产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药率及同源性分析

目的分析耐碳氢酶烯肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学特征。方法收集2018年1-8月临床分离出的14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌,使用VITEK Compact微生物系统进行菌株鉴定和药敏试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR试验检测耐药基因,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）分析菌株同源性。结果14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌对青霉素类、碳青霉烯类、氨曲南和头孢菌素类等抗菌药物表现出较高的耐药性。11株肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶表型阳性,PCR检测发现12株肺炎克雷伯菌KPC-2基因阳性,14株肺炎克雷伯菌根据ERIC-PCR结果分成3型,其中A型为主,集中在ICU病房和神经外科。结论耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌表现为严重的多重耐药性,以产生KPC酶和A型为主。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的了解铜陵市人民医院分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药基因型。方法收集2011年5月至2016年8月铜陵市人民医院临床标本中分离的CRKP,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM)和bla_(OXA-48)),并对各碳青霉烯酶基因阳性扩增产物进行基因测序。结果共收集CRKP 90株,其中改良Hodge试验阳性84株(93. 3%),51株(56. 7%)携带blaKPC-2基因,2株(2. 2%)携带bla_(IMP-4)基因,1株(1. 1%)携带bla_(VIM-1)基因。结论该院肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的主要耐药机制是产KPC-2型碳青霉烯酶。     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

耐碳青霉烯类药物的肠杆菌科细菌的检测与耐药性分析

目的:了解临床分离的大肠、肺炎菌的产KPC酶和MBL酶的情况及耐药原因分析,为控制院内感染,合理使用碳青霉烯类抗生素提供实验依据。方法:收集多种耐药的肺炎克雷伯菌39株,大肠埃希菌11株,采用K-B法进行药敏试验,用改良Hodeg实验进行KPC酶表型检测,Etest试验进行MBL酶检测,并分析其结果。结果:50株病原菌MBL检测全阴性。Hodge实验28株病原菌阳性,其中大肠埃希菌10株,肺炎克雷伯菌18株。结论:耐碳青霉素烯类药物的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药机制复杂,存在一种以上耐药机制。为避免耐药菌在院内引起流行,临床应根据药敏结果合理使用抗生素,实验室应加强耐药菌检测。     

丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的明确丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征,为临床抗感染治疗提供实验依据。方法收集2011年3月至2015年10月丽水市中心医院分离的碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌（CR-KP）。采用Vitek2-compact系统鉴定菌株并联合纸片扩散法（K-B法）检测其药敏,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;PCR法扩增KPC基因,测序后利用BLAST比对确定基因型;肠杆菌科基因间重复序列分型法（ERIC-PCR）联合多位点序列分型（MLST）鉴定菌种同源性;进而探讨产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征。结果共收集到70株CR-KP,其中68株改良Hodge试验阳性,扩增产物测序结果均为blaKPC-2基因。ERIC-PCR结果显示,70株KPC型肺炎克雷伯菌分为A、B、C、D、E5个克隆群分别为63株(90.0%)、3株、2株、1株、1株;MLST分成6个ST型,其中ST11型63株（90.0%),ST35型2株,ST1型2株,ST592、ST1883、ST494型均1株。结论丽水市中心医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的主要克隆群为ST11型,是我院流行感染的主要原因。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析

目的研究六安市人民医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药基因及同源性。方法收集2018年4-6月分离自临床标本的肺炎克雷伯菌40株,用法国梅里埃VITEK 2 COMPACT全自动细菌鉴定药敏仪进行鉴定和药敏。采用改良Hodge试验（MHT）和改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）对40株菌进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用PCR方法检测其是否携带已知的主要碳青霉烯耐药基因KPC、OXA-48、NDM-1。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对其进行同源性分析。结果40株CRKP多分离自ICU病房（占55%）,以呼吸道来源标本为主（占80%）,对常用抗生素头孢菌素类、氨基糖苷类以及大环内酯类的耐药率均在80.0%以上。MHT和mCIM试验中有33株菌二者均为阳性,2株菌均为阴性,剩下5株MHT试验阳性而mCIM试验结果为阴性。32株菌携带KPC基因,未检出OXA-48及NDM-1基因。同源性分析结果显示40株CRKP分为7个型别,其中A型34株（占85%）,B、C、D、E、F及G型各1株（各占2.5%）。结论分离的CRKP以携带KPC-2基因为主,共有7个型别,以A型为主,为有效治疗和预防CRKP感染提供了参考依据。     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性检测及变迁

