开口箭皂甙抑制小鼠S-180肉瘤细胞增殖及实体瘤生长的实验研究

目的 研究开口箭皂甙(STCB)体内外抗S-180肉瘤活性的强度及其作用机制.方法 MTT法检测S-180细胞的增殖程度;制备昆明种小鼠S-180移植实体瘤模型,观察STCB的抑瘤作用;光镜和电镜下观察药物作用后S-180细胞形态及超微结构变化;以不同浓度STCB处理S-180细胞,经碘化丙啶染色后应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 STCB体外明显抑制S-180细胞增殖,IC50为34.64μg/ml.经灌胃给药,STCB对荷S-180实体瘤小鼠表现出良好的抑瘤作用,低剂量(0.5 g/kg体质量)时,抑瘤率已超过30%,高剂量(2 g/kg体质量)时,抑制率达到54.86%.电镜观察和FCM检测证明肿瘤细胞凋亡率随STCB浓度增加而增加.STCB的浓度为10和30μg/ml时,S期细胞百分率上升,G2/M期细胞百分率下降;当STCB的浓度达到60μg/ml,G0/G1期细胞百分率下降,G2/M期细胞百分率上升:提示低浓度STCB阻止S-180细胞从S期进入G2期;高浓度时,STCB还干扰S-180细胞的有丝分裂.结论 STCB在体内外对S-180肉瘤细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期有关.     

珠子参对S-180荷瘤小鼠抑瘤效应及免疫学机制的研究

目的观察珠子参对S-180荷瘤小鼠抑瘤效应及免疫学机制.方法体内实验采用S-180荷瘤Balb/c小鼠模型,以生理盐水为阴性对照,5-FU为阳性对照,观察珠子参煎液对肿瘤生长的抑制作用,LDH释放法检测NK细胞活性,胸腺指数,ELISA试剂盒检测血清IL-2浓度.结果珠子参体内抑瘤率为38.04%;NK细胞活性为68.23%,高于阴性对照组(P＜0.01);胸腺指数为32.8mg/10g,血清IL-2浓度为12.88±1.76pg/ml,均高于5-FU组(P＜0.01或P＜0.05).结论[1]珠子参具有一定的体内抑瘤作用;[2]珠子参对荷瘤小鼠有一定的免疫增强作用.     

蒺藜皂苷对氧化应激PC12细胞内NF-κB水平的影响及其机制

目的：研究蒺藜皂苷(GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)缺氧损伤时细胞内核转录因子(NF-κB)含量的影响,并探讨其机制。方法: 将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组、蒺藜皂苷高剂量组（10 mg·L^-1）和低剂量组（3 mg·L^-1）。用H2O2建立PC12细胞缺氧损伤模型,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,并采用流式细胞仪、免疫组织化学方法及Western blotting等方法检测NF-κB蛋白表达水平。结果：与模型组比较,蒺藜皂苷高和低剂量组的PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与蒺藜皂苷低剂量组比较,蒺藜皂苷高剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05);流式细胞仪及Western blotting方法检测,与模型组比较,蒺藜皂苷高和低剂量组PC12细胞内NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.05),蒺藜皂苷高剂量组与低剂量组比较差异无显著性(P>0.05)。免疫组织化学方法检测,与对照组比较,模型组中胞浆呈棕黄色颗粒的细胞数明显减少,NF-κB蛋白表达强度显著降低 (P<0.01);蒺藜皂苷高和低剂量组中NF-κB呈阳性表达的细胞数明显高于模型组(P<0.05)。结论：蒺藜皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能与NF-κB的激活有关。     

