淫羊藿素抗Aβ肽致大鼠原代培养神经细胞凋亡作用

目的:探索淫羊藿素(icaritin,ICT)对Aβ25-35肽致大鼠原代培养神经细胞的损伤保护作用及潜在机制。方法:制备d17胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,支持培养7d后,与ICT预孵育24h并加入Aβ25-35肽,作用72h后以细胞形态、MTT值、培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平作为细胞的损伤指标;并以线粒体膜电位(ΔΨm)改变作为凋亡早期指标,AO/EB染色差异作为凋亡后期指标。结果:0.1μmol·L-1ICT预孵育24h能显著改善10μmol·L-1Aβ25-35肽所致的原代培养神经细胞的损伤,MTT、LDH及形态学结果显示:ICT能提高Aβ25-35肽损伤神经细胞的存活率,JC-1染色结果显示:ICT能防止Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体ΔΨm下降,AO/EB染色结果显示:ICT能够改善神经细胞凋亡。结论:ICT经抗凋亡机制对Aβ25-35肽损伤大鼠原代培养神经细胞发挥保护作用。该作用与ICT干预Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体膜电位下降和核损伤有关。     

甘草甜素类药对化学损伤人肝细胞的保护作用比较

目的:研究4种(3类)甘草甜素药物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl_4)损伤培养人肝细胞(L-02)的保护作用及差异,筛选出疗效好的药物,指导临床应用.方法:培养L-02,用复方甘草酸单铵(Compound ammonium glycyrrhizin,CAG)、复方甘草酸苷(Compound glycyrrhizin,CG)、甘草酸二铵(Diammonium glycyrrihizinate,DG)和异甘草酸镁(Magnesium isoglycyrr hizinate,MI)分别进行保护,再经D-GalN或CCl_4处理.观察肝细胞生长状态、测定AST及LDH酶活力、测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量.从而评价CAG、CG、DG和MI对D-GalN和CCl_4损伤L-02细胞的保护作用.结果:浓度为1mg/ml时,CAG、CG、DG和MI均能显著抑制D-GalN和CCl_4所致的AST及LDH释放,提高细胞的存活率.其中CAG抑制D-GalN所致的AST效果显著优于CG、DG和MI(P＜0.05);CAG抑制CCl_4所致的AST及LDH释放的效果显著好于DG和MI;CG抑制D-GalN所致的AST和LDH释放效果显著(P＜0.05)好于MI.浓度为1 mg/ml的CAG、CG、DG和MI 4种药物均能显著抑制2种化学损伤细胞内的GSH降低,其中CAG效果最明显(P＜0.05).结论:1 mg/ml的CAG、CG、DG和MI 4种药物对D-GakN和CCl_4致人肝细胞损伤均有保护作用,其机制可能与抑制GSH降低相关.4种甘草甜素药物,CAG保护肝细胞效果最为显著,CG、DG和MI作用依次减低.     

The protective effects of 1,5-diCQA on PC12 cells with OGD/reperfusion induced injury.

目的 研究1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)对缺血再灌注诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤是否有保护作用.方法 用缺糖缺氧4 h/复氧24 h处理PC12细胞作为PC12细胞缺血再灌注的体外模型,实验分为4组:空白对照组、1,5-diCQA (50 μmol/L) 对照组、缺血再灌注组、1,5-diCQA(50 μmol/L)+缺血再灌注组.应用酶标仪测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,荧光显微镜观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)含量、线粒体膜电位水平.结果 PC12细胞经缺血再灌注损伤后,与空白对照组比较,细胞LDH释放量及ROS含量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05);1,5-diCQA+缺血再灌注组与缺血再灌注组比较,细胞LDH释放量及ROS含量明显降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05);1,5-diCQA对照组与空白对照组比较,以上3项指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 1,5-diCQA通过减轻氧化应激、保护线粒体功能,减轻缺血再灌注诱导的PC12细胞损伤.     