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的流行及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用BD Phoenix 100全自动细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法测定病原菌的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶和Etest MBL确认纸条法表型筛查金属-内酰胺酶。结果近3年临床肺炎克雷伯菌检出株数并无明显变化,但改良Hodge试验阳性株检出率逐年增加,金属-内酰胺酶阳性株检出率也逐年增加。耐碳青霉烯类菌株对大多数抗生素的耐药率较高且逐年上升,但对氨基糖甙类抗生素的敏感性尚可。结论产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药情况日益严重,应加强院感的监测和预防。     

我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌感染特点及碳青霉烯酶基因型分析

目的 研究丽水市中心医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。 方法 收集2011年3月—2015年12月期间丽水市中心医院共140株CRE的临床资料并分析,Vitek 2-Compact鉴定细菌,K-B纸片法进行药物敏感性试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,PCR扩增常见的碳青霉烯酶基因KPC、IMP、VIM、NDM和OXA-48。 结果 140株CRE以肺炎克雷伯菌为主(占70.71%),其次为产气肠杆菌(占6.44%)和阴沟肠杆菌(占5.71%)。标本来源以痰液为主(占69.29%),其次为尿液(占12.86%)、分泌物和血液(均各占4.29%)。临床科室分布以重症监护室为主(占44.29%),其次为神经外科(占18.57%)和血液内科(占5.00%)。药敏结果提示CRE对大部分β内酰胺类药物高度耐药,耐药率>80%,对米诺环素、阿米卡星的耐药率分别为14.78%和35.43%。改良Hodge试验有127株阳性(阳性率为90.71%)。PCR扩增及基因测序比对结果提示99株携带KPC-2基因,14株携带IMP-4基因,2株携带IMP-1基因,13株携带NDM-1基因。 结论 CRE对多种抗菌药物高度耐药,耐药基因以KPC为主,其次为IMP和NDM,临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。      

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究

目的 对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因的携带情况与分子流行病学特征进行分析,为研究细菌耐药提供参考依据.方法 收集2016年2月至2017年2月临床分离到的37株CRKP菌株,采用微量肉汤稀释法检测菌株药物敏感性;改良霍奇实验及亚胺培南-EDTA协同法检测碳青霉烯酶表型;PCR检测KPC-2、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因,进行测序及网上比对确定基因型;采用多位点序列分型(MLST)对菌株进行遗传相关性研究,MEGA软件构建进化树、eBURST软件分析亲缘关系.结果 37株菌株对常用抗菌药物耐药性均在90％以上.所有菌株均检测到KPC-2基因,3株同时携带NDM-1基因,其余基因均为阴性.MLST分型为ST11有25株,ST524 2株,ST789 4株,ST35、ST29、ST1066及ST244各1株,另外有1个新的ST型(2株)已被PubMlst数据库确认收录并命名为ST2792.ST11型组及非ST11型组在年龄、性别、感染途径、抗菌药物使用情况等方面差异无统计学意义(P＜0.05).结论 携带KPC-2基因是导致细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因,ST11型是最流行的克隆型.     