萝卜硫素脂质体对S-180肉瘤细胞小鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨萝卜硫素(SFN)脂质体的体内抗肿瘤作用并讨论其可能机制.方法 首先体外观察SFN脂质体组及游离药物组对S-180肿瘤细胞株的抑制作用,进行细胞内药动学实验.然后建立S-180肉瘤细胞小鼠皮下移植瘤动物模型,观察SFN脂质体组及游离药物组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,检测肿瘤中药物含量.通过Western blot检测SFN脂质体对荷瘤小鼠金属蛋白酶(MMP)-2的影响,采用一氧化氮合成酶检测试剂盒检测荷瘤小鼠的一氧化氮合成酶含量.结果 在体外实验中,SFN脂质体抑制S-180细胞的半抑制浓度(IC50)为33.1 μmol/L,小于游离SFNIC50 44.3 μmol/L.细胞内药动学参数提示,SFN脂质体进入S-180细胞内的程度较游离SFN增加.SFN脂质体低、中、高三个剂量组均能明显抑制荷S-180荷瘤小鼠的肿瘤生长,与相同剂量游离SFN(50 mg/kg)比较,脂质体的抑瘤率(44.09％)增强近一倍(24.55％),生命延长率有所增加(P＜0.01).中、高剂量的SFN脂质体明显下调小鼠肿瘤部位中的一氧化氮合成酶的表达(P＜0.01).Western blot检测结果表明,高剂量浓度的SFN脂质体用药后,明显下调小鼠瘤组织中的MMP-2蛋白的表达(P＜0.0t).结论 SFN脂质体具有较强的体内外抗肿瘤活性,作用强于游离SFN.其机制可能与实体瘤的高通透性和滞留效应、抑制基质MMP-2活性来阻止肿瘤细胞的入侵,并使得一氧化氮合成酶浓度降低减少一氧化氮分泌,从而降低血管通透性,减少肿瘤组织供应,抑制肿瘤的生长等有关.     

高压氧对S-180肉瘤小鼠抗肿瘤免疫功能的影响

实验中检测了各组荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫功能,同时,观察了小鼠荷瘤的体积,溃破率及动物死亡率,结果显示:与对照组相比,高压氧(HBO)组荷瘤小鼠体内 NK、LAK 及巨噬细胞(M_φ)活性显著升高,并可诱导产生较强的 CTL 活性(P<0.01);实验动物肿瘤体积明显缩小,荷瘤组织溃破率明显增高(P<0.01);且实验组小鼠的存活时间显著延长(P<0.05)。提示:高压氧暴露可以提高 S-180肉瘤小鼠体内 NK、LAK、和CTL 细胞的杀伤活性,增强巨噬细胞的杀伤效率,从而抑制荷瘤的生长。     

柴胡提取物对人肝癌细胞和小鼠S-180肉瘤的抑制作用

目的 :研究柴胡水提物对体外培养的人肝癌 SMMC-772 1细胞线粒体代谢活性、细胞增殖及小鼠移植性 S-1 80实体瘤的影响。方法 :中药柴胡 ( BCDC)经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得柴胡提取物。人肝癌 SMMC-772 1细胞经不同浓度柴胡提取物处理不同时间后 ,检测了各实验组和对照组细胞的有丝分裂指数、细胞增殖及线粒体活性几方面的变化。S-1 80肉瘤小鼠连续 9d腹腔注射 3 3 .3 mg/ kg体重 BCDC提取物 ,停药 1 5d后 ,杀死小鼠称量瘤重。结果 :1经 3 55mg/ L BCDC提取物处理人肝癌 SMMC-772 1细胞 2 4 h,其线粒体活性为对照组的 50 .2 6% ,处理 72 h为 2 4 .82 %。2以 3 55mg/ L BCDC提取物处理 7d中 ,人肝癌细胞数分别是血清对照组( FCS)的为 57.5% ,4 5.88% ,3 7.0 6% ,2 8.3 7% ,2 0 .90 % ,1 2 .89% ,1 4.1 8% ;无血清对照组 ( NON)的 65.0 9% ,62 .2 4 % ,56.99% ,4 9.0 8% ,4 0 .78% ,2 6.78% ,2 8.4 1 %。 3经 BCDC提取物处理 2 4 h后 ,即使更换正常培养基 ,人肝癌细胞数在 96h的恢复培养中仍低于处理前的细胞数。 4有丝分裂指数实验组为 0 .3 0 ,对照组分别为 5.3和5.4 ( P<0 .0 0 1 )。 5BCDC提取物对小鼠 S-1 80实体瘤抑制率为 87.2 1 %。     

