年健康Wistar雄性大鼠135只,随机分为假手术组、脑出血组、抽吸治疗组。将Ⅳ型胶原酶注入大鼠尾状核建立大鼠脑出血模型,在形成脑出血10 h后,向血肿腔内注入含有3 000 U尿激酶的溶液5 μl来溶解血凝块,2 h后进行立体定向血肿抽吸术干预治疗。应用Bederson四级评分法评价大鼠神经功能缺损程度,免疫组化法及Western blot分别检测NSE蛋白的表达。 结果 大鼠脑出血后,各个时间点脑出血组、抽吸治疗组血肿周围脑组织NSE蛋白表达明显高于假手术组(P＜0.05);脑出血后第1天,抽吸治疗组NSE蛋白表达略高于脑出血组,但差异无统计学意义(P＞0.05);脑出血后第3天、第5天抽吸治疗组与脑出血组比较,NSE蛋白表达明显降低(P＜0.01)。 结论 Ⅳ型胶原酶诱导的大鼠脑出血模型是一种稳定、可靠的且能够实施立体定向血肿抽吸术的理想模型。大鼠脑出血后神经行为功能损伤,且血肿周围组织NSE蛋白表达明显增强。早期进行血肿抽吸术可以较好地清除脑内血肿,降低脑组织NSE蛋白的表达,减少脑出血后神经元的阳性细胞数及变性细胞数,从而保护神经组织,明显改善其神经行为功能。      

游泳训练对脑出血大鼠认知功能及NMDAR表达的影响

目的 探讨游泳对脑出血(ICH)大鼠认知功能的影响,并分析其相关的神经生物学机制.方法 将30只Sprague-Dawley大鼠采用随机数字表法分为3组:假手术组(假手术组),脑出血模型组(模型组),脑出血后游泳组(游泳组);每组10只.模型组和游泳组,将I型胶原酶注入大鼠尾状核建立ICH大鼠模型;造模成功后1 d,游...     

通腑活血汤对脑出血大鼠脑组织保护作用的病理实验研究

目的观察通腑活血汤对脑出血大鼠的病理变化的影响，探讨其作用及部分机制，为临床治疗脑出血患者提供科学依据。方法用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血，建立脑出血模型。观察大鼠神经症状的变化及病理形态的改变。结果造模大鼠偏瘫状态明显，脑系数、脑组织含水量增高，脑组织出现水肿，说明胶原酶诱导的大鼠脑出血模型成功。通腑活血汤组的大鼠神经缺损症状，脑血肿周围水肿，格子细胞及胶质细胞增生活跃均明显优于模型组。结论通腑活血汤对脑出血大鼠脑组织有保护作用。     

微创血肿抽吸术后大鼠脑出血周围组织细胞凋亡的研究

目的探讨脑出血周围组织神经细胞凋亡相关基因热休克蛋白70(HSP70)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化规律及微创血肿抽吸干预治疗对神经细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠75只分为假手术组、脑出血组、血肿抽吸组,各组又分为12 h、1 d、2 d、3 d、7 d 5个时间点。假手术组注入尾状核2μL生理盐水,脑出血组注入大鼠尾状核2μLⅣ胶原酶。血肿抽吸组是在脑出血模型制作6 h后进行血肿抽吸。各组分别于各时间点处死大鼠取脑组织,采用免疫组织化学染色测定各组大鼠脑出血周围HSP70、Caspase-3蛋白的表达并进行统计学处理。结果 HSP70、Caspase-3含量脑出血组较血肿抽吸组及假手术组均明显增高(P<0.05),血肿抽吸组比假手术组明显增高(P<0.05)。HSP70表达在12 h出现,3 d达高峰,随后表达逐渐减少。Caspase-3蛋白的表达在12 h出现,在3 d时达高峰,第7天表达明显减少。结论 Caspase-3蛋白高表达说明在脑出血第3天神经细胞凋亡和损害达到高峰,随后逐渐降低,HSP70高表达对出血脑组织具有明显的保护效应,且对Caspase-3蛋白的表达具有抑制作用,而且在早期对脑出血进行微创血肿抽吸干预治疗可以减少脑出血后神经细胞的凋亡。     

