HPV18E7抗原B细胞表位的鉴定

目的：鉴定人乳头瘤病毒18型早期蛋白E7的B细胞优势表位的免疫原性。方法：根据亲水性方案、柔韧性方案、抗原指数方案及表面可能性方案预测分析抗原可能的B细胞优势表位肽,并探讨合成肽的免疫效果。结果：HPV18E715-22（LEPQNEIP）,E729-44（EQLSDSEEENDEIDGV）,E751-59（ARRAEPQRH）是可能的B细胞优势表位,其中,E729-44和E751-59可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高。结论：HPV18E729-44具有较强的免疫原性,为E7抗原B细胞优势表位。     

HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位的预测与鉴定

目的:初步鉴定人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-DRB1*0301限制性辅助T淋巴细胞(T-HelperCell)表位。方法:用SYFPEITHI软件预测HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位,候选表位分别命名为P1、P2、P3,以固相多肽合成技术合成,并运用HPLC进行纯化和质谱法(MS)鉴定。以密度梯度法分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC),合成肽刺激PBMC,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测淋巴细胞增殖活性,流式细胞仪分析细胞表型。结果:多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激PBMC后能够有效诱导CD4 T淋巴细胞增殖。结论:P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th细胞表位。     

HPV16嵌合型疫苗的构建及其免疫效应初探

目的 构建以碳末端锌指结构突变的E7基因为基础，融合HSP70的嵌合型DNA疫苗，检测其诱导的特异性T淋巴细胞增殖活性，初步评价此疫苗对HPV相关肿瘤的治疗作用。方法 利用PCR法定点突变E7基因碳末端的锌指结构，以其为基础融合热休克蛋白70，克隆入pcDNA．3．1-质粒构建嵌合型DNA疫苗。DNA测序，确认E7基因突变位点及DNA疫苗阅读框架。用脂质体法将pcd—E7-HSP转染A549细胞，经G418筛选后，提取RNA，RT—PCR检测E7基因表达。DNA疫苗免疫C57BL6小鼠。取其脾细胞与E7蛋白在体外共同培育，MTT法检测T淋巴细胞增殖活性。结果 E7基因突变位点及阅读框架均正确，E7基因可检测到表达。疫苗免疫后C57BL/6小鼠脾细胞增殖活跃。结论：E7基因锌指结构的突变及融合HSP70能够诱导特异性的细胞免疫应答。     

HPV18E7抗原T细胞表位的鉴定及CD4+T淋巴细胞的免疫反应

目的 初步鉴定人乳头瘤病毒(HPV)18型E7抗原的辅助T淋巴细胞(Th)表位及CD4+T淋巴细胞的免疫反应.方法 以免疫磁珠进一步分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)中的CD4+T淋巴细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用之前实验中已获得的3个HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位刺激外周血CD4+T淋巴细胞,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测CD4+T淋巴细胞增殖活性.ELISA方法分析表位刺激CD4+T淋巴细胞分泌的细胞因子.结果 多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激CD4+T淋巴细胞后能够有效诱导CD4+T淋巴细胞增殖,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),多肽P1 (HPV18 E780-94)刺激CD4+T淋巴细胞分泌IFN-γ,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位.     

HPV18E7抗原HLA-A2限制性CTL表位的初步筛选

目的:初步筛选人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为表位免疫原性鉴定提供靶肽.方法:采用超基序、多项式和量化基序方案相结合的方法,对靶抗原HPV18E7的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位进行预测,并应用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定.结果:分别预测出5条、1条和6条九肽表位,综合三种预测方案确定其中1条为候选合成表位,合成肽的纯度大于95%,经质谱分析合成肽的分子量测定值与理论值相符.结论:超基序、多项式和量化基序方案联合应用提高预测效率,避免了在研究HPV18E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,为后继的抗原表位的免疫原性的鉴定奠定了实验基础.     

