腹腔注射干扰素γ对哮喘小鼠肺组织GATA-3及气道炎症的影响

目的:研究腹腔注射IFNγ对支气管哮喘的防治作用及其机制. 方法:BALB/c小鼠随机分为三组,正常对照组(A组,12只)、哮喘模型组(B组,12只)、腹腔注射IFNγ组(C组,12只),B组、C组采用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝建立哮喘模型,分别于第23天至第30天每次激发前腹腔注射0.25 ml PBS液和IFNγ 5 μg,1次/d.第31天取肺泡灌洗液(BALF)测定细胞成分、IL-4、IL-5浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3的表达.结果:(1)C组BALF中的嗜酸粒细胞(EOS)(0.3±0.2)明显低于B组(21.1±6.7),P<0.01;(2)C组BALF中的IL-4(3.0±2.5)和IL-5(11.4±3.2)的水平明显低于B组的IL-4(90.5±22.4)和IL-5(55.6±10.7),P<0.01;(3)C组血浆中总IgE(24.3±7.6)和OVA特异性IgE(12.3±3.6)水平显著低于B组的IgE(67.2±9.7)和OVA特异性IgE(34.6±7.8),P<0.01;(4)H-E染色示B组支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有EOS为主的炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,支气管壁周围有EOS为主的炎性细胞浸润,而C组小鼠的上述炎性改变则明显减轻;(5)免疫组化显示B组肺组织中GATA-3的表达明显增加,而C组GATA-3的表达明显减少.结论:腹腔注射IFNγ可以抑制哮喘鼠IL-4、IL-5的合成、抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中总IgE和OVA特异性的IgE水平,其机制可能与IFNγ阻断GATA-3的表达,从而继发抑制Th2型反应有关.     

含鼠白细胞介素12基因腺病毒载体对小鼠支气管哮喘模型肺组织GATA-3表达的影响

目的：探讨含鼠白细胞介素12（IL-12）基因的腺病毒载体（AdCMVIL-12）对小鼠支气管哮喘模型GATA-3表达的影响。方法：BALB/c小鼠30只,随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和AdCMVIL-12实验组（C组），B和C组建立哮喘模型，并于第20天分别鼻内吸入50 μL生理盐水和5×10⁸ PFU AdCMVIL-12。第28天收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF），比较细胞总数及细胞分类的变化，HE染色观察小鼠支气管及肺组织的病理变化，免疫组化及RT-PCR方法检测各实验组肺组织中GATA-3的表达情况。结果：哮喘模型组与对照组及AdCMVIL-12实验组比较，小鼠肺组织有大量炎症细胞浸润，以嗜酸性粒细胞为主。免疫组织化学及RT-PCR结果显示，哮喘模型组小鼠肺组织GATA-3表达（0.48 ±0.06）明显高于实验组（0.16±0.07）及对照组（0.18±0.04 ）(P<0.01)。结论：AdCMVIL-12对小鼠支气管哮喘的气道及肺组织炎症有明显的抑制作用，其机制可能与AdCMVIL-12阻断GATA-3的表达,调节Th₁/Th₂细胞因子的平衡有关。     

CpGODN对尘螨哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达的影响

目的探讨CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)对尘螨哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子的影响及其机制。方法用雌性C57BL/6J小鼠建立尘螨哮喘小鼠模型,在抗原致敏阶段加入CpGODN进行干预,并设立GpCODN治疗对照组及布地奈德治疗对照组,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)数量的变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ的含量变化;用免疫印迹(Western blotting)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果与哮喘模型组及GpCODN治疗对照组比较,CpGODN治疗组的BALF中炎症细胞明显减少,IL-4、IL-5的浓度降低,IFN-γ浓度升高,肺组织中GATA-3蛋白表达降低,T-bet表达增高;与布地奈德治疗组比较,CpGODN治疗组的BALF中IFN-γ浓度升高。相关分析显示肺组织中T-bet/GATA-3比值与BALF中IFN-γ/IL-4比值呈正相关。结论 CpGODN可通过诱导T-bet表达、抑制GATA-3表达以恢复Th1/Th2平衡,从而减轻尘螨过敏性哮喘小鼠的气道炎症。     

