KSHV信号膜蛋白K15的致病机制

人类疱疹病毒-8(HHV-8)是卡波西肉瘤(KS)的致病因子,又被称为卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)。KSHV编码的信号膜蛋白K15通过与宿主细胞蛋白的相互作用激活多种细胞内信号通路,诱导血管生成和炎症反应。对K15蛋白的基本作用机制,包括其直接和间接介导的细胞信号通路的研究有助于深入了解K15蛋白在KS发病机制中的潜在作用,也对该病的靶向治疗有重要的参考价值。     

安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究

目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检测的1 008份血样中,KSHV抗体的总阳性率为4.3%,其中男为3.9%,女为4.6%。统计学分析结果显示,KSHV感染率没有性别差异,在年龄上也基本无差异。结论在中国安徽北部地区的普通人群KSHV的感染率较低,且KSHV的感染与年龄及性别之间无明显相关性。     

230例健康献血者卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染的血清学检测

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcomaassociated herpesvirus，KSHV)又称人疱疹病毒8型(HHV-8)，是1994年美国学者Chang等首先从AIDS患者卡波氏肉瘤(KS)组织中发现的一种新的肿瘤病毒，目前被认为是KS的致病因子。KS是AIDS患者最易患的一种血管瘤，在AIDS患者中的发病率可高达50％。后来的研究表明，KSHV与多中心性卡斯特莱曼病、原发渗出性淋巴病等多种疾病有关。另外，流行病学研究表明，     

KSHV潜伏和裂解感染机制的研究进展

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是卡波氏肉瘤(kapois's sarcoma,KS)的病原,并与PEL、MCD等多种淋巴增殖紊乱性疾病相关。其生命周期可分为潜伏感染和裂解感染两个阶段。在潜伏感染阶段,KSHV的病毒基因表达受到严格调控,只有少数病毒潜伏相关基因的持续表达,潜伏感染对病毒长期持续感染复制是必不可少的。在裂解复制阶段,病毒基因绝大部分复制表达,并包装产生新的感染性病毒颗粒。现就KSHV病毒潜伏感染和裂解感染机制的研究进展作一综述。     

卡波氏肉瘤病毒K1蛋白在血管内皮细胞中的表达及其功能初探

目的:获得稳定表达卡波氏肉瘤病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)K1蛋白的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),探究K1蛋白对HUVECs增殖和迁移能力的影响?方法:从本实验室已构建好的含KSHV K1基因的重组真核表达质粒pCI-neo-K1中扩增出K1基因,克隆入慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZs-Green中构建重组质粒pHAGE-K1?利用脂质体将pHAGE-K1与包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,收集培养上清经0.45 μm滤膜过滤即获得慢病毒悬液?病毒感染HUVECs,Western blot检测K1蛋白的表达?通过绿色荧光蛋白进行流式分选?Western blot验证获得稳定表达K1蛋白的HUVECs?通过细胞增殖实验和细胞划痕实验检测K1蛋白对HUVECs增殖和迁移能力的影响?结果:核酸序列测定证实,克隆的K1基因全长906 bp,与GenBank中登记的K1基因100%同源?Western blot结果显示,含K1基因的重组慢病毒感染的HUVECs在约46 000处可观察到一特异性条带,与预期的K1蛋白大小一致?流式分选获得稳定表达K1蛋白的HUVECs,其增殖能力与对照组相比显著增强(P < 0.01),细胞迁移能力亦明显增加(P < 0.05)?结论:成功包装了含KSHV K1基因的重组慢病毒?KSHV K1蛋白能够促进HUVECs增殖和迁移?     

卡波济肉瘤相关疱疹病毒体外感染人牙龈成纤维细胞初探

目的:探索卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)体外感染人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)的途径和方法,为研究KSHV导致口腔卡波济肉瘤病变的机制提供依据。方法:用12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,PEL)细胞系的BC-3细胞,收集细胞上清(含KSHV病毒颗粒),感染HGF细胞。观察细胞病变效应(cytopatric effect,CPE),采用RT-PCR和Western blot分别检测HGF细胞内KSHV编码基因的转录情况和蛋白表达水平。结果:KSHV感染HGF细胞后可出现CPE;感染后采用RT-PCR可检测到不同时间点ORF26和ORF73基因的转录;感染后12 h可检测到vIL-6蛋白的表达。结论:KSHV可感染HGF细胞并建立潜伏感染,为进一步研究KSHV导致的口腔KS发病机制提供了较好的体外模型。     

卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA的克隆及在真核细胞中的表达

目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达。方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5’端分别引入BamHI和XhoI酶切位点。以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增KSHVK8.1B编码序列,经双酶切后克隆进pcDNA3.1( )载体中,构建含K8.1BcDNA的重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后转染人胚肾293细胞,经G418筛选获细胞克隆。用间接免疫荧光染色(IFA)检测K8.1BcDNA编码蛋白在293细胞中的表达状况。结果:RT-PCR分离、克隆的K8.1BcDNA全长501bp,核酸序列分析显示,该基因与Genbank中已登记的K8.1B编码基因呈现100%同源性。经IFA证实该重组蛋白为KSHVK8.1B特异性蛋白。结论:KSHV包膜糖蛋白K8.1B编码cDNA在293细胞中获得了正确表达。     

大仓鼠携带汉坦病毒全S、部分M核苷酸序列特征分析

目的测定从仓鼠亚科宿主动物大仓鼠肺中分离到的汉坦病毒的全S、部分M基因片段的核酸序列,明确其型别。方法RT-PCR方法扩增,连接入PMD-18T载体,转化至JM109宿主菌。阳性质粒进行测序分析。结果YU62株S基因全长1701nt,有一个完整的ORF,起始位置为37 nt,终止于1326 nt,编码N蛋白429个氨基酸。与HTN-A16株核苷酸、氨基酸同源性最高分别为99.1%,99.3%。M片段克隆出1272 bp,核苷酸与HTN-SN7有85.6%的同源性。从S片段种系发生树分析来看,YU62归于HTN型H4亚型。从M片段(265-624 bp)种系发生树分析来看YU62株属于HTN的一个新亚型。结论仓鼠携带的汉坦病毒S、M片段进化不平行,YU62可能是在大仓鼠体内发生重排的HTN的新亚型。     

KSHV包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A和gL的克隆及真核表达

目的:克隆并在293T细胞中表达卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白编码基因K8.1、K8.1A与gL.方法:以BCBL-1细胞总DNA为模板,用PCR方法扩增出K8.1和gL基因;以BCBL-1细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出K8.1A基因.将PCR产物克隆进真核载体pcDNA3.1( )内,分别构建含K8.1、K8.1A和gL基因的重组真核表达质粒.重组质粒转染293T细胞,用Western blot的方法检测K8.1和K8.1A在293T细胞中的表达;RT-PCR方法检测gL基因在293T细胞中的转录.结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的K8.1、K8.1A和gL基因与GenBank中已登记的KSHV K8.1、K8.1A和gL基因序列100%同源.Western blot结果显示,在约35 ku位置有目的条带,与预期的重组K8.1和K8.1A蛋白大小一致.RT-PCR结果显示约在500 bp位置检测到特异性条带.结论:KSHV K8.1、K8.1A和gL编码基因在293T细胞中获得正确表达.