人参首乌方对缺氧复氧诱导的皮质神经细胞凋亡的影响

目的 探讨人参首乌方(RSSW)降低缺血性脑损伤、保护神经元的作用及机制.方法 原代培养大鼠皮质神经元,Na2 S2 O4造成缺氧/复氧损伤模型,分为正常组、模型组、依达拉奉阳性药组、RSSW高、中、低剂量组,通过Hoechst 33258染色及流式细胞术测定细胞凋亡率,生化测定细胞内内源性超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)、过氧化产物丙二醛(MDA)和线粒体膜电位(MMP)及细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测细胞内凋亡蛋白Caspase-3,9的活力,Western blot检测其抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结果 RSSW能升高细胞SOD活性,提高GSH及MMP水平,减少细胞内ROS、MDA生成和LDH漏出,抑制Caspase-3,9的活性,具有显著的抗氧化活性,上调Bcl-2蛋白的表达,剂量依赖性抑制神经细胞元凋亡.结论 RSSW对氧化应激损伤诱导的神经细胞凋亡有保护作用,其机制可能与其增加细胞内源性抗氧化剂、改善Bcl-2蛋白的表达及抑制Caspase-3和Caspase-9的活性相关.     

Ghrelin对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞线粒体损伤和细胞凋亡的影响

目的 观察Ghrelin能否保护人神经母细胞癌细胞(SH-SY5Y细胞)抵抗6-OHDA所致的线粒体损伤和细胞凋亡.方法 培养SH-SY5Y细胞,随机分为对照组、Ghrelin组、6-OHDA组和6-OHDA+Ghrelin组.通过6-OHDA处理SH-SY5Y细胞构建帕金森病(Parkinson's Disease,PD)体外模型.Ghrelin预处理后,CCK-8法观测细胞活力,乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法观察细胞毒力,JC-1染色观察线粒体膜电位(ΔΨm),BCL-2/Bax比例检测观察细胞凋亡.结果 与对照组相比,6-OHDA组细胞活力下降,细胞毒力增加,ΔΨm以及BCL-2/Bax比例下降(均P<0.05);Ghrelin预处理后,与6-OHDA组相比,6-OHDA+Ghrelin组细胞活力上升,细胞毒力降低,ΔΨm以及Bcl-2/Bax比例增高(均P<0.05).结论 Ghrelin预处理可以保护SH-SY5Y细胞抵抗6-OHDA所致细胞损伤,具有线粒体保护功能,减少细胞凋亡.     

悦肝胶囊对原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究悦肝胶囊对四氯化碳(CCl4)损伤体外培养大鼠肝细胞的保护作用.方法:采用CCl4诱导大鼠肝细胞损伤模型,观察悦肝胶囊对肝细胞的琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性和糖原含量的影响.结果:悦肝胶囊能显著提高SDH、G-6-Pase活性及糖原含量(P<0.001),显著抑制ACPase活性(P<0.001).结论:悦肝胶囊对CCl4损伤体外培养大鼠肝细胞具有保护作用.     

红参皂苷Rg3对1-甲基-4-苯基吡啶离子所致神经细胞氧化应激损伤的保护作用

[目的]探讨红参皂苷提取物Rg3对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)所致神经细胞氧化应激损伤的保护作用.[方法]取SH-SY5Y细胞株培养1d后加入1,5,10mg/L红参皂苷Rg3,4h后加入MPP+培养20h.利用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)及细胞内活性氧族(ROS)水平.[结果]与MPP+单独处理组比较,红参皂苷Rg3各剂量组的SH-SY5Y细胞损伤得到明显改善,ROS荧光强度值明显降低,ΔΨm荧光强度值明显升高,酪氨酸羟化酶表达水平明显升高(P<0.05).[结论]红参皂苷Rg3对MPP+诱导的细胞氧化应激具有保护作用.     