诱导幼鼠食物过敏与哮喘发生的免疫学相关性研究

目的 研究早期诱导小鼠食物过敏与后期哮喘发生的免疫相关性及其肺部组织病理学改变.方法 6周龄断乳雌性BALB/c幼鼠(n:37)随机分为3组,分别为空白对照组(n=12),食物过敏组(n=13)和哮喘组(n=12).造模结束后各组均采用卵清蛋白(OVA)雾化激发,检测各组血清IgE水平、支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子IL-4、INF-γ水平,计算BALF中炎性细胞与嗜酸性粒细胞(EOS)数量.取小鼠肺部组织做病理切片,观察支气管管壁厚度和EOS浸润.结果 食物过敏组与哮喘组血清IgE水平、BALF中IL-4水平、IL-4/INF-γ比值和EOS计数均显著高于空白对照组(P<0.05),哮喘组BALF中IL-4水平和EOS计数显著高于食物过敏组(P<0.05).而两组间IgE水平差异无统计学意义(P>0.05);食物过敏组与哮喘组BALF中IFN-γ水平显著低于空白对照组(P<0.05).肺组织病理观察显示,食物过敏组与哮喘组肺部组织嗜酸性细胞浸润均明显增加(P<0.05),支气管管壁增厚,哮喘组EOS浸润数显著高于食物过敏组(P<0.05).结论 食物过敏组和哮喘组模型均存在IgE介导的全身免疫应答增高,食物过敏所致的肺部Thl/Th2免疫失衡和炎性细胞浸润可能是后期哮喘发生的免疫学机制.     

雾化吸入γ干扰素阻断GATA-3表达治疗支气管哮喘

目的研究雾化吸入γ扰素(IFN-γ)对支气管哮喘的防治作用及机制。方法采用卵蛋白(OVA)、氢氧化铝建立BALB/c小鼠哮喘模型。IFN-γ雾化吸入组(C组)于模型建立第23天至第30天每日1次雾化吸入IFN-γ12μg,第31天取肺泡灌洗液(BALF)测定细胞成分、白介素(IL)-4、IL-5浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及转录因子GATA-3的表达。设正常对照组(A组)和哮喘模型磷酸盐缓冲液(PBS)处理组(B组)。每组12只小鼠。结果C组BALF中的嗜酸性粒细胞(EOS)为0．005±0．003,明显低于B-组的O．211 4-O．067(P<0．01)；C组BAI。F中的IL-4为(6．8±3．7)pg／mL,IL-5为(12．6±4．8)pg/mL,均明显低于B组的(90．5±22．4)pg/mL和(55．6±10．7)pg/mL(P＜0．01)；C组血浆中总IgE为(38．8±9．7)μg/mL,OVA特异性IgE为(19．2±4．8)U/mL,明显低于B组的(67．2±9．7)μg/mL和(34．6±7．8)U/mL(P＜0．01)；B组支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿．黏膜层增厚,并有EOS为主的炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,支气管壁周围有EOS为主的炎性细胞浸润,而C组小鼠的上述炎症性改变明显减轻；免疫组织化学显示B组肺组织中GATA-3的表达明显增加。而C组GATA-3的表达明显减少。结论雾化吸入IFN-γ可以抑制哮喘鼠IL-4、IL-5的合成、抑制气道炎症、抑制EOS在气道内的炎性浸润及血浆中总IgE和OVA特异性IgE水平,其机制可能与IFN-γ阻断GATA-3的表达,从而继发抑制辅助性T细胞2型反应有关。     

心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制

目的探讨心房钠尿肽(ANP)信号通路在小鼠支气管哮喘(BA)发病中的作用及其机制。方法 40只雌性BALB/C小鼠随机分为正常对照组、BA组、ANP组和ANP+A71915组,每组10只;建立BA小鼠模型和ANP在体干预模型,观察各组小鼠支气管炎症改变情况和支气管黏液分泌情况,采用免疫组织化学技术检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果 BA组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较正常对照组显著(P<0.01),ANP组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较BA组更严重(P<0.01),ANP+A71915组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较ANP组明显减轻(P<0.01)。BA组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著高于正常对照组(P<0.01),ANP组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著高于BA组(P<0.01),ANP+A71915组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著低于ANP组(P<0.01)。BA组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.01),ANP组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达明显低于BA组(P<0.01),ANP+A71915组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达明显高于ANP组(P<0.01)。结论 ANP信号可能通过调控T-bet和GATA-3蛋白的表达参与BA小鼠免疫功能失衡的发病过程。     

