重组人生长激素联合奈达铂在体外对人食管癌细胞株EC109作用的实验研究

目的 研究重组人生长激素(rhGH)在体外对人食管癌细胞生长的影响.方法 实验分为对照组、rhGH组、奈达铂(nedaplatin,NDP)组和rhGH NDP 组共4组,利用体外细胞培养、MTT比色法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法,测定不同浓度的rhGH对人食管癌细胞株EC109细胞抑制率、细胞周期、增殖指数(PI)及核增殖抗原Ki-67表达的影响.结果 rhGH在体外不能明显促进EC109细胞分裂增殖,对照组与rhGH组、rhGH NDP组与NDP组比较细胞抑制率、PI、Ki-67表达强度差异均无统计学意义(均P＞0.05);rhGH各亚组间比较差异亦无统计学意义(均P＞0.05);NDP组、rhGH NDP组与rhGH组、对照组比较细胞抑制率增加,阻滞于G0～G1期的细胞数增加,S期细胞明显减少,PI明显降低,Ki-67表达强度明显下降(均P＜0.05).结论 重组人生长激素在体外不能明显促进食管癌EC109细胞生长.     

紫杉醇纳米微粒对人胃癌细胞MGC803增殖和凋亡影响的研究

目的观察不同浓度（紫杉醇）PA纳米微粒在不同时间段对人胃癌MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTF法测定不同浓度的PA纳米微粒、PA和5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60、72h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变，细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达，检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的PA纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖（16μg／mL作用72h时的抑制率达69％），并且与浓度和时间均呈正相关，流式细胞仪细胞周期分析提示PA纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于G2M期，16μg／mL作用48h明显，细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调，端粒酶活性水平下降。结论PA纳米微粒可诱导人胃癌细胞MGC803发生凋亡且具有控释效应，可延长药物对胃癌细胞的有效作用时间，载药纳米微球没有改变PA成分的生物学活性。     

人生长激素对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨人生长激素在体内对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法建立裸鼠胰腺癌移植瘤皮下模型,分为对照组、顺铂（DDP）组、重组人生长激素（rhGH）组和DDP＋rhGH组,通过流式细胞仪、免疫组化和TUNEL法检测移植瘤的细胞周期、核增殖抗原、凋亡细胞。结果 DDP组和DDP＋rhGH组比对照组或rhGH组S期细胞、核增殖抗原明显降低（P〈0.05）,凋亡指数明显升高（P〈0.05）;而rhGH组与对照组各项指标比较无明显差异（P〉0.05）。结论外源性人生长激素在体内对人胰腺癌细胞的增殖和凋亡无明显作用。     

内质网蛋白29过表达慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞生物学行为的影响

目的：构建内质网蛋白29（ERp29）慢病毒过表达载体,探讨ERp29过表达对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：构建带有红色荧光蛋白标签的ERp29基因表达质粒的慢病毒（pCDH-ERp29）和对照质粒（pCDH-Vector）,分别感染MGC803和SGC7901细胞;荧光显微镜观察细胞感染情况;CCK-8和平板克隆实验检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖能力;Transwell小室实验分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭能力;应用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测稳定感染ERp29基因的胃癌MGC803和SGC7901细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平。结果：酶切鉴定显示成功构建pCDH-ERp29过表达载体,荧光显微镜下观察到成功感染胃癌细胞。CCK-8实验和平板克隆实验检测,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞增殖能力无明显变化（P>0.05）;Transwell小室实验,与pCDH-Vector组比较,pCDH-ERp29组MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。pCDH-ERp29组细胞中ERp29 mRNA和蛋白表达水平明显高于pCDH-Vector组（P<0.05）。结论：成功构建过表达ERp29基因的慢病毒载体,过表达ERp29基因可明显抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞的迁移和侵袭。     