长沙地区临床分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的分子流行病学特征

目的: 了解长沙地区临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性,探讨碳青霉烯类抗生素耐药菌株的分子流行病学特征。方法: 收集长沙地区10所综合性医院2010年3月至2010年12月间临床分离的非重复鲍曼不动杆菌株205株;采用K-B法检测药物敏感性,改良双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶(金属酶),改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;PCR扩增OXA-23,OXA-24,OXA-51,OXA-58及IMP-1和VIM-2型碳青霉烯酶基因,并进行测序分析。应用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR,ERIC-PCR)对菌株进行DNA分型及同源性分析。结果: 在监测的18种药物中,耐药率超过50%的达14种。其中哌拉西林耐药率最高(80.5%),头孢哌酮/舒巴坦耐药率最低(2.5%)。共筛选出耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌115 株,其金属酶表型及基因检测均为阴性;改良Hodge试验阳性71株,其中64株OXA-23基因扩增阳性。115株菌株OXA-51均阳性,未检出OXA-24,OXA-58基因。115株菌株共分为7个ERIC基因型。其中A型19株,B型72株,为主要的流行克隆。结论: 长沙地区临床分离鲍曼不动杆菌多重耐药十分严重;产OXA-23 和OXA-51型碳青霉烯酶是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制,且碳青霉烯类耐药菌株存在克隆流行。     

亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌的耐药机制与分子流行病学研究

目的：了解亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌分子流行病学特点,研究鲍曼不动杆菌的耐药机制。方法：收集我院亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌（imipenem resistant acinetobacter baumannii, IRAB）共17株,E-test进行药敏试验,PFGE技术分析耐药菌株同源性,改良Hodge试验筛选产碳青霉烯类耐药菌株,PCR扩增bla基因并进行基因序列的测序和分析。结果：17株亚胺培南耐药型鲍曼不动杆菌分别来自病人痰液、伤口、血液标本,药敏检测发现17株菌具有多重耐药性,PFGE分析表明17株菌可分为A、B、C、D4个克隆型,其中A型包括A1和A2两个亚型,改良Hodge试验和PCR基因扩增证实17株菌均含OXA-23型基因。结论：产OXA-23型碳青霉烯酶是本研究中鲍曼不动杆菌对亚胺培南等碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。     

碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 探讨碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因携带情况.方法 收集242株临床分离的粘质沙雷菌,采用Vitek-2 Compact全自动微生物系统对其鉴定并进行药敏试验,筛选出对亚胺培南耐药18株、中介1株;再用K-B法检测19株细菌对厄他培南和美罗培南的药物敏感性,确认均为耐药;采用改良Hodge试验及EDTA协同试验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因blakpc、blanmc、blaimp、blagim、blavim、blaoxa-23及超广谱β-内酰胺酶基因blaveb、blaper、blatem、blashv、blactx-m-1、blactx-m-2、blactx-m-9,阳性结果进行DNA测序,BLAST比对确定基因型.结果 药敏结果显示,19株细菌对美罗培南、厄他培南、氨曲南、环丙沙星、头孢唑林、头孢曲松、头孢噻肟全部耐药,对亚胺培南18株耐药、1株中介;对阿米卡星全部敏感;对庆大霉素敏感率为57.9%;妥布霉素敏感率不到30%;对头孢替坦、头孢他啶、头孢吡肟敏感率均不足20%;左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦敏感率均不足10%;改良Hodge试验阳性18株,阴性1株;EDTA协同试验全部阴性;PCR扩增和DNA测序显示,7株含blakpc-2、6株含blactx-m-14、3株含blashv-11、2株含blashv-12、1株含blaoxa-23基因;19株细菌均未检出blanmc、blaimp、blagim、blavim碳青霉烯酶基因及blaveb、blaper、blatem、blactx-m-1、blactx-m-2超广谱β-内酰胺酶基因.结论 分离的碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌,耐药现象较为严重,主要携带blakpc-2型、blactx-m-14型耐药基因.     

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制

目的探讨碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制及其控制方法。方法常规细菌鉴定,药敏试验筛选CRE菌株．琼脂稀释法测定抗菌药对CRE菌株的MlC,改良Hodge试验与PCR检测碳青霉烯酶。结果CRE菌株标本分离率以尿液、痰液较高;药敏试验84．44％菌株对亚胺培南、美罗培南及厄他培南同时耐药;琼脂稀释法分离CRE菌株大多数以对碳青霉烯类高度耐药：改良Hodge检测93．33％菌株为碳青霉烯酶产生株;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶的灵敏度与特异度均明显高于PCR方法（P〈0．05）。结论细菌产生碳青霉烯酶是CRE菌株对碳青霉烯类药物耐药的主要机制之一,改良Hodge试验方法检测更为敏感。