霉酚酸对小鼠树突状细胞免疫学功能和NF-κB的影响

目的探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)的免疫活性成分霉酚酸(mycophenolate acid,MPA)对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫学功能以及对其NF-κBp50表达水平的影响。方法在小鼠DC体外培养时加入不同浓度(0.01μmol/L和0.1μmol/L)的MPA,以[3H]-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入值来反映DC的抗原提呈功能,作体外混合淋巴细胞反应(MLR)观察DC对同种T细胞的刺激增殖能力的影响;免疫印迹法(Western blot)检测DC核内NF-κBp50表达水平。结果经MPA处理后,DC的抗原提呈功能和刺激同种T细胞的功能显著下降(均P<0.05);MPA下调了DC核内NF-κBp50表达水平,并且这一作用随着MPA剂量的增加而增强(均P<0.05)。结论MPA对小鼠骨髓来源的DC免疫学功能起负性调节作用,其机制可能与NF-κB活性受到抑制有关。     

甘草酸苷通过NF-κB通路影响小鼠急性肝损伤机制的研究

目的：探讨甘草酸苷是否可通过调控核因子‐κB （N F‐κB ）通路影响小鼠急性肝损伤。方法选取200只体质量29～30 g昆明小鼠,分为4组,每组50只。第1组为对照组;第2组由四氯化碳（CCl4）诱导急性肝损伤;第3组在第2组的基础上注射复方甘草酸苷（SNMC）注射液;第4组在第3组的基础上加用NF‐κB抑制剂（proDTC）。处理1、3、5 d后,检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素、清蛋白水平及凝血酶原时间（PT）,计算Child‐Pugh评分并进行病理学观察。结果相较于第1组,CCL4处理后,AST、ALT、总胆红素、清蛋白表达水平,以及PT 和Child‐Pugh肝功评分均明显升高（P＜0．05）,表明已成功建立CCL4诱导急性肝损伤模型。同时给予小鼠SNMT后（CCL4＋SNMT）,各指标表达虽未回至正常水平,但随着处理时间的延长,表达水平逐渐降低（P＜0．05）。同时此效应可被 NF‐κB抑制剂 proDTC逆转。结论SNMT可通过调节NF‐κB通路降低小鼠急性肝损伤的严重程度。     

铁线莲皂苷对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的:观察扬子铁线莲中提取的三萜类皂苷成分对人胃癌SGC-7901 细胞株生长及凋亡的作用,研究其对核转录因子NF-κB 活性的影响,初步探讨其可能的作用机制?方法:应用不同浓度铁线莲皂苷作用于SGC-7901细胞48 h后,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测联合应用铁线莲皂苷及5-氟尿嘧啶(5-FU)后SGC-7901细胞凋亡率;应用Western blot 方法检测各组胞核中NF-κB p65表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)进一步确定胞核内NF-κB的活性?结果:铁线莲皂苷各浓度组对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率均明显高于对照组(P < 0.05),且随药物浓度的增加而上升?铁线莲皂苷对5-FU 诱导的细胞凋亡有明显的促进作用?Western blot及ELISA法均证实铁线莲皂苷对胞核NF-κB 表达及活性有一定的抑制作用,并且这种抑制作用存在着剂量依赖现象?结论:铁线莲皂苷对胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖?诱导凋亡的作用,其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制胞核NF-κB表达有关?     

NF-κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的影响

目的探讨NF-κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的影响。方法 C57BL/6肺纤维化模型小鼠造模前6 h,尾静脉注射NF-κB反义寡核苷酸,取肺组织,模型组及对照组分别行原代培养。肺组织及培养细胞进行NF-κB、IκB-α蛋白的免疫组织化学染色及细胞化学染色,并行图像分析,以平均光密度(MOD值)表示各指标的表达量。结果在肺组织及培养细胞中,模型组NF-κB、IκB-α蛋白表达量均较对照组增加(P<0.05),干预组各项指标的表达量均较模型组减少(P<0.05)。NF-κB蛋白与IκB-α蛋白表达呈正相关。结论 NF-κB反义寡核苷酸可以抑制博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的表达,从而起到治疗肺纤维化的作用。     

白血病细胞中NF-κB的活化状态及其对细胞凋亡的影响

目的探讨白血病细胞株中核转录因子NF-κB的活化状态及其对白血病细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测白血病细胞及对照组细胞PBMC凋亡率;双荧光素酶报告基因检测各组细胞NF-κB相对活性;NF-κB抑制剂PDTC作用12h后检测各组白血病细胞NF-κB相对活性及细胞凋亡率的变化。此外,qPCR及Western Blot分别检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白水平的改变。结果与PBMC比较,各组白血病细胞凋亡率明显下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示各组白血病细胞的NF-κB活性显著高于PBMC(P<0.05);PDTC作用后各组白血病细胞NF-κB活性明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时,各组白血病细胞Bax的mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),而Bcl-2的表达水平明显降低(P<0.05)。结论白血病细胞中存在NF-κB的持续性激活,其激活可导致白血病细胞凋亡受阻。     

