降钙素对小鼠成骨细胞增殖及OPG/RANKL表达的影响

目的探讨降钙素对小鼠成骨细胞增殖及骨保护素（OPG）／细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法取出生24h内的小鼠30只,无菌的条件下取出颅骨,应用酶消化法进行成骨细胞的培养,在培养成骨细胞的培养液中加入不同浓度的降钙素,首先应用MTT法检测这种药物对成骨细胞增殖的影响,然后应用RT-PCR法检测其对OPG／RANKL mRNA的表达及ELISA法检测OPG蛋白分泌的影响。结果降钙素能促进成骨细胞的增殖。降钙素能增强成骨细胞中OPG mRNA的表达同时抑制成骨细胞中RANKL mRNA的表达,并能促进OPG蛋白的分泌。结论降钙素能促进成骨细胞的增殖及成骨细胞中OPG mRNA的表达,同时抑制RANKL的mRNA的表达。     

左归丸含药血清对成骨细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的通过观察左归丸含药血清对成骨细胞骨保护素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)mRNA表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法体外分离、培养成骨细胞,实验分为3组:正常血清组、卵巢切除血清组、卵巢切除含药血清组。采用原位杂交法,检测成骨细胞OPG、RANKL mRNA的表达。结果卵巢切除血清组与正常血清组相比,成骨细胞OPG mRNA的表达显著下调,而RANKL mRNA表达明显上调;卵巢切除含药血清组与卵巢切除血清组相比,成骨细胞OPG mRNA的表达明显上调,RANKL mRNA的表达明显下调;而与正常血清组相比,无显著性差异。结论在去势状态下,左归丸含药血清一方面直接抑制RANKL的分泌,使破骨细胞活性降低;另一方面促进成骨细胞分泌OPG,使之与RANKL的结合增多,进而使破骨细胞活性降低,从而达到治疗骨质疏松的目的。     

1,25(OH)2D3对体外培养大鼠成骨细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的：观察1,25（OH）2D3对体外培养的大鼠成骨细胞RANKL／OPG mRNA表达的影响,探讨其促进骨吸收的作用机制。方法：体外分离培养大鼠成骨细胞,分别观察不同浓度1,25（OH）2D3及用1,25（OH）2D,处理不同时间对RANKL／OPG mRNA表达的影响,RANKL／OPG mRNA表达采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定。结果：1,25（OH）2D3呈时间和剂量依赖性地刺激大鼠成骨细胞RANKL mRNA的表达,而抑制OPG mRNA的表达,使RANKL／OPG值增高。结论：1,25（OH）2D3通过调节成骨细胞RANKL／OPG的基因表达,从而发挥促进破骨细胞介导的骨吸收作用。     

激光立体成形多孔钛对成骨细胞的增殖及 RANKL 和 OPG 表达的影响

目的：评价激光立体成形技术制备的多孔钛材料对成骨细胞增殖率、骨相容性、成骨细胞核因子κB受 体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)及护骨素(osteoprorotegerin,OPG)表达的影响。方法：以DMEM培养液和无菌生理盐水作为浸提介质,制取激光立体成形多孔钛浸提液,并在加有此浸提液的培养基中培养 成骨细胞,对照组加入等量DMEM培养液和无菌生理盐水。MTT法检测细胞增殖抑制情况;电子显微镜下观察成骨 细胞在材料表面的生长状况;Western印迹检测RANKL和OPG蛋白的表达。结果：激光立体成形多孔钛组培养1,4, 7 d后,成骨细胞能够很好地附着、生长和分化。激光立体成形多孔钛组和对照组成骨细胞增殖率比较,1 d时差异有统计学意义(P<0.05),4和7 d时的差异无统计学意义(P>0.05)。两组组内各时间点相比较,成骨细胞增殖率差异有统计学意义(P<0.05)。Western印迹表明,激光立体成形多孔钛组第1,4,7天RANKL蛋白和OPG蛋白表达水平,与对照组 比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。电子显微镜下观察超微结构,可见成骨细胞在激光立体成形多孔钛表面附着、铺展、增殖良好。结论：激光立体成形多孔钛材料无成骨细胞增殖抑制作用,具有良好的骨相容性,不影响调节骨代谢的OPG/RA NKL/RA NK轴系统,在医学组织工程领域存在着广阔的应用前景。     