胶原酶注入小鼠尾状核建立脑出血模型

目的用脑内注射胶原酶方法建立小鼠脑出血模型。方法在动物脑立体定位仪下将肝素化Ⅶ型胶原酶0.15μL(0.5 U/μL)注射到昆明小鼠右侧尾状核内;分别在术后8、12、24、72 h对小鼠运动功能进行检测,通过在各时间点测量血肿直径来观察出血高峰的时间,并对出血部位脑组织进行光镜观察来验证模型制作是否成功。结果术后小鼠即表现左侧肢体偏瘫症状,至12~24 h症状最重。形态学观察证实右侧尾状核区血肿形成,且出血高峰的时间与肢体偏瘫症状发展过程基本一致。不同个体间血肿体积和部位基本一致。结论应用Ⅶ型胶原酶脑内注射的方法建立的小鼠脑出血模型,是一种方法简单,效果可靠,易于大批量制作的动物模型。     

基于免疫共沉淀技术探讨涤痰通瘀方对急性脑出血大鼠应激性肝损害的调控作用

目的研究急性脑出血大鼠应激性肝损害细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)与白细胞介素-1受体相关激酶(IRAKs)的交叉对话及涤痰通瘀方对其的调控作用。方法将SD大鼠随机分成脑出血组、涤痰通瘀组、正常组。建立大鼠急性脑出血模型,采用免疫共沉淀法检测SOCS1与IRAK-1、2、4、M之间的相互作用,并观察造模后不同时相点各组大鼠肝组织病理染色结果。结果 SOCS1与IRAK-1、2、4、M可以相互作用,对急性脑出血大鼠肝损害起到一定的保护作用,同时涤痰通瘀方对SOCS1/IRAKs交叉对话有一定的调控作用。结论 SOCS1/IRAK-1、2、4、M相互作用,对LPS细胞内信号转导炎性级联反应起到抑制效应,在肝损害保护效应中发挥关键作用。经涤痰通瘀方干预后,可以有效改善肝组织病理学结构,是防治脑出血应激性肝损害的重要途径。     

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经细胞保护作用的研究

目的:观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与蛋白酶激活受体-1 (PAR-1)表达的动态变化及蛭龙活血通瘀胶囊的干预作用,探讨蛭龙活血通瘀胶囊可能的脑保护作用.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组.自体血注入法制备脑出血大鼠模型,TUNEL法测定凋亡细胞,免疫组化法测定PAR-1蛋白.结果:与模型组比较,蛭龙活血通瘀胶囊低、中、高剂量组的凋亡细胞与PAR-1表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与低剂量组比较,中、高剂量组各时间点的凋亡细胞与PAR-1表达均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:蛭龙活血通瘀胶囊能明显抑制PAR-1活化,减少细胞凋亡,对脑出血大鼠具有明显的脑保护作用,且存在一定量效关系.     

冰黄五苓散直肠滴注对缺血性脑卒中大鼠脑组织S100B、NSE表达的影响

【目的】观察冰黄五苓散直肠滴注对大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠脑组织S100B蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的影响。【方法】选用63只健康雄性SD大鼠随机分为治疗组、假手术组和模型组,根据处死时间每组再随机分为3 d、7 d、14 d 3个亚组。对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用干—湿质量法行脑组织含水量测定,采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织中S100B、NSE表达。【结果】治疗组大鼠神经功能缺损评分明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组大鼠脑组织含水量、S100B的表达低于模型组,而NSE的表达高于模型组,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】冰黄五苓散具有改善MCAO大鼠神经功能缺损症状、减轻脑水肿、保护大脑神经功能作用。     

安博维对高血糖伴肾功能不全大鼠的保护作用

【目的】研究安博维、安体舒通对糖尿病肾病肾功能不全模型大鼠肾脏功能的保护作用。【方法】将大鼠随机分为4组,即假手术组、糖尿病模型组、安博维治疗组、安体舒通治疗组,在结扎左侧肾脏合并高脂高糖饲养3周的基础上,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病大鼠模型。收集各组血、尿,生化方法检测血糖、血肌酐、血尿素氮、尿糖、尿白蛋白、尿肌酐以及肌酐清除率等相关指标。【结果】建模成功后,通过生化指标结果比较,安博维治疗组与假手术组、糖尿病模型组、安体舒通治疗组大鼠比较,安博维对STZ糖尿病大鼠肾脏功能的保护作用与其它各组相比,生化指标的均数差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】安博维对STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤有明显的改善作用。     

