一阶导数光谱法测定解热Ⅰ号口服液中桂皮醛含量

一阶导数光谱法测定解热Ⅰ号口服液中桂皮醛含量谢茹嘉（中国药科大学中药制剂学教研室，南京２１０００９）关键词桂皮醛；含量测定；一阶导数光谱法桂枝具有发汗、祛邪的功效［１］，常用于辛温解表剂之中。解热Ｉ号口服液是由桂枝、荆芥、白芷等中药组成，本实验采用一...     

HPLC法测定桂枝中桂皮醛和桂皮酸的含量

桂枝为樟科常绿乔木肉桂Ginnamomum cassia Presl的嫩枝，含有的主要成分为桂皮醛、桂皮酸。《中华人民共和国药典》2000年版仅有TLC鉴别，笔者采用HPLC法测定了桂枝中桂皮醛和桂皮酸的含量，并测定了4个市场样品。结果表明该法简便、准确，重现性好，可有效地控制桂枝药材的质量。     

汤剂中桂枝成份的研究

考察了400个中医常用方,其中含有桂枝的方子达35％。可见桂校在中药处方中的价值。桂枝中含有的主要成份是桂皮醛和桂皮酸。有报告指出:桂皮醛在煎煮过程中会有损失。为了深入、定量地研究这一问题,采用了高效液相层析(HPLC)对桂皮醛、桂皮酸煎煮前后的状况作了定量分析。方法如下: 桂枝煎煮液加1％NaBH_4 5毫升室温,静置1小时后用乙醚萃取母液萃取液 HCl调至弱酸用HPLC分离、定性,用乙醚萃取量(桂皮醛) 残液萃取液 HPLC分离、定量(桂皮酸) 定量分析结果表明:煎煮前桂枝(4克)     

无环鸟苷软膏剂含量的导数光谱法测定

无环鸟苷软膏剂含量的导数光谱法测定何光明王宗春刘晓翌１（湖北医科大学药学系，１基础医学院，武汉４３００６０）关键词无环鸟苷；软膏剂；一阶导数光谱；含量测定中图号Ｒ９２７．２无环鸟苷（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ，ＡＣＶ）是一种选择性抑制疱疹病毒的新药，具有较高...     

气相色谱法测定调经姊妹丸中桂皮醛的含量

调经姊妹丸由肉桂、青皮、红花等１０味中药加工而成，具有活血调经、逐瘀生新之功效，其中肉桂为君药，主要有效成分为桂皮醛，有研究表明桂皮醛具有镇静、镇痛等药理作用［１］。为有效地进行产品质量控制，本文介绍以气相色谱法测定调经姊妹丸中桂皮醛的含量，方法简便...     

姜桂饮胶囊中桂皮醛及二苯基庚烷A含量测定

目的建立姜桂饮胶囊中桂皮醛和二苯基庚烷A含量测定方法。方法用GC法测定桂皮醛含量,色谱柱为SE-30石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),柱初始温度80℃保持1 m in,以2℃/m in一阶升温至140℃,再以20℃/m in二阶升温至200℃;用HPLC法测定二苯基庚烷A含量,选用C18柱,以甲醇-水(体积比63∶37)为流动相,检测波长220 nm。结果桂皮醛在2.0~20.0 mg/mL质量浓度范围内,与桂皮醛及内标的峰面积比呈良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率为98.2%;二苯基庚烷A在0.1104~1.104μg范围内,与峰面积呈良好线性关系,r=0.9996,平均回收率为99.4%。结论方法简便、准确、专属性强,可用于本品的质量控制。     

HPLC测定桂枝汤不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量

[目的]建立HPLC法测定桂枝汤中桂皮酸和桂皮醛含量的分析方法,研究配伍对桂枝汤中桂皮酸和桂皮醛含量的影响。[方法]采用L16（215）正交设计,以HPLC法测定桂皮酸和桂皮醛含量。[结果]不同配伍对桂枝汤中桂皮酸、桂皮醛含量有影响。[结论]该方法测定样品成分含量方法准确,敏捷,数据可靠,为药效学提供了科学定量依据。     