HPV-6，11表位多肽疫苗对Balb／c小鼠体液免疫应答的实验研究

目的评估设计的人乳头瘤病毒HPV-6，11表位多肽疫苗的免疫原性，并探讨预防尖锐湿疣的可能性。方法采用以50pg／只的剂量在0、2、4周免疫Balb／c小鼠，于免疫后的2、4、6周采集血清测定抗体应答。结果首次免疫后的第2周，血清抗体均呈阴性：第4周表位多肽Ⅳ和Ⅰ组出现阳性，与阴性对照组具有显著性差异（P〈0．05）；第6周时，均出现阳性结果，Ⅲ和Ⅱ组与阴性对照组具有显著性差异（P〈0．05），而表位多肽Ⅳ和Ⅰ组与阴性对照组具有非常显著性差异（P〈0．01）。结论设计出的HPV-6，11表位多肽疫苗能够诱导产生免疫应答，可望对尖锐湿疣的预防提供积极有效的帮助。     

人乳头瘤病毒HPV16L1—E7C重组腺病毒载体的构建

采用ＰＣＲ方法,从ＨＰＶ１６型野毒株质业中分离出ＨＰＶ１６Ｌ１（５５５９－７１５１ｂｐ）、ＨＰＶ１６Ｅ７Ｃ（６８２－８５５ｂｐ）基因片段,采用ＰＣＲ产物的Ｔ－Ａ克隆法,将Ｌ１、Ｅ７Ｃ分别插入ｐＧＥＭ－ＴＥａｓｙ载体,构建克隆载体ｐＴＡＬ１、ｐＴＡＥ７Ｃ。ＢａｍＨ１、ＨｉｎｄⅢ酶切ｐＴＡＥ７Ｃ,Ｂｇ１Ⅱ、ＣｌａⅠ酶切ＰＴＡＬ１,回收Ｌ１、Ｅ７Ｃ片段,利用ＢａｍＨⅠ、Ｂｇ１Ⅱ酶切产竽相同粘末端的特点,     

HIV多抗原表位疫苗的构建

以CD8^＋的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和CD4’的辅助性T淋巴细胞（HTL）为介导的细胞免疫应答是有效地控制和清除包括HIV在内的多种病毒病原体的必备条件。因而，人们对于能够诱导CTL和HTL免疫应答的HIV-1疫苗的研究兴趣浓厚，使HIV疫苗很快由学术研究向商品开发和工业生产等领域过渡和延伸。     

HPV及其相关疫苗的研究进展

持续性的人乳头瘤病毒(HPV)感染是随后发展为宫颈癌的主要原因。在世界范围内,多种高致癌性HPV正在不断诱发包括宫颈癌在内的多种恶性肿瘤,并维持很高的发病率与病死率。近年来,针对HPV的预防性疫苗和治疗性疫苗的研制开发取得了巨大的进展。通过疫苗预防HPV的感染仍然是目前降低宫颈癌发病率较为经济有效的关键策略。目前,虽然预防性HPV疫苗在全球推广使用并取得显著效果,但仍存在一些不足,而且并无治疗性HPV疫苗上市。多种新型HPV疫苗研究为宫颈癌的进一步防治带来了希望。随着临床调查与研究的深入,低成本且安全有效的新型HPV疫苗备受关注。     

宫颈癌组织中HPV16E6、E7蛋白水平与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探究宫颈癌组织中16型人乳头瘤病毒E6蛋白(human papilloma virus type 16 E6 protein, HPV16 E6)、16型人乳头瘤病毒E7蛋白(human papilloma virus type 16 E6 protein, HPV16 E7)水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取行宫颈癌根治术87例患者的肿瘤组织、癌旁组织、正常宫颈组织标本进行研究,采用免疫组织化学法检测组织中HPV16 E6、HPV16 E7蛋白表达情况,并结合患者临床病理特征进行分析,采用Kaplan-Meier生存曲线比较患者3年生存情况,采用COX回归分析各项因素对患者预后的影响。结果 免疫组化结果显示肿瘤组织中HPV16 E6、HPV16 E7阳性率高于癌旁组织和正常组织(P<0.05); HPV16 E6及HPV16 E7蛋白阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(P<0.05);多因素分析显示HPV16 E6、HPV16 E7阳性是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论 HPV16 E6、HPV16 E7蛋白在宫颈癌组织中...     