采用Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型的技巧

目的：研究Ⅶ型胶原酶脑内注入法构建大鼠脑出血模型的制作技巧。方法：运用立体定向技术及本文改进了的方法,向大鼠尾状核内缓慢注入Ⅶ型胶原酶,制作大鼠脑出血模型,通过观察其行为学变化,初步评价该模型建立的可行性和稳定性。结果：对150只SD大鼠进行脑出血造模,2只死亡,9例不成功,成功率为92.7％。结论：Ⅶ型胶原酶注射可建立理想稳定的脑出血模型,且操作简单,有较大推广价值。     

热休克蛋白70对脑出血大鼠神经细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)对大鼠脑出血神经细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 将60只SD大鼠分为假手术组,脑出血组各30只,每组又分为6h、12h、1d、2d、3d、7d 6个亚组。假手术组向尾状核注射生理盐水2μL,脑出血组向大鼠尾状核注射2μL Ⅳ胶原酶,分别于各时间点处死大鼠取脑组织,采用免疫组织化学染色,检测各组大鼠脑出血周围HSP70、Bax、Bcl-2蛋白的表达并进行统计学处理。结果 HSP70、Bcl-2、Bax含量脑出血组较假手术组均明显增高(P<0．01)。HSP70表达在6h出现,3d达高峰,7d表达减少。Bc-2的表达在6h出现,在1d时达高峰,第2天维持在高表达状态,随后表达逐渐减少。Bax的表达分别在12h和3d达高峰,在1d时表达呈下降趋势,第7天表达逐渐减少。结论 HSP70高表达对出血脑组织具有明显的保护效应,其促进脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白Bax表达,增加Bcl-2／Bax比率,以此抑制脑组织细胞凋亡,从而发挥其对神经细胞的保护作用。     

补体C3mRNA在大鼠脑出血模型中的表达及眼镜蛇毒因子对其表达的影响

目的 探讨补体C3在实验性大鼠脑出血(CH)急性期的作用机制,研究补体C3在CH后脑水肿中的作用以及应用眼镜蛇毒因子(CVF)干预后对血肿周围组织C3mRNA表达及脑组织含水量的影响.方法 采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备CH 模型,将雌雄各半SD大鼠分为假手术组、常规CH组和CVF干预组,于制模后3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d 和7 d 7个时间点处死动物,用干湿重法测量脑含水量(BWC); RT-PCR法检测补体C3mRNA的表达水平.结果 CH后C3mRNA表达从6 h开始出现增强,3 d时达高峰,血肿周围脑组织含水量在CH后3 h开始增加,3 d时达高峰(P＜0.05),此后逐渐回落,7 d时基本恢复正常水平,脑组织含水量与C3mRNA的表达呈正相关(r=0.758,P＜0.05);经CVF干预后,血肿周围组织C3mRNA表达明显下降,干预组与常规CH组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05).CVF干预组脑组织含水量明显低于常规CH组(P＜0.05).结论 脑出血后补体系统激活,C3mRNA表达明显增加,通过CVF干预后,C3mRNA表达下降,脑水肿减轻,能达到神经保护作用.     

糖皮质激素对脑出血大鼠脑水肿的TNF-α影响研究

目的：探讨糖皮质激素地塞米松对大鼠脑出血后脑水肿的影响以及对TNF-α、TRADD、Caspase3、神经细胞凋亡的影响。方法：采用胶原酶注入法制作大鼠ICH模型;将制模成功的大鼠分为ICH组和地塞米松治疗组（治疗组）,另设假手术组（对照组）,每组36只;各组大鼠分别在造模后12h、1d、3d断头取脑组织检测脑水含量以及TNF-α、TRADD、Caspase3的蛋白表达,并进行TUNEL染色。结果：ICH组在12h、1d、3d脑水含量、TNF-α、TRADD、Caspase3蛋白表达以及凋亡指数均高于对照组（P〈0.05）;治疗组在上述时间点的各项指标均低于ICH组（P〈0.05）。结论：地塞米松可降低ICH模型大鼠脑组织TNF-α、TRADD、Caspase3表达及减少神经细胞凋亡。     

杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

【目的】探讨杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。【方法】分别取10日龄SD大鼠胫骨、股骨的骨髓,过滤离心后将所得BMSCs进行体外单层培养、扩增,采用DMEM培养基,37℃、体积分数5%CO2条件培养。在细胞达到80%～90%融合时,使用2.5 g/L胰酶消化传代。将传代细胞分别置于空白血清培养液(对照组)、杜仲水提取物含药血清及杜仲醇提取物含药血清培养液进行培养,观察细胞在3种条件下的形态、贴壁生长、增殖、集落等情况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法绘制生长曲线,比较3种培养条件下达到100%融合的时间。【结果】杜仲水提取物组、杜仲醇提取物组对大鼠BMSCs增殖的影响显著高于空白血清对照组(P<0.05),且杜仲醇提取物组作用优于杜仲水提取物组(P<0.05)。【结论】杜仲对大鼠BMSCs增殖具有一定促进作用。     

清热解毒法对脑出血大鼠的神经保护作用

目的：研究遵清热解毒法制成的脑宁康颗粒对脑出血大鼠脑组织的神经保护作用机制。方法：实验大鼠随机分为5组：假手术组、脑出血模型组、清热解毒组（1.2、2.4和4.8mg·kg^-1）,采用胶原酶Ⅶ诱导大鼠脑出血模型,术后2h,清热解毒组给予脑宁康颗粒灌胃,另2组给予等容量生理盐水,连续用药（1次/日）,分别在给药3d和7d后取脑组织,应用HE染色观察大鼠脑组织病理形态学改变,应用免疫组织化学法检测脑出血周围脑组织凝血酶受体（PAR^-1）的表达,干湿比重法检测脑组织水肿。结果：脑宁康颗粒能够明显改善脑出血大鼠脑组织病理形态学改变,抑制脑组织PAR^-1表达,减轻脑组织水肿。结论：脑出血后脑组织PAR-1表达增强,PAR-1高表达可能介导了神经细胞损伤和脑水肿,清热解毒法对脑出血大鼠的神经保护作用,可能与其抑制脑出血后脑组织PAR-1表达和减轻脑水肿相关。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的BMSCs移植对脑出血大鼠TrkA表达的影响

目的：观察GDNF基因修饰的BMSCs移植对脑出血大鼠TrkA表达的影响。方法：通过脑立体定位仪向SD大鼠脑尾壳核注射胶原酶和肝素建立脑出血动物模型,并随机将大鼠分为生理盐水组、BMSCs组和BMSCs/GDNF组,各组又根据细胞移植后再喂养时间的不同（1w、2w）分为2个亚组。在脑出血第3d分别注射生理盐水和移植BMSCs及BMSCs/GDNF。采用免疫组织化学和Western blotting方法检测TrkA在大鼠脑组织内的分布与表达水平。结果：免疫组化显示TrkA阳性细胞主要分布于出血灶周边的纹状体、大脑皮质和下丘脑等区域;与生理盐水组相比,BMSCs组在1w和2w时TrkA免疫阳性产物表达明显增高;而BMSCs/GDNF组的TrkA免疫阳性产物表达在1w和2w时均显著高于BMSCs组和生理盐水组。Westernblotting检测也显示出BMSCs/GDNF组的TrkA蛋白表达在1w和2w时均明显高于BMSCs组和生理盐水组。结论：GDNF基因修饰的BMSCs移植能增强TrkA的表达,有利于改善病灶部位及周边区微环境,促进神经组织重塑。     

针刺对CCS大鼠交感颈中心神经电活动的影响

目的:观察针刺对CCS大鼠交感颈中心神经电活动的影响,探讨CCS发病的交感通路机制以及针刺对其干预的作用机制。方法:选取健康Wistar大鼠60只,随机选择其中10只作为假手术对照组,其余用于大鼠CCS复制,然后根据模型成功的评判标准,随机选取模型复制成功的大鼠20只,再分为模型组和电针组,每组各10只。待电针组大鼠清醒后将其放入固定器中,75%乙醇无菌操作人中、风府、内关、心俞,选用1寸毫针,直刺4~6mm,并连至PCE-A型程控电针治疗仪,电压为5V,频率为2Hz,每次20min,每天1次,连续3天。假手术对照组及模型组大鼠均不予针刺,每天抓空1次。于实验72h后采用Biopac生物信号采集系统记录3组大鼠交感颈中心神经电活动。结果:模型组72h后,大鼠交感颈中心神经放电频率与假手术对照组比较,差异有显著性(P<0.01);电针组与假手术对照组比较,差异有显著性(P<0.05);电针组与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:交感神经系统兴奋性降低可能参与CCS的发生发展,给予针刺早期干预(防治)可调节心交感神经兴奋性,拮抗发生CCS时大鼠心交感神经兴奋性的降低,这可能是针刺防治CCS的作用机制之一。