白藜芦醇纳米微粒对体外人胃肿瘤MGC803细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇（RES）纳米微粒在不同时间段对人胃肿瘤MGC803细胞生长和凋亡的影响。方法应用MTT法测定不同浓度的RES纳米微粒、RES、5-FU对MGC803细胞分别在0、6、12、24、48、60 h的细胞生长抑制率。流式细胞仪分析MGC803细胞周期的改变,细胞免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达,检测端粒酶活性。结果MTT法显示不同浓度的RES纳米微粒可抑制MGC803细胞增殖（60μg/ml作用60h的抑制率达64%）,并且与浓度和时间均呈正相关,流式细胞仪细胞周期分析提示RES纳米微粒可将MGC803细胞阻滞于S期,细胞免疫组化法显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达下调,端粒酶活性水平下降。结论RES纳米微粒可诱导人胃肿瘤细胞MGC803发生凋亡,延长药物对胃肿瘤细胞的有效作用时间,载药纳米微球没有改变RES成分的生物学活性。     

rhGH在体外对人肝癌细胞系的作用及其Cyclin D1蛋白表达的影响

目的 研究重组人生长激素(rhGH)在体外对人肝癌细胞系SMMC7721生长的作用及其Cyclin D1蛋白表达的影响.方法 实验分为对照组、rhGH组、rhGH 阿霉素(ADM)组及ADM组;通过体外细胞培养、MTT比色技术及免疫细胞化学技术等手段,测定不同浓度的rhGH及其与ADM合用时对人肝癌细胞系SMMC7721的生长曲线、细胞抑制率及其Cyclin D1蛋白表达的影响.结果 与对照组相比,不同浓度的rhcH在体外对人肝癌细胞系SMMC7721的分裂增殖无明显影响,生长曲线、Cyclin D1蛋白表达不随rhGH浓度的增加而升高;rhGH ADM组与ADM组比较差异无显著性,生长曲线、Cyclin D1蛋白表达无显著变化;与对照组及rhGH组相比较,单用ADM或rhGH ADM对该细胞的抑制率增加,Cyclin D1蛋白表达降低(P<0.01),而两组间差异无统计学意义.结论 rhGH在体外对人肝癌细胞系SMMC7721的分裂增殖无明显促进作用,对Cyclin D1蛋白表达无明显影响.     

二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）是否上调维甲酸相关孤核受体α（RORα）抑制人胃癌细胞株MGC803 细胞上皮- 间质转化（EMT）。方法相差显微镜观察MGC803 细胞形态的改变。逆转录PCR（RTPCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT 的相关分子表达。裸鼠实验检测DADS 与沉默RORα对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803 细胞大小与形状差异更明显。DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降。RT-PCR与Western blot显示,DADS 处理后较处理前各组RORα mRNA 与蛋白表达上调（p <0.05）。DADS 作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显（p <0.05）。RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子（Snail）和波形蛋白（Vimentin）mRNA与蛋白表达上调,而E- 钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA 与蛋白下调（p <0.05）。DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin mRNA与蛋白下调和E-cadherin mRNA与蛋白上调（p <0.05）。免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱。DADS作用后,结果相反。裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加（p <0.05）,增殖细胞核抗原（Ki-67）、Snail、CD34及Vimentin 阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低。DADS 处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强。结论DADS 通过上调RORα 可体内外抑制人胃癌MGC803 细胞EMT。     

氟尿嘧啶影响人大肠癌细胞增殖及凋亡的分子机制

目的研究氟尿嘧啶（5-Fluorouracial,5-FU）体外影响人大肠癌Lovo细胞增殖抑制及诱导凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）显色法,检测不同浓度5-FU作用不同时间对Lovo细胞生长所产生的不同影响;光镜观察凋亡细胞的形态特点;流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞百分率;琼脂凝胶电泳、免疫组化SP法检测Lovo细胞增殖核抗原Ki-67及凋亡相关基因蛋白p53、Fas表达水平。结果5-FU能抑制Lovo细胞生长,在一定剂量和时间范围内,通过光镜观察,见凋亡细胞明显增多,经5-FU诱导后,用FCM分析Lovo细胞,发现凋亡百分率增加并显示剂量和时间效应。实验组细胞Ki-67表达明显低于对照组,Fas表达明显升高,而P53在诱导前后均无表达。结论5-FU能诱导Lovo细胞凋亡并抑制其增殖及侵袭性,Fas基因激活可能是触发Lovo细胞凋亡的主要机制。     