解郁胶囊中桂枝的提取和干燥工艺研究

目的 优选解郁胶囊中桂枝的最佳提取工艺,并对提取液的浓缩和干燥方法进行考察.方法 采用正交试验法考察乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间等因素,以桂皮醛、桂皮酸质量分数及浸膏得率为指标,采用综合评分优选提取工艺条件;以桂皮醛、桂皮酸质量分数为指标,对减压旋转蒸发和常压水浴浓缩方式进行比较以及对浓缩温度进行考察;以桂皮醛、桂皮酸转移率和干膏率为指标,对常压烘箱干燥、真空减压干燥、真空冷冻干燥等3种干燥方法进行比较,优选最佳干燥方法.结果 优选提取工艺条件为:乙醇体积分数为70％,8倍量,提取2次,每次2h,其中乙醇体积分数为主要影响因素;减压旋转蒸发浓缩效果更好,最佳浓缩温度为35～40℃;3种干燥方法中,真空冷冻干燥时桂皮醛、桂皮酸转移率最高.结论 该提取工艺和冷冻干燥工艺所得提取物中桂皮醛、桂皮酸的质量分数较高,为解郁胶囊中桂枝药材的桂皮醛和桂皮酸的提取和干燥方式提供了依据.     

一阶导数光谱法测定复方黄连素注射液中的含量

一阶导数光谱法测定复方黄连素注射液中的含量梁李广，吴宗威，曾立威（广西卫生管理干部学院药学系，广西桂林医学院药学系）关键词复方黄连素；一阶导数光谱法复方黄连素注射液中含有硫酸氢黄连素和甲氧苄胺嘧啶（ＴＭＰ）两种成分，其中硫酸氢黄连素地方标准［１、２］...     

HPLC法测定桂枝茯苓片中桂皮醛的含量

目的测定桂枝茯苓片中桂皮醛的含量。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为Hypersil ODS C18(4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(38:62),,流速1.0mL/min,检测波长285 nm。结果桂皮醛在5.7696-57.696μg/mL呈现出良好的线性关系,相关系数为0.9999。加样回收率98.81%,RSD为1.73%。结论本方法快速简便,结果准确,可用于桂枝茯苓片的质量控制。     

Production and Characterization of Anti—estrone Monoclonal Antibody

Objective Determination of estrone (E1) levels has a significant meaning in evaluating physiological effect and diagnosing some diseases. In order to detect free E1 in biological fluids, a monoclonal antibody specific for E1 was prepared after the complete antigen of E1 was synthesized. The purified monoclonal antibody was fully characterized for later immunoassay. Methods 3-O-carboxymethyl ether derivative of E1 was synthesized and in turn coupled to bovine serum albumin (BSA) to form complete antigen E1-BSA. A monoclonal antibody (McAb) specific for E1 was produced both in vitro and in vivo by a hybridoma anti-E1. Anti-E1 was prepared by fusion of SP2/0 murine myeloma cells with spleen cells isolated from immunized BALB/c mouse. The McAb was characterized by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), SDS-PAGE and Western-blotting. The specificity of the immunoassay was investigated by determining the cross-reactions of E1 analogs when free E1 was detected by competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA). Results Analysis revealed that anti-E1 McAb (E1-McAb) was of the IgG1 type, the molecular weight of E1-McAb was 164 000 daltons. The affinity constant of E1-McAb with coated complete antigen was 8.2′108L/mol. The linear range for free E1 determined by CI-ELISA was 10pg/mL~10ng/mL. The detection limit was 21.4 pg/mL (defined as twice the standard deviation of the blank). Conclusion The CI-ELISA developed with E1-McAb was both sensitive and specific. The prepared E1-McAb can be used in some immunoassays.     