β-葡聚糖对S180荷瘤小鼠实体瘤抑制作用及其机制研究

目的 研究β-葡聚糖对S180荷瘤小鼠肿瘤抑制作用及其机制.方法 将S180细胞接种于小鼠右上肢皮下建立S180荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组(0.2 mg/kg,腹腔注射)、β-葡聚糖低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,每组16只,雌雄对半.隔日给药,连续21 d,ELISA法检测瘤组织、血液...     

雷公藤多甙对HaCaT细胞NF-κB的影响

目的:探讨雷公藤多甙(TWP)对HaCaT细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:体外培养人角质形成细胞株HaCaT细胞,设0.1μg/ml、0.5μg/ml、2.5μg/mlTWP组、空白对照组、P物质组。用上述药物预处理24h后,加入10-5mol/L的P物质作用30min,采用免疫组化、蛋白印迹和逆转录-聚合酶链反应法分别检测HaCaT细胞NF-κB阳性细胞表达率、NF-κB蛋白和mRNA表达情况。P物质组和空白组分别加入10-5mol/LP物质和细胞培养液。结果:空白组可见少量阳性细胞和一定量蛋白和mRNA表达。P物质组NF-κB阳性细胞表达率、蛋白和mRNA表达水平与空白组相比均明显升高;与P物质组相比2.5μg/ml雷公藤多甙组阳性细胞表达率、蛋白和mRNA水平均下降。而0.1μg/ml和0.5μg/ml雷公藤多甙组细胞NF-κB阳性细胞表达率、蛋白和mRNA表达水平与P物质组间无明显差异,且高于空白对照组。结论:小剂量的雷公藤多甙对HaCaT细胞核转录因子的表达无明显影响,大剂量的雷公藤多甙可下调HaCaT细胞的NF-κB的表达。     

温通法对S180荷瘤小鼠生存期及细胞凋亡的影响

目的:观察温通法对荷S180肿瘤细胞昆明小鼠生存期的影响,从诱导肿瘤细胞凋亡方面揭示温通法抑瘤机制。方法:建立S180小鼠模型,随机分为空白组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、环磷酰胺组,每组16只,8只观察生存期,其余8只取材。中药高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠于造模次日给予不同浓度的中药灌胃,每只0.4 mL,每天1次;空白组于造模次日给予生理盐水灌胃,每只0.4 mL,每天1次;环磷酰胺组造模72 h后给予环磷酰胺0.3 mL腹腔注射,隔日1次;各组于造模第12天停止用药。每组处死8只小鼠,瘤体制作细胞悬液,采用Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;分光光度法检测Caspase-3活性。另外每组8个小鼠,记录各小鼠生存时间并做生存分析。结果:生存期实验中,空白组中位生存期为16 d,环磷酰胺组中位生存期为32 d,中药低剂量组中位生存期为24 d,中药中剂量组中位生存期为30 d,中药高剂量组中位生存期为35 d。中药3个剂量组随着剂量的增加中位生存期逐渐增高。经Log-rank假设检验,与空白组比较,中药中剂量组、高剂量组及环磷酰胺组中位生存期均较长,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。凋亡率检测实验中,中药高、中、低剂量组细胞凋亡率分别为(58.07±4.77)%、(54.89±3.29)%、(49.01±4.20)%,环磷酰胺组细胞凋亡率为(38.11±3.07)%,与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05);中药3个剂量组随着剂量的增大细胞凋亡率有所增高;各组间两两比较,中药高剂量组与中药低剂量组比较,均有显著性差异(P0.05);中药各剂量组细胞凋亡率均高于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P0.01)。与空白组比较,中药各剂量组及环磷酰胺组瘤细胞Caspase-3活性均较高,差异有统计学意义(P0.01);中药3个剂量组间随着剂量的增大瘤细胞Caspase-3活性逐渐提高;中药各剂量组瘤细胞Caspase-3活性均高于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:温通法可明显延长S180荷瘤鼠生存期,诱导S180荷瘤鼠细胞凋亡,其作用机制可能是通过线粒体途径现实的。     

