肺岩宁对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织中核小体构象调控因子H3．K56、Rttl09、Asfl及E2F1表达的影响

目的：恶性肿瘤细胞具有异常的细胞周期。前期体内实验证实肺岩宁具有干预细胞周期G,／S检测点信号通路的作用,本研究进一步探讨肺岩宁对S期核小体构象调控因子表达的影响。方法：将60只小鼠随机分成正常组、模型组、顺铂组和肺岩宁组,每组15只。右腋部皮下注射Lewis细胞构建C57BI．／6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型。观察各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用流式细胞术检测细胞周期时相分布和增殖指数,实时聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测各组小鼠肺癌移植瘤细胞的核小体构象调控因子H3-K56、Tyl转座基因调节因子109（regulatorofTyltransposition109,Rttl09）、细胞反沉默功能因子1（antisilencingfunction1,Asfl）、腺病毒E2启动子结合转录因子1（E2F1）mRNA和蛋白的表达。结果：肺岩宁组和顺铂组的瘤质量显著低于模型组（P〈0．01）,抑瘤率分别为27．92％和42．50％。肺岩宁组癌细胞的增殖指数明显低于模型组和顺铂组,S期分布比例最少（P〈0．01）。肺岩宁组H3-K56、Rttl09、Asfl、E2F1mRNA和蛋白的表达较模型组显著下调（P〈0．05）。结论：肺岩宁可能是通过影响核小体构象调控因子的表达干预异常细胞周期来发挥抗肺癌细胞生长增殖作用。     

肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞及肿瘤转移的影响

目的:观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤相关巨噬细胞的影响及肿瘤肺转移的抑制作用。方法:取Lewis肺癌细胞接种在C57BL/6小鼠右腋皮下,制备Lewis肺癌荷瘤鼠模型。C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂组、肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组,除正常组外均造模。予相应干预(中药或生理盐水灌胃,顺铂腹腔注射),14 d后观察小鼠生存质量、肺转移灶及计算肺转移抑制率;ELISA法检测血清中细胞因子IL-10、IL-12、转化生长因子(TGF)-β1含量;免疫组织化学染色检测肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞CD206的表达;Western blot法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、核转录因子(NF)-κBp65的表达。结果:模型组、顺铂组小鼠生存质量最差,肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组小鼠生存质量较好。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组3组的肺转移抑制率均明显高于顺铂组。模型组IL-10含量明显高于正常组,各治疗组IL-10含量均显著低于模型组(P0.05);与顺铂组比较,肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组IL-10含量均明显升高(P0.05)。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组IL-12含量均显著高于模型组及顺铂组(P0.05)。与顺铂组比较,肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组TGF-β1均显著降低(P0.05)。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组均可抑制CD206的表达(M2型),但顺铂组和肺岩宁颗粒联合顺铂组抑制更为明显。肺岩宁方组、肺岩宁颗粒组、肺岩宁颗粒联合顺铂组肿瘤组织中MMP-2、MMP-9、NF-κBp65的表达明显低于顺铂组(P0.05)。结论:肺岩宁颗粒能明显改善小鼠生存质量及抑制肿瘤转移,其机制可能是干预NF-κB信号通路并进一步调节肿瘤相关巨噬细胞。     

乳岩宁方联合依西美坦对乳腺癌荷瘤裸鼠 JNK/MAPK信号通路的影响*

目的观察乳岩宁方联合依西美坦对MDA-MB-435乳腺癌细胞荷瘤裸鼠JNK/MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,探讨乳岩宁方联合依西美坦治疗绝经后难治性（HER-2/neu高表达）乳腺癌的作用机制。方法造MDA-MB-435乳腺癌细胞荷瘤去势裸鼠移植模型,分为4组：空白对照组、乳岩宁方组、依西美坦组、联合组（乳岩宁方+依西美坦）,分别每日1次灌胃给药,21 d后处死裸鼠,取材瘤体。采用Western blot及RT-PCR法检测瘤组织中JNK/MAPK信号通路JNK蛋白及其下游相关蛋白STAT3、Bcl-2、p53、caspase8的表达。结果乳岩宁方组、依西美坦组、联合组的抑瘤率分别为37.53%、60.83%、66.09%。与空白对照组相比,乳岩宁方组、依西美坦组和联合组的JNK、STAT3、Bcl-2的蛋白表达均明显下降,有统计学意义（P<0.05）。其中JNK蛋白的表达,联合组较乳岩宁方组、依西美坦组明显下降,有统计学意义（P<0.05）;STAT3蛋白的表达,乳岩宁方组较依西美坦组和联合组明显下降,有统计学意义（P<0.05）;Bcl-2蛋白的表达乳岩宁方组、依西美坦组、联合组之间无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组相比,乳岩宁方组、依西美坦组和联合组p53、Caspase8的基因表达均明显升高,有统计学意义（P<0.05）。联合组p53、Caspase8的基因表达较乳岩宁方组、依西美坦组明显升高,有统计学意义（P<0.05）。结论乳岩宁方联合依西美坦可能对JNK/MAPK信号通路有双向调节作用,一方面下调JNK蛋白表达及其下游蛋白STAT3、Bcl-2表达起到抑制乳腺癌细胞增殖的作用;另一面能上调p53、Caspase8基因表达,起到促进乳腺癌细胞凋亡的作用,最终起到抗肿瘤的作用。中药复方联合内分泌治疗将成为激素受体阳性乳腺癌在后芳香化酶抑制剂时代（AI+）治疗的新模式。     

肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的影响

目的：分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用。方法：分离、鉴定肺癌干细胞;将分离出的SP＋肺癌干细胞分为对照组（空白血清＋生理盐水）、单纯化疗（空白血清＋DDP组）、肺岩宁方组（肺岩宁方含药血清＋生理盐水）、综合治疗组（肺岩宁方含药血清＋DDP）,予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP＋肺癌干细胞凋亡情况。结果：分离的SP＋、CD24＋IGF-1R＋、CD133＋细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整;综合治疗组诱导SP＋干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2%、肺岩宁方组21.3%、DDP组33.7%、对照组0.3%。结论：本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用。     

槲皮素联合顺铂对肺腺癌小鼠移植瘤及NF-κB和HIF-1a表达的影响

目的 观察槲皮素联合顺铂对肺腺癌LA795细胞的T739J、鼠移植瘤内核因子-κB（nuclear factor-kappaB NF-κB）和缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor 1a HIF-1a）表达的影响,并探讨它们抑制肿瘤生长和转移的作用机制.方法 复制肺腺癌LA795细胞的T739小鼠移植瘤模型,将32只接种LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成4组：A对照组、B顺铂组（DDP）、C槲皮素组、D槲皮素＋顺铂组.实验3周后,剥离皮下肿瘤和取出双肺,计算各组抑瘤率和肺转移发生率、小鼠肺表面转移结节数及肺表面结节转移抑制率.免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中NF-κB和HIF-1a表达并定量分析.结果 顺铂组、槲皮素组、联合组与对照组相比肿瘤抑制率升高,槲皮素组及联合组肺表面转移结节数明显下降,各用药组皮下肿瘤内NF-κB和HIF-1a表达与对照组相比明显下降.联合用药组则显著抑制肿瘤的生长和肺表面转移结节数.结论 槲皮素和顺铂对LA795肺腺癌移植瘤的生