反义核苷酸抑制人高迁移率族蛋白1表达对胰腺癌细胞的影响

目的　构建高迁移率族蛋白 1(HMGB1)基因的反义真核表达载体 ,寻找胰腺癌基因治疗新途径。方法应用分子克隆技术构建HMGB1基因反义真核表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1,转染胰腺癌细胞株PANC 1,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫印迹法 (Westernblot)、噻唑蓝 (MTT)比色法检测转染 4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果　成功构建 pcDNA3 1/antisense HMGB1反义真核表达载体。所获反义表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低 (P <0 0 1)。反义 pcDNA3 1/antisense HMGB1的导入能有效抑制PANC 1增殖活性 (P <0 0 1)。 结论　应用反义RNA技术阻断HMGB1基因的表达 ,能有效抑制癌细胞的体外增殖活性 ,为基因治疗提供了新思路     

GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达

目的：制备生长激素释放激素受体剪接变异体1（GHRHR-SV1）抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法：设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a（+）中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21（DE3）中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^-1异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）;诱导1、2、4和6 h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果：重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0 mmol·L^-1时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2 h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1：1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论：成功制备pET-GHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0 mmol·L^-1、诱导时间为2 h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。     

miR Let-7a1/f1下调前列腺癌1LNCaP细胞中AMD1蛋白的表达

目的研究let-7a1/f1在前列腺癌LNCaP细胞中对S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AMD1)表达的影响及作用机制。方法以LNCaP细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增let-7a1/f1基因的前体序列,将其克隆到pSilencerTM4.1-CMV neo载体中,构建成let-7a1/f1真核表达载体pSilencer-let7a1/f1。瞬时转染LNCaP细胞后,通过RT-PCR法,检测let-7a1/f1在转录水平的表达,同时通过RT-PCR及Western blot检测AMD1在转录和翻译水平的表达变化。构建AMD1基因3’非翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因融合质粒(pMIR-AMD1),并与pSilencer-let7a1/f1共转染LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检测,确定let-7a1/f1对AMD1 3’-UTR的作用。结果 pSilencer-let7a1/f1和pMIR-AMD1经酶切电泳及测序鉴定正确,pSilencer-let7a1/f1转染LNCaP细胞后,let-7a1/f1表达明显上升,AMD1在转录水平无变化,在翻译水平明显下降,let-7a1/f1转染后,pMIR-AMD1的荧光素酶活性明显降低。结论 miR Let-7a1/f1可作用于AMD1 3’-UTR靶点,抑制AMD1蛋白的翻译,从而降低LNCap细胞中AMD1蛋白的水平。     

分泌mMIP-1α趋化因子的小鼠肝癌细胞株的建立及其体内致瘤性

目的：建立分泌mMIP-1α的小鼠肝癌细胞株,并观察其体内致瘤性。方法：mMIP-1αcDNA被克隆入pBabe puro逆转录病毒载体,构建的重组逆转录病毒载体pBabe-puro-mMIP-1α转染包装细胞,嘌呤酶素抗性细胞培养上清感染小鼠肝癌细胞系Hepa1－6,RT－PCR和免疫组化分别检测Hepa1-6,Hepa1-6-mMIP-1α的mMIP-1αmRNA和mMIP-1α蛋白折表达。绘制Hepa1-6-mMIP-1α与Hepal1-6手长曲线观察细胞的生长,琼脂糖凝胶打孔法体外观察Hepa1-6-mMIP-1α分泌蛋白对小鼠脾细胞的趋化作用。观察Hepa1-6-mMIP-1α体内瘤性。结果：构建了重组逆转录病毒载体pBabe puro-mMIP-1α,Hepa1-6不表达mMIP-1αmRNA及蛋白,Hepa1-6-mMIP-1α表达mMIP-1αmRNA和蛋白。Hepa1-6-mMIP-1α与Hepa1-6的生长曲线基本一样,Hepa1-6-mMIP-1α分泌了对小鼠脾细胞有趋化作用的分子。Hepa1-6-mMIP-1α体内致瘤性降低。结论：Hepa1-6-mMIP-1α能产生mMIP-1α,mMIP-1α分泌了对小鼠脾细胞有趋化作用的分子。Hepa1-6-mMIP-1α体内致瘤性降低。结论：Hepa1-6-mMIP-1α能产生mMIP-1α,mMIP-1α不改变细胞体外生长状况,嫌生的mMIP-1α有趋化活性,mMIP-1α能使Hepa1-6-mMIP-1α致瘤性降低。     