高浓度葡萄糖对体外培养小鼠胰岛细胞NF-κB的表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨核因子κB（NF-κB）在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用。方法：对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养,按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同,分为6组：G1组（5.6 mmol•L^-1葡萄糖）、G2组（7.8 mmol•L^-1）、G3组（11.1 mmol•L^-1）、G4组（16.7 mmol•L^-1）、 G5组(22.2 mmol•L^-1)及G6组（27.6 mmol•L^-1）。采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平;免疫组织化学染色法检测NF-κB活性;免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡。结果：当葡萄糖浓度5.6～11.1 mmol•L^-1时,随着葡萄糖浓度升高,胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加（P<0.05),NF-κB的活性逐渐增加（P<0.05),但此时细胞凋亡未见显著的变化（P>0.05),细胞色素C释放的组间比较差异无显著性（P>0.05)。当葡萄糖浓度≥16.7 mmol•L^-1时,与葡萄糖浓度≤11.1mmol•L^-1各组比较, NF-κB表达明显增加,细胞色素C的释放也逐渐增强（P<0.05),胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势（P<0.05）。结论：高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-κB表达增加,细胞色素C释放增强,同时诱导胰岛细胞凋亡,提示NF-κB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,抑制NF-κB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用。     

急性肺损伤小鼠NF-κB的表达

目的：研究核转录因子-κB(nuclearflactor-κB，NF-κB)在急性肺损伤的动态改变，以期找到NF-κB在肺损伤中的作用。方法：25只雄性小鼠随机分为5组，正常对照及不同时间点致伤组，致伤组腹腔注射脂多糖形成急性肺损伤模型，采用免疫印迹和免疫组化法检测正常鼠及致伤鼠肺组织中NF-κB的表达。结果：脂多糖注射后1hNF-κB即开始增高，3h达高峰，随后开始下降。结论：NF-κB可能是急性肺损伤发病中的一个关键性因子。     

NF-κB/IκB及其与乳腺癌细胞生物学特性的关系

核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是B淋巴细胞核中发现的一种核蛋白质因子,它们位于编码免疫球蛋白的κ轻链基因的增强子中,具有和某些基因上启动子区中的固定核苷酸序列结合而启动基因转录的功能。并在免疫应答、细胞的生长发育等过程中发挥重要作用。乳腺癌细胞中可以检测到高活性的NF-κB,它在乳腺癌发生的早期起决定性作用,对乳腺癌的发生、发展和转移具有调控作用。因此,NF-κB与乳腺癌细胞的关系倍受国内外学者的重视,本文对NF-κB/IκB的分子生物学结构、功能及其与乳腺癌细胞的生物学特性     

华蟾素注射液对HepG2细胞NF-κB通路的影响

目的探讨华蟾素注射液对肝癌细胞株HepG2NF-κB通路的影响。方法在TNF-α激活NF-κB通路的条件下利用双荧光素酶报告基因系统检测华蟾素注射液对含有NF-κB反应元件的萤火虫荧光素酶报告基因pNF-κB-TA-luc转录活性的影响。Western blotting进一步验证华蟾素注射液对HepG2细胞核内NF-κB亚基p65蛋白量的影响,同时半定量RT-PCR检测NF-κB下游靶基因细胞间黏附分子1(ICAM-1)的转录水平。结果0.25、0.5μg/ml浓度的华蟾素注射液可有效地抑制pNF-κB-TA-luc报告基因的相对荧光素酶值(P<0.05)。Western blot结果进一步证明华蟾素可使NF-κB亚基p65蛋白量降低,RT-PCR结果表明NF-κB下游靶基因ICAM-1表达降低。结论华蟾素注射液的抗癌机制可能与抑制癌细胞NF-κB通路的活化有关。     

甲壳胺对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:研究甲壳胺对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法:建立S180荷瘤小鼠模型,随机分为生理盐水对照组、甲壳胺处理组和环磷酰胺处理组,MTT法检测甲壳胺对荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化率、自然杀伤细胞(NK细胞)活性的影响,并观察TNF-α、IL-2等免疫指标的变化.结果:甲壳胺处理组小鼠的脾脏淋巴细胞转化率和NK细胞活性显...