艾纳香二氢黄酮对脂质过氧化损伤大鼠原代培养肝细胞的保护作用

研究 5种艾纳香二氢黄酮类化合物对过氧化损伤的原代培养肝细胞的保护作用。胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞。以 CCl4或 Fe SO4 Cys损伤原代培养肝细胞 ,1× 10 - 4 和 1× 10 - 5 mol/ L 的 5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及 GSH耗竭。其中以 2 ,5 -二羟基艾纳香二氢黄酮的作用最强 ,在 CCl4所致肝细胞损伤实验中 ,其抑制 MDA产生的 ED5 0 约为 2 .6× 10 - 6 mol/ L ,保护 GSH的 ED5 0 约为 1.0 8× 10 - 5 mol/ L ,抑制 AL T逸出细胞的 ED5 0 约为 9.39× 10 - 6 mol/ L     

1,5-二咖啡酰奎宁酸在肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺血再灌注损伤中的作用

目的研究1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)对缺血再灌注诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤是否有保护作用。方法用缺糖缺氧4 h/复氧24 h处理PC12细胞作为PC12细胞缺血再灌注的体外模型,实验分为4组:空白对照组、1,5-diCQA(50μmol/L)对照组、缺血再灌注组、1,5-diCQA(50μmol/L)+缺血再灌注组。应用酶标仪测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,荧光显微镜观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)含量、线粒体膜电位水平。结果 PC12细胞经缺血再灌注损伤后,与空白对照组比较,细胞LDH释放量及ROS含量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05);1,5-diCQA+缺血再灌注组与缺血再灌注组比较,细胞LDH释放量及ROS含量明显降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05);1,5-diCQA对照组与空白对照组比较,以上3项指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 1,5-diCQA通过减轻氧化应激、保护线粒体功能,减轻缺血再灌注诱导的PC12细胞损伤。     

人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ25-35致原代大鼠皮层神经元凋亡

目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25-3510μmol/L模拟阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)脑组织局部微环境。孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系。采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(ΔΨm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡。Rg1预处理能对抗Aβ25-35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20μmol/L)活性最强。Aβ25-35处理24 h能降低神经元的线粒体ΔΨm,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspase 3和caspase 9,从而引起神经元凋亡。而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗。结论:Rg1在1μmol/L至20μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联。     

氧化苦参碱对四氯化碳损伤大鼠肝细胞的保护作用

目的 :研究氧化苦参碱对肝细胞的保护作用。方法 :采用原代肝细胞培养的方法 ,选用CCl430mmol/L制备肝损伤模型 ,同时加以不同浓度的氧化苦参碱以保护肝细胞 ,培养 12h后以MTT法测细胞存活率 ,并测定培养基中AST、ALT、LDH。结果 :氧化苦参碱对肝细胞的保护呈剂量依赖性 ,氧化苦参碱组细胞存活率明显高于CCl4损伤组 (98.3% /3.2 % ,P <0 .0 5 ) ;其AST、ALT、LDH较CCl4损伤组明显降低 (依次为 6 .13± 0 .4 4 /896 .87±13.2 3、2 1.5± 0 .76 /15 0 2 .13± 35 .80、19.5± 0 .6 8/2 87.38± 5 .79,均P <0 .0 5 )。结论 :氧化苦参碱对CCl4损伤的肝细胞具较好的保护作用 ,存在最佳剂量性关系。     