Brd4在HPV E2蛋白转录调节中的作用

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)引起的宫颈癌患者日益增加,而HPV E2蛋白在宫颈癌发生和发展过程中起着重要作用,对其功能尚在研究中,本文就近年对Brd4在HPV E2蛋白转录调节中的作用研究作一综述.     

HPV致宫颈癌机制研究进展

人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）是一类无包膜的具有嗜上皮特性的双链DNA病毒,由核酸及衣壳蛋白构成,其基因组可分为早期编码区（E区）、晚期编码区（L区）和长控制区（LCR）,研究表明高危型HPV的持续感染与宫颈癌的发生密切相关,当HPV病毒感染机体后,其基因组可随机整合到宿主细胞DNA中,随后沉默E2基因的表达,削弱E2蛋白对E6、E7基因的抑制,使E6、E7蛋白过表达,辅以E5蛋白的表达,促使感染细胞永生化甚至癌变。因此研究HPV的病毒结构及其致病机制对防治HPV感染及预防HPV相关恶性肿瘤,尤其是宫颈癌的发生、发展尤为重要。本文拟就HPV的病毒结构、致病机制研究进展进行综述。     

HPV相关癌症治疗性疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)感染所致癌症大约占所有恶性肿瘤的4.5%~5.0%。其高危亚型的持续性感染与宫颈癌、阴茎癌、肛管癌及口咽部等多种恶性肿瘤的发生有关。HPV预防性疫苗虽然可以有效预防常见HPV亚型的感染,但不能覆盖所有高危亚型且对已发生的感染没有治疗效果。针对具有致癌潜力的HPV高危亚型,当前处于研发阶段的HPV相关癌症治疗性疫苗分为核酸疫苗(包括DNA疫苗、RNA疫苗)、肽类疫苗、蛋白质疫苗、活载体疫苗(包括细菌性活载体疫苗、病毒性活载体疫苗)和基于细胞的HPV治疗疫苗等。以上各类疫苗均已经进入了不同的临床试验阶段。尤其是活载体疫苗中的病毒性活载体疫苗,部分产品已经在Ⅲ期临床试验中取得了比较满意的治疗效果。本文对前述不同种类HPV相关癌症治疗性疫苗的研发进展进行了系统的综述。     

HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA在宫颈细胞学诊断分流中的应用

目的 比较人乳头瘤病毒(human papillomavirus; HPV)E6和E7 mRNA(E6/E7 mRNA)和HPV DNA检测在分流宫颈细胞学检查结果为意义不明确的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)患者中的应用价值。方法 选取2021年3月～2022年1月浙江省杭州市妇产科医院共300例液基细胞学诊断为ASCUS的就诊患者作为研究对象。其中150例ASCUS患者行HPV DNA二代杂交捕获(HC2)检测,另外150例ASCUS患者行HPV E6/E7 mRNA检测。300例均接受阴道镜活检和病理学检查,并以阴道镜活检的病理结果作为金标准,分析HPV DNA HC2检测以及HPVE6/E7 m RNA检测结果与宫颈病变病理分级的相关性。结果 150例ASCUS患者中HPV E6/E7 mRNA检测阳性122例,HPV DNA HC2检测阳性136例。HPV E6/E7 mRNA在ASCUS患者宫颈脱落细胞中的阳性率随宫颈病变程度增加而增加,且与宫颈病变病理结果密切相关(χ²=12.5,P=0.002)。与HPV DNA HC2检测相比,HPV E6/E7...     

HPV疫苗防治宫颈癌的研究进展

宫颈癌是国内外危及女性生命的高发肿瘤之一,其发病卒在女性恶性肿瘤中居第2位.子宫颈癌的病因学研究在80年代取得的显著进展,明确了人乳头瘤病毒与子宫颈癌病因学联系,HPV基因工程疫苗的研制成为近年来研究热点.而HPV疫苗研制的成功则是子宫颈癌防治研究的里程碑.     