重组胸腺素α1 pMAL-C2x- Tα1/TB1工程菌的构建与表达

目的构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌。方法将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL-C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL-C2x-Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL-C2x-Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP-Tα1),采用Westernblot对MBP-Tα1进行鉴定。结果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP-Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6%,分子量约为45×103。结论工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础。     

表达UGT1A1重组腺相关病毒载体的构建

目的 获得表达胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸酶（UGT1A1）基因；构建UGT1A1重组腺相关病毒载体，制备腺相关病毒。方法 设计、合成引物，通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）从HepG2细胞总RNA中扩增UGT1A1基因，最终连接于pAAV—MCS．双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒。并在HEK293T细胞表达，制备高滴度重组腺相关病毒。结果 成功扩增了人类UGT1A1基因．构建表达UGT1A1基因重组腺相关病毒载体。并成功表达于HEK293T细胞。结论 本实验构建的人类UGT1A1重组腺相关病毒将为因UGT1A1活性不足导致的高胆红素血症的基因治疗奠定基础。     

肿瘤坏死因子α调控启动子活性促进netrin-1的表达

目的 探讨TNF-α对netrin-1基因表达的影响,并对其调控机制作初步研究。方法 使用RT-PCR和Western blot方法检测TNF-α对netrin-1表达影响。PCR反应克隆出netrin-1启动子序列,构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶报告基因表达载体。转染HEK-293A细胞检测荧光素酶活性。观察细胞因子TNF-α对netrin-1转录水平的表达调控。结果 首先证实了TNF-α能够上调Netrin-1的表达。其次成功构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶表达载体,测序正确,然后利用双荧光素酶报告基因系统证实构建的报告基因载体启动子具有活性。发现肿瘤坏死因子TNF-α可以使netrin-1启动子活性显著增加 (P<0.05),TNF-α以剂量和时间依赖方式调节netrin-1启动子的活性。结论 细胞因子TNF-α可能通过调控启动子的活性而调节netrin-1的表达。     

流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基片段的克隆及表达

目的 将流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基进行亚克隆、表达，获得重组的亚克隆多肽，为进一步研究PBl亚基功能奠定基础。方法 以FB1亚基cDNA为模板，用PCR方法扩增出PB1-1片段，应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pQE30重组，阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定，IPTG诱导各亚克隆系高效表达；优化表达条件。结果 PCR法扩增出487bp的片段，酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒，在E．coli M15中表达得到相对分子量约为20KD的重组蛋白，获得蚕组多肽。结论 成功地亚克降及表达了流感病毒RNA聚合酶PB1-1亚基。     

Correlation between the Expression of Aquaporin 1 and Hypoxia-inducible Factor 1 in Breast Cancer Tissues

The correlation between aquaporin 1 （AQP1） and hypoxia-inducible factor 1 （HIF 1） in breast cancer tissues was preliminarily studied. In 155 cases of breast cancer, the expression levels of AQP1 were detected by immunohistochemisty in HIFl-positive group or HIFl-negative group, and the correlation between AQP1 and HIF1 was analyzed. The overexpression of AQP1 and HIF1 were observed in 155 cases of breast cancer tissues. The expression level of AQP1 in HIFl-positive group was significantly higher than that in HIFl-negative group. The positive expression rate of AQP1 was 296.55±24.67 and 168.37±37.53 in HIFl-positive group and HIFl-negative group respectively with the difference being very significant between them （P〈0.001）. It was concluded that AQP1 was overexpressed in the HIFl-positive group and there were some correlations between AQP1 and HIF1, suggesting they interact each other and regulate the oncogenesis of breast cancer.