消肿方对骨关节炎兔软骨下骨成骨细胞OPG及RANKL mRNA表达的影响

目的观察消肿方对骨关节炎兔软骨下骨成骨细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法将30只新西兰大耳白兔随机分为空白对照组,模型组,消肿方低、中、高剂量组,每组6只。采用改良Hulth法复制膝关节骨关节炎模型,消肿方低、中、高剂量组分别给予40、80、160g/kg消肿方煎剂灌胃,空白对照组和模型组分别以等容积生理盐水灌胃,共28d。光镜下观察兔膝关节关节软骨下骨成骨细胞形态,采用RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果空白对照组与模型组OPG mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P<0.05);消肿方高、中、低剂量组OPG mRNA表达水平均较模型组显著升高(P<0.05),具有明显的剂量依赖性。模型组RANKL mRNA表达水平低于空白对照组,消肿方低、中、高剂量组RANKL mRNA表达水平较模型组逐渐降低,但差异均无统计学意义(P>0.05);消肿方高剂量组RANKL mRNA表达水平显著低于低剂量组(P<0.05)。结论消肿方可上调骨关节炎动物模型软骨下骨成骨细胞OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达。     

赤雹根总皂苷对佐剂性关节炎大鼠血清OPG/RANKL的影响

目的:观察赤雹根总皂苷(TSTDR)对佐剂性关节炎模型大鼠血清骨保护素(OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、TSTDR(160、80、40mg/kg/d)组和雷公藤多苷(12mg/kg/d)组,每组6只大鼠。模型组、TSTDR组和雷公藤多苷组大鼠建立佐剂性关节炎大鼠模型后,各用药组大鼠灌胃给予相应药物21d。采用ELISA法检测大鼠血清OPG和RANKL水平,并计算二者的比值。结果:TSTDR各剂量组大鼠血清OPG/RANKL比值显著高于模型组(P<0.01)。结论:TSTDR可能通过影响OPG/RANKL系统抑制骨破坏,从而有助于控制类风湿性关节炎的发生发展。     

阿托伐他汀对骨髓来源的成骨细胞中OPG mRNA/RANKL mRNA水平的影响

目的:观察阿托伐他汀对体外培养骨髓基质细胞来源的成骨细胞中OPGmRNA/RANKLmRNA表达的影响。方法:小鼠骨髓基质细胞在成骨条件培养基中传代培养,加入不同浓度的阿托伐他汀。通过半定量RT鄄PCR的方法,比较不同浓度药物影响下OPGmRNA和RANKLmRNA表达的变化,评判阿托伐他汀对这两种蛋白表达的影响作用。结果:半定量RT鄄PCR的观察显示在传代培养7天时各组均有OPGmRNA的转录,随着药物浓度的增加,mRNA转录水平逐渐增加,10-6mol/L组和10-7mol/L组明显高于对照组(P<0.05)。RANKLmRNA水平随着药物浓度的增加呈现出下降的现象,10-6mol/L组和10-7mol/L组明显低于对照组。结论:在小鼠骨髓基质细胞来源的成骨细胞中,阿托伐他汀促进了成骨细胞OPG的表达,同时能抑制细胞RANKL的表达。     

阿仑膦酸盐对成骨细胞相关基因RANKL、OPG表达的影响

目的研究阿仑膦酸盐（ALN）对体外培养小鼠成骨细胞相关基因OPG、RANKL表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细
胞,应用碱性磷酸酶染色（ALP）检测成骨细胞ALP染色情况,免疫荧光化学检测成骨细胞RANKL、OPG表达。将第二代成骨
细胞分为A、B、C、D、E五组。A组(对照组),用DMEM培养基培养;B、C、D、E组除加入上述培养基外,加入不同浓度ALN,分别
为：B组,加入10-4mol/L ALN;C组,加入10-5mol/L ALN;D组,加入10-6mol/L ALN;E组,加入10-7mol/L ALN。培养48h后应
用Real time PCR、Western blot检测各组成骨细胞基因RANKL、OPG表达情况。结果成骨细胞ALP染色呈阳性,免疫荧光化
学检测RANKL、OPG表达阳性。Real time PCR、Western Blot检测各组OPG、RANKL mRNA及蛋白表达水平与ALN浓度密
切相关,10-4mol/L ALN时OPG、RANKL表达最低,10-7~10-5mol/L ALN时OPG、RANKL表达依次增高,10-5mol/L ALN时表达
量最高。结论ALN对小鼠成骨细胞RANKL、OPG的表达产生作用：10-4mol/L时明显抑制成骨细胞RANKL、OPG的表达;浓
度10-5、10-6、10-7mol/L ALN促进成骨细胞RANKL、OPG的表达,其中10-5mol/L ALN促进作用最强。
     