转染pcDNA3-hCEA的人树突状细胞对MGC803细胞的作用

目的：观察转染含人癌胚抗原（CEA）真核表达质粒pcDNA3-hCEA的人树突状细胞（DC）对胃癌细胞MGC803的抑制作用.方法：采用细胞因子rhIL-4和rhGM-CSF诱导培养法制备人外周血DC并用Lipofectamine向人DC转染pcDNA3-hCEA.RT-PCR检测转染细胞hCEA的表达,观察DC-hCEA细胞诱导的致敏的T淋巴细胞（CTL）对胃癌细胞MGC803的杀伤效应.结果：DC-hCEA诱导的CTL对胃癌细胞MGC803的杀伤效应强于DC（P＜0.05）.结论：编码CEA基因的真核表达质粒转染的人DC能够诱导较强的特异性抗肿瘤免疫效应.     

Bcl -2 基因沉默对胃腺癌SGC-7901 细胞5-Fu 敏感性的影响

目的 探讨B 淋巴细胞瘤-2（Bcl -2）基因沉默增强胃腺癌SGC-7901 细胞对5- 氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的价值。方法 设立人胃腺癌SGC-7901 细胞研究组和对照组,采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测两组人胃腺癌SGC-7901 细胞中Bcl-2 mRNA 的表达。研究组采用脂质体法转染化学合成的Bcl-2 siRNA 序列至人胃腺癌SGC-7901 细胞,对照组不进行干预。比较转染前后两组Bcl-2 mRNA 的表达水平。两组均添加不同浓度5-FU,采用Annexin V 标记和流式细胞仪检测48 h 后两组不同浓度5-FU 细胞株的增殖抑制率和凋亡率。结果 两组转染前Bcl-2 mRNA 相对表达量比较,差异无统计学意义（P >0.05）。与转染前比较,研究组转染后的Bcl-2 mRNA 相对表达量降低（P <0.05）;与对照组比较,研究组转染后的Bcl-2mRNA 相对表达量降低（P <0.05）。与对照组比较,研究组培养48 h 的细胞增殖抑制率和凋亡率较高（P <0.05）。结论 Bcl -2 基因沉默可增强胃腺癌SGC-7901 细胞对5-FU 的敏感性,抑制癌细胞的增殖,并促进癌细胞的凋亡。Bcl -2 基因沉默可能是改善胃腺癌5-FU 疗效的有效方法。     

乳糖化人生长激素和人生长激素的药代动力学比较研究

比较研究乳糖化人生长激素（ｈＧＨ－Ｌ）和人生长激素在小鼠体内药代动力学特征,为ｈＧＨ－Ｌ代ｈＧＨ作为提高治疗侏儒症疗效的可能性提供依据。给小鼠静脉注射ｈＧＨ－Ｌ后定时取血和肝样,用ＲＩＡ技术测定血药浓度和肝药浓度,然后根据血药浓度－时间曲线和肝药浓度－时间曲线分析得出药代动力学参数,并与ｈＧＨ对比研究。     

人胚胎时期生长激素对胚胎发育的影响

目的： 探讨不同胎龄人胎垂体生长激素含量对胚胎生长发育的影响。方法： 用双抗体放射免疫分析方法研究３８ 例正常人胎和８ 例无脑儿的血清及垂体生长激素含量。结果： ①在胎２１ 周以前,垂体所含生长激素量逐渐增加,２１ ～２４ 周达高峰,此后呈下降趋势,但仍高于２１ 周以前的水平。②正常人胎血清生长激素含量,有随胎龄增加而上升趋势。③正常胎儿垂体生长激素含量与其身长、体重呈正相关,无脑儿身长、体重与生长激素含量无关。结论： 生长激素虽然在胚胎生长发育中起重要作用,但不是唯一的。本实验为研究人胎生长发育的调控提供了新的资料     

人转化生长因子β3的构建

目的:获取人转化生长因子β₃的编码基因,开发抗衰老的皮肤药物。 方法：采用重叠PCR的方法,设计4对引物,进行4次PCR合成人转化生长因子β₃的编码基 因。 结果：4次PCR后,经2％的琼脂糖凝胶电泳可见一357 bp的条带,将电泳产物回收,连接入pMD-18T载体,经测序分析证实,所获得DNA片段为人转化生长因子β₃的编码基因。 结论：利用重叠PCR方法能够成功构建人转化生长因子β₃的编码基因。     