牛磺酸和支链氨基酸对大鼠肝细胞氧化损伤的保护作用

①目的　探讨牛磺酸和支链氨基酸对CCl4致大鼠体外肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。②方法　实验分为对照组、损伤组、牛磺酸 (Tau)组、牛磺酸和支链氨基酸 (T&B)组。用 1 0、2 0mmol/LCCl4诱导大鼠体外肝细胞过氧化损伤 ,并以 1 .5 0mmol/LTau和按一定比例混合的T&B复合物 0 .75 g/L进行肝细胞保护。测定孵育液中谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶 (AST)活性及丙二醛 (MDA)含量。③结果　以 1 0mmol/LCCl4诱导肝细胞损伤时 ,Tau和T&B均能降低血清ALT、AST活性 ,减少MDA生成 ,与损伤组相比有显著差异 (F =4 .4 4 5～1 4 .0 71 ,q =3.82 5～ 4 .6 72 ,P <0 .0 1 )。以 2 0mmol/LCCl4诱导肝细胞损伤时 ,T&B能降低血清ALT、AST活性 ,减少MDA生成 ,与损伤组相比有显著差异 (q =4 .933～ 6 .0 0 1 ,P <0 .0 1 ) ,而Tau只能降低ALT、AST活性 (q =5 .6 0 3、5 .986 ,P <0 .0 1 ) ,但对MDA的生成影响不大 (q =1 .879,P >0 .0 5 )。 ④结论　牛磺酸和支链氨基酸对CCl4所致的肝细胞损伤具有保护功能 ,其保护作用可能是通过抗脂质过氧化作用实现的。     

相思藤总黄酮对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及机制

目的 研究相思藤总黄酮(XSTF)对四氯化碳(CCl4)、对乙酰氨基酚(AP)和D-半乳糖胺(D-GalN)所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 分别以CCl4、AP和D-GalN诱导小鼠急性肝损伤为模型,检测其血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)的含量,观察XSTF对急性化学性肝损伤的影响.结果 XSTF明显降低CCl4、AP及D-GalN所致急性肝损伤小鼠的AST、ALT活性,并呈现明显的量效关系;XSTF能显著提高肝组织中SOD、GSH和GSH-PX含量,并显著降低MDA含量(P＜0.05).结论 相思藤总黄酮对小鼠急性化学性肝损伤具有一定的保护作用,可能与其清除自由基,抑制脂质过氧化有关.     

肝细胞损伤模型中银杏内酯A保护机制及对Nrf2-抗氧化酶的影响

目的 探讨银杏内酯A对四氯化碳(CCl4)诱发的HepG2细胞损伤是否具有保护作用,并观察其对核因子E2相关因子2(Nrf2)调控的抗氧化酶的作用.方法 采用CCl4诱发HepG2细胞损伤,并予以不同剂量的银杏内酯A对其进行干预治疗,MTT法检测细胞活性,ELISA法检测细胞培养液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)浓度,并观察细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、丙二醛(MDA)、Nrf2、血红素氧合酶1 (HO-1)、谷胱甘肽(GSH)水平.进而采用PI3K/Akt、MAPK通路拮抗剂干预,探索介导银杏内酯A发挥作用的上游通路.结果 与对照组比较,CCl4组HepG2细胞活性降低,细胞培养液AST、ALT浓度增加,细胞8-OHdG、MDA水平升高(P＜0.05).而与CCl4组比较,银杏内酯A可剂量依赖性的升高HepG2细胞活性,降低AST、ALT浓度,降低8-OHdG、MDA水平,同时显著升高Nrf2、HO-1、GSH水平(P＜0.05).此外,PI3 K/Akt拮抗剂LY294002与p38拮抗剂SB203580显著减弱了银杏内酯A对HepG2细胞的保护作用,并抑制了银杏内酯A对Nrf2、HO-1、GSH表达的上调作用(P＜0.05).结论 银杏内酯A对CCl4诱发的HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制之一可能与通过PI3K/Akt、p38通路上调Nrf2、HO-1、GSH表达、抑制氧化应激反应有关.     