地塞米松对变应性哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的 探讨地塞米松对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其mRNA表达的影响.方法 30只清洁级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组.以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,末次激发24 h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织.BALF行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测BALF中TARC和IL-4水平;免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TARC蛋白和TARC mRNA在肺组织中的表达.结果 ①哮喘组BALF中细胞总数,EOS绝对数和EOS占细胞总数的百分数(EOS%)均显著高于正常对照组,地塞米松组上述指标均显著低于哮喘组(均P＜0.01);②哮喘组BALF中TARC,IL-4浓度均显著高于对照组,地塞米松干预后BALF中TARC,IL-4浓度均显著低于哮喘组(均P＜0.01).③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中TARC蛋白及其mRNA的表达,哮喘组显著高于对照组,地塞米松组较哮喘组显著减弱(均P＜0.01),免疫组化显示,TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞.④相关性分析显示,小鼠BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度均呈显著正相关(均P＜0.01).结论 糖皮质激素(地塞米松)可抑制TARC在哮喘小鼠气道上皮中的表达,可能是其治疗哮喘气道炎症的部分作用机制.     

甲泼尼龙对哮喘模型MMP-9的表达及对气道炎症的影响

目的 探讨甲泼尼龙(MP)对哮喘小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和气道炎症的影响.方法 30只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为哮喘组、MP治疗组和生理盐水对照组,每组10只.采用鸡卵清白蛋白(OVA)腹腔注射和滴鼻的方法 建立小鼠急性哮喘模型,HE染色观察肺组织病理学改变,并进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.采用免疫组化法和明胶酶谱法测定MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达.结果 哮喘组病理切片显示明显的气道痉挛,大量炎性细胞浸润,BALF细胞计数中嗜酸性粒细胞明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);而MP治疗组病理切片显示气道痉挛程度和炎性细胞浸润均减轻,BALF中嗜酸性粒细胞减少,与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05).免疫组化和明胶酶谱分析均显示哮喘组较对照组MMP-9蛋白表达明显增加.RT-PCR结果 显示,哮喘组MMP-9 mRNA表达增多,而MP治疗组较哮喘组表达降低.结论 MMP-9在哮喘小鼠肺组织中表达增高可能是导致哮喘急性炎症的机制之一.MP也可能通过抑制MMP-9表达抑制哮喘的炎症反应.     

甲泼尼龙对哮喘模型MMP-9的表达及对气道炎症的影响

目的 探讨甲泼尼龙(MP)对哮喘小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和气道炎症的影响.方法 30只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为哮喘组、MP治疗组和生理盐水对照组,每组10只.采用鸡卵清白蛋白(OVA)腹腔注射和滴鼻的方法 建立小鼠急性哮喘模型,HE染色观察肺组织病理学改变,并进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.采用免疫组化法和明胶酶谱法测定MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达.结果 哮喘组病理切片显示明显的气道痉挛,大量炎性细胞浸润,BALF细胞计数中嗜酸性粒细胞明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);而MP治疗组病理切片显示气道痉挛程度和炎性细胞浸润均减轻,BALF中嗜酸性粒细胞减少,与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05).免疫组化和明胶酶谱分析均显示哮喘组较对照组MMP-9蛋白表达明显增加.RT-PCR结果 显示,哮喘组MMP-9 mRNA表达增多,而MP治疗组较哮喘组表达降低.结论 MMP-9在哮喘小鼠肺组织中表达增高可能是导致哮喘急性炎症的机制之一.MP也可能通过抑制MMP-9表达抑制哮喘的炎症反应.     

林蛙油对哮喘缓解期模型小鼠气道炎症的影响

[目的]探讨林蛙油对哮喘缓解期模型小鼠气道炎症的作用及其可能机制.[方法]给予林蛙油小、大剂量组0.05,0.50g/kg林蛙油匀浆液.采用酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4,IL-5及γ-干扰素(IFN-γ)水平的变化,观察BALF中炎性细胞和肺组织病理学改变.[结果]与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平均显著增高(P<0.05),IFN-γ水平显著降低(P<0.05).与哮喘模型组比较,林蛙油小、大剂量组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平均明显降低(P<0.05),IFN-γ水平显著增高(P<0.05).林蛙油小、大剂量组哮喘小鼠肺组织病理学改变明显减轻.[结论]林蛙油对哮喘模型小鼠具有保护作用,其机制可能与调节Th1/Th2平衡失调、减轻炎性细胞浸润有关.