人肝细胞生长因子β链基因的克隆及表达载体的构建

目的 构建重组人肝细胞生长因子－β（rhHGF-β)的克隆表达体系。以期进一步研究HGF基因的表达调控及HGF的生物学、医学作用。方法 从人胎肝细胞中提取总RNA,运用RT－PCR技术,对HGF－β基因转录前加工修饰,与载体重组,构建rhHGF-β的克隆,并对克隆进行限制性内切酶酶切图谱分析,对重组体中插入的外源基因进行序列分析。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组体克隆的酶切结果与设计一致。结论 首次成功地构建了人肝细胞生长因子－β（rhHGF-β）的克隆表达体系。     

rhEGF对人皮肤成纤维细胞的促增殖作用

目的 研究重组人表皮生长因子(rhEGF)在不同浓度下对人皮肤成纤维细胞增殖的影响,为临床准确定量应用这两种因子修复创面、加速创面愈合提供理论依据. 方法 体外培养人皮肤成纤维细胞,分别用浓度为0,10,30,50,80,100,150 μg/L的rhEGF干预细胞,48 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的活性.选择最适浓度生长因子干预的细胞,用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况. 结果 不同浓度的rhEGF分别对成纤维细胞干预48 h后,显示rhEGF在80μg/L浓度时MTT值最大;并检测出在最适浓度生长因子干预24 h后细胞大多处于DNA合成前期和合成期. 结论 rhEGF浓度在30-100μg/L之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以80μg/L较显著.     

表达人生长激素的逆转录病毒载体的构建

目的：建立一个表达人生长激素（hGH)的重组逆转录病毒载体转移系统，为下一步研究做准备工作。方法:通过重组DNA技术，用Eco R I酶切载有人生长激素的质粒pNMG3，获得约3.9kb的小鼠金属硫蛋白启动子（mMT-1)和人生长激素（hGH)基因片段，将其亚克隆至逆转录病毒表达载体pLXSN中。对阳性重组子LXSNhGH进行酶切和PCR鉴定。利用目的基因片段上的Bg/Ⅱ和载体pLXSN的多克隆位点中的Bam H I酶切位点双酶切，正向重组子pLXSNhGH^ 应能产生约0.8kb和9.0kb2个片段；同时，应用巢式PCR鉴定目的片段，扩增片段大小约1.119kb，与预期结果相符。结果：表明人生长激素逆转录病毒表达载体构建成功。结论：人生长激素逆转录病毒表达载体的构建成功为GHD基因治疗的进一步研究奠定了基础。     

Longitudinal bone growth of the human femur.

A study is presented of the histological structure and growth rate of the growth plate at the distal end of the femur in normal children. From a comparison of quantitative histological information from post-mortem specimens with measurements on serial radiographs it is estimated that the distal growth plate contributes about 66% of the total longitudinal growth of the bone. The marked differences between rodent and man indicate that caution is required in extrapolating data from these animals to man.     

rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响

目的研究重组人生长激素（rHGH）对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响。方法雄性BALB/C小鼠45只术前24h一次性皮下注射环磷酰胺（CTX）100mg/kg,然后行人直肠癌小鼠肾被膜下移植术（SRCA）,随机分成rhGH1组、rhGH2组每日皮下注射rhGH3IU/kg,联合组、化疗组和对照组连续用药7d。各组小鼠随机留3只待其自然死亡,观察其生存期,余小鼠术后10d处死,观察小鼠外周血细胞数、体重、移植瘤末初体积差（△TS）、抑瘤率（IR）及（HE染色）组织学变化。结果联合组及化疗组移植瘤△TS及IR比前三组差异有显著性（P〈0.01）;联合组和化疗组平均生存期显著高于对照组（P〈0.05）;联合组白细胞数值显著高于化疗组（P〈0.05）;对照组和rhGH各组的组织病理形态相似,而联合组和化疗组表现为实质细胞减少,间质增多。结论rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长无明显促进作用;rhGH和化疗药联用对化疗药的抑瘤作用无明显影响、可减轻化疗药的骨髓抑制反应;二者联用可延长实验小鼠的生存期。