甘薯黄酮对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用

目的研究甘薯黄酮对CCl4所致肝细胞损伤的保护作用及其初步作用机制。方法体外培养人正常肝细胞株HL7702,MTT法测定甘薯黄酮对HL7702细胞活性的影响;建立CCl4损伤肝细胞模型,测定甘薯黄酮对CCl4损伤肝细胞增殖活性、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化;琼脂糖凝胶电泳法检测甘薯黄酮对CCl4损伤肝细胞凋亡的影响。结果甘薯黄酮在一定剂量范围(1～1 000μg/ml)内对肝细胞无毒性,超过一定剂量(3 000μg/ml)时,具有细胞毒性;甘薯黄酮可以抑制CCl4所致肝细胞活性降低,能明显抑制CCl4损伤后ALT、AST、MDA水平的升高和SOD活性的减弱;400μg/ml甘薯黄酮能减轻CCl4所致的肝细胞凋亡。结论甘薯黄酮对体外培养正常人肝细胞株的安全剂量范围是1～1 000μg/ml。甘薯黄酮在安全剂量范围内能保护CCl4诱导的HL7702细胞损伤,减轻CCl4所致细胞凋亡。     

右旋儿茶素对四氯化碳或半乳糖胺引起原代培养大鼠...

The effects of d-catechin (d-CTC) on carbon tetrachloride- and d-galactosamine (d-Ga1N)-induced cytotoxicity in primary cultured rat hepatocytes were examined. After 1.5 h preincubation, d-CTC was added at doses of 0.1-5.0 mg/ml to culture medium together with 10 mmol/L CCl4 or 5 mmol/L d-GalN, respectively. GOT, GPT and LDH levels were measured 1.5 h after treatment. The results showed that d-CTC at doses of 0.6 to 5.0 mg/ml could protect the hepatocytes against the toxic effects of CCl4 and d-GalN. At the higher doses (2.5-5.0 mg/ml), d-CTC showed weak inhibition of LDH and GPT activities, but these did not influence its anti-hepatotoxic activity.     

精密肝切片技术方法学的建立

目的 :建立一种新的肝脏体外研究手段———精密肝切片技术 ,摸索最佳培养条件。方法 :利用国产振荡切片机 ,制备肝切片 ,建立培养系统 ,以乳酸脱氢酶外漏、谷胱甘肽含量、噻唑蓝还原能力、蛋白含量为指标 ,观察切片厚度、培养液pH值及培养时间对肝切片活力的影响 ;观察抗氧化剂谷胱甘肽 (GSH)、阿魏酸钠 (SF)对CCl4 损伤肝切片活力的影响。结果 :切片厚度 30 0 μm ,培养液pH7.0时 ,肝切片在 4h内活力维持良好。GSH可恢复CCl4 所致肝切片多项指标的变化 ,SF也有一定逆转作用。结论 :精密肝切片技术可用于肝体外研究。切片厚度 30 0 μm ,培养液pH7.0为最适切片与培养条件     

大豆磷脂脂质体对四氯化碳致培养肝细胞损害的保护作用

目的　观察不同浓度大豆磷脂脂质体对四氯化碳(CCl4)导致肝细胞损伤的保护作用。方法　采用终浓度为8mmol/L四氯化碳作用于培养的小鼠肝细胞3h ,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)以及细胞中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果　大豆磷脂脂质体可使由四氯化碳导致损伤的肝细胞培养液中的LDH释放明显减少(P <0 . 0 1) ,肝细胞中SOD含量明显升高(P <0 .0 1) ,MDA含量明显减少(P <0 . 0 1)。结论　大豆磷脂脂质体对四氯化碳致肝细胞损伤具有明显的保护作用。     

胡黄连提取物对四氯化碳或半乳糖胺损伤的原代培养大鼠肝实质细胞的作用

为研究胡黄连提取物对四氯化碳(CCI4）或半乳糖胺(D-GaIN）损伤原代培养大鼠肝实质细胞的保护作用。半原位酶分离法分离大鼠肝细胞。利用CC44或D-GaIN引起原代培养大鼠肝实质细胞损伤模型。以培养液中谷丙转氨酶(ALT）活性变化为指标。并采用MTT法对细胞活性和增殖进行检测。结果：胡黄连提取物能够增强受损肝细胞的活性和增殖能力。但不能显著降低CCI4或D-GaIN肝损伤模型ALT活性。