喉鳞癌组织中HPV16、18E6和HPV16E7蛋白表达及其相关性研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型E6和E7蛋白与喉鳞癌发生的关系以及两种蛋白在致病过程中的相互关系。方法 :采用免疫组化SABC方法对 5 8例喉鳞癌 ,30例癌旁组织和 30例声带息肉进行检测。结果 :在喉鳞癌和癌旁组织中的E6蛋白的表达率分别为 31 0 % (18/5 8)和 2 0 0 % (6 /30 ) ;E7蛋白的表达率分别为 32 7%(19/5 8)和 2 0 3 % (7/30 )。声带息肉组中未见E6和E7蛋白阳性表达。E6和E7蛋白表达率在喉癌组与息肉组之间 ,有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间均有显著性差异 (P <0 .0 1)。E6和E7蛋白在喉鳞癌中的表达结果具有明显的相关性。结论 :HPV16、18E6和HPV16E7蛋白与喉鳞癌发生、发展关系密切 ,E6与E7蛋白在致癌过程中有协同作用     

HPV 58在宫颈癌组织中的感染分析及其转化基因的克隆

目的 分析中国陕西宫颈癌组织中HPV58的感染情况并克隆其E6、E7主要转化基因.方法 采用HPV GP5+/GP6+通用引物PCR 扩增58例宫颈癌组织DNA粗提物,继之将荧光偏振技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,应用探针杂交延伸反应检测HPV58.用特异性引物随机从1例 HPV58 阳性标本中PCK 扩增HPV58 E6、E7基因,将其分别与pGEM-T Easy载体连接,所获得的重组质粒经内切酶消化和测序鉴定.结果 58例宫颈癌标本中10例(17.24%)为HPV 58阳性,克隆获得的HPV 58 E6、E7重组质粒经BLAST分析证实分别含有HPV 58完整的E6、E7基因,与GenBank收录的标准株比较,E6、E7基因分别有5个和2个硷基发生变异,可导致相应的蛋白质氨基酸序列中分别有4个和1个氨基酸替换.结论 中国陕西人宫颈癌组织中HPV 58感染较为多见,且HPV 58 E6和E7转化基因的硷基序列与标准株有所差异.本研究为下一步HPV 58相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了基础.     

HLA-A2限制性CTL表位HPV18E7_(7-15)分子修饰肽的免疫原性鉴定

目的:对HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位HPV18E77-15进行氨基酸置换修饰,探讨修饰肽的免疫原性。方法:采用细胞毒实验(51Cr释放法),以包被了九肽的T2细胞作为靶细胞,以九肽诱导的HLA-A2阳性人外周血单个核细胞为效应细胞,观察目标肽是否具有诱导特异性CTL杀伤效应。结果:修饰肽符合HLA-A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结论:修饰肽具有较强的抗原性,可以作为高危型HPV感染治疗性肽疫苗分子设计的候选表位。     

HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用

目的通过检测同一宫颈上皮内癌变或宫颈癌疑似病例宫颈石蜡包埋样本及脱落细胞中HPV E6/E7 m RNA的水平,分析两种检测结果的差异,探讨二者在宫颈癌筛查的应用价值。方法对302例宫颈上皮内癌变或宫颈癌疑似病例分别取宫颈活检组织及脱落细胞,两类标本均采用b DNA技术进行HPV E6/E7 m RNA检测,同时行病理学检查,并对检测的阳性率及灵敏度、特异度做出统计学分析。结果石蜡包埋组织检测HPV E6/E7 m RNA的阳性率为48.7%,高于脱落细胞的阳性率40.1%(χ2=4.192,P<0.05)。石蜡包埋组织检测HPV E6/E7m RNA对诊断的灵敏度为75.0%,高于脱落细胞的61.4%(χ2=5.046,P<0.05);石蜡包埋组织检测HPV E6/E7 m RNA对诊断的特异度为81.2%,脱落细胞为77.1%,二者差异无统计学意义(χ2=0.641,P>0.05)。结论检测石蜡包埋样本中的HPV E6/E7 m RNA,可更加精确预测宫颈病变进展风险,对宫颈癌筛查工作具有更好的临床意义。