雷洛昔芬对大鼠成骨细胞增殖分化及TGF-β表达的影响

目的: 比较雷洛昔芬与雌二醇对成骨细胞增殖分化及TGF-β表达的影响.方法: 本实验在新生SD大鼠颅盖骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照组及空白血清对照组,对其细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原(α2)链Col-I mRNA、转化生长因子(TGF-β1)mRNA的表达进行检测分析.结果: 体外培养成骨细胞在加入不同浓度雷洛昔芬和雌二醇后,(1)细胞增殖率与空白对照组比较无统计学意义(P＞0.05).(2)ALP活性和Col-I mRNA表达与雷洛昔芬成剂量依赖性,并在高浓度组与对照组比较有统计学意义(P＜0.01).(3)TGF-β1 mRNA的表达在雷洛昔芬10-8 mol/L浓度组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).雌二醇对ALP活性、Col-I mRNA表达及TGF-β1 mRNA表达与对照组相比较均有统计学意义.结论: 雷洛昔芬与雌二醇对体外培养成骨细胞均可上调细胞分化及骨胶原表达,对细胞增殖影响均不显著,雌二醇显著上调TGF-β1 mRNA表达,且与雷洛昔芬相比较有统计学意义.此结果提示雷洛昔芬在通过雌激素受体(ER)发挥拟雌激素作用时与雌二醇作用机制可能不同.     

当羊骨片对维甲酸致骨质疏松大鼠股骨OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:观察当羊骨片对维甲酸致骨质疏松大鼠股骨骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法:6月龄雌性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、维甲酸模型组、仙灵骨葆组 (312mg/kg)和当羊骨片低、中、高剂量组(250、500、1000mg/kg),每组10只.维甲酸灌胃建立骨质疏松大鼠模型,各用药组大鼠灌胃给予相应剂量的药物.RT-PCR法检测股骨上段OPG、RANKL mRNA的表达.结果:当羊骨片中、高剂量能显著升高模型大鼠股骨OPG mRNA表达(P＜0.01),降低模型大鼠股骨RANKL mRNA表达及RANKL/OPG比值(P＜0.01).结论:当羊骨片可能通过调控OPG、RANKL基因表达,对维甲酸致骨质疏松大鼠有一定的保护作用.     

素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 研究中成药素尔松对大鼠成骨细胞增殖分化的影响.方法 应用不同浓度素尔松处理大鼠成骨细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,并计数绘制生长曲线;免疫组织化学染色碱性磷酸酶活性变化;茜素红S染色观察成骨细胞钙化灶的形成和变化:透射电镜观察细胞内部结构的变化.结果 镜下观察成骨细胞数量与对照组相比,随素尔松浓度加大而增多,碱性磷酸酶表达增强,钙化灶增多.电镜下观察细胞器未见明显变化.结论 素尔松能促进成骨细胞的增殖、分化;增强成骨细胞的合成代谢,促进成骨活动增加,钙盐的分泌增加.     

不同炮制方法对续断中总皂苷和川续断皂苷Ⅵ含量的影响

目的:研究续断生品及不同炮制品中总皂苷与川续断皂苷Ⅵ的含量变化,探讨不同炮制方法对续断中总皂苷和川续断皂苷Ⅵ含量的影响.方法:采用分光光度法测定续断生品及炮制品中总皂苷的含量;采用高效液相色谱法测定川续断皂苷Ⅵ的含量.结果:与续断生品相比较,各炮制品的总皂苷含量略有增加;但炮制后川续断皂苷Ⅵ的含量增加显著.结论:不同炮制方法均能影响续断中川续断皂苷Ⅵ的含量变化,证明了传统炮制方法的合理性.     

不同浓度的续断总皂甙对成骨细胞增殖、分化和细胞周期的影响

目的通过续断总皂甙对成骨细胞的体外培养,探寻不同浓度的续断总皂甙对成骨细胞增殖、分化和细胞周期的影响及可能存在的量效关系。方法 (1)分离、培养小鼠的原代成骨细胞。(2)将续断总皂甙配制成不同浓度的培养基(10-6g/ml、10-5 g/ml和10-4g/ml 3组),并分别培养成骨细胞,采用四氮唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖能力;细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测细胞的分化;流式细胞分析细胞周期。结果与空白对照组比较,续断总皂甙能够促进成骨细胞的增殖,增加碱性磷酸酶的表达及显著提高细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数,其中10-5g/ml浓度组比10-6g/ml和10-4g/ml浓度组更加显著。结论在一定浓度范围内续断总皂甙可促进成骨细胞增殖、分化和提高细胞增殖指数,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一。     

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）的核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）及其饵受体骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果 TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKLmRNA表达,RANKL／OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL／OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。     

不同浓度降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞OPG mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠成骨细胞OPG mRNA的表达影响.方法 采用新生大鼠颅盖骨组织块培养成骨细胞,加入不同浓度CGRP干预体外培养成骨细胞,观察成骨细胞增殖和ALP活性,检测OPG mRNA及RANKL mRNA的表达水平.结果 CGRP在浓度为1×10-8mol/L时对成骨细胞增殖的促进作用最强,在1×10-9mol/L时对成骨细胞ALP活性的促进作用最强;CGRP不仅能明显增强OPG mRNA的表达水平(P＜0.05),还能明显抑制RANKL mRNA的表达水平(P＜0.05),以10-8和l0-7浓度时表达最为明显,均呈剂量依赖性;且CGRP可明显上调OPG/RANKL的比值(P＜0.05).结论 CGRP对成骨细胞增殖和活性均有促进作用,可能通过上调成骨细胞OPG/RANKL,最终发挥抑制骨吸收的作用.     

ERK信号通路对钛合金诱导成骨细胞RANKL、OPG表达的作用

目的 探讨钛合金颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)基因表达和蛋白分泌的影响,以及细胞外信号调控激酶1/2(ERK1/2)信号通路在其中的作用.方法 体外培养成骨细胞.实验分3组:对照组(A组);钛合金组(B组):给予浓度为0.1 g/L钛合金颗粒干预;抑制剂组(C组):给予钛合金颗粒+ERK信号通路抑制剂PD98059,每组6个样本.采用RT-PCR和ELISA法分别检测成骨细胞RANKL、OPG基因和蛋白表达.结果 3组各个时间点均可见RANKL、OPG的表达;但B组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌量以及RANKL/OPG比值显著高于A组(P<0.01);而C组RANKL、OPG mRNA的表达和蛋白分泌水平以及RANKL/OPG比值的增幅显著小于B组(P<0.01).结论 钛合金颗粒可刺激成骨细胞RANKL mRNA、OPG mRNA的表达并促进RANKL、OPG蛋白的分泌,增加RANKL/OPG比值;ERK信号通路抑制剂PD98059可一定程度抑制RANKL和OPG的表达,降低RANKL/OPG比值,对减少假体周围骨溶解的发生可能起重要作用.     

Ox-LDL对大鼠血管平滑肌细胞OPG及RANKL表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）骨保护素（OPG）及核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法：体外培养大鼠VSMCs细胞株（A7r5）,采用不同浓度Ox-LDL（75、150、300μg/mL）或不同时间（4、12、24h）处理构建VSMCs损伤模型,分别采用定量PCR、Western blot方法检测大鼠主动脉OPG、RANKL表达情况。结果：经过oxLDL干预后,VSMCs高表达OPG而低表达RANKL,且呈现浓度和时间的依赖性。结论：ox-LDL能够促进大鼠VSMCs OPG表达,并同时抑制RANKL表达。     

续断苷对人成骨细胞增殖和分化作用研究

目的:观察续断苷对体外培养人成骨细胞的增殖和分化的影响。方法:取人髂骨松质骨分离培养成骨细胞,传代后用含续断苷的培养液培养,用MTT方测定成骨细胞的增殖,并测定碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:浓度为1,10,100μg/ml的续断苷培养液促进成骨细胞的增殖;浓度为10,100μg/ml的续断苷培养液促进成骨细胞碱性磷酸酶分泌。结论:续断苷在一定浓度范围内促进人成骨细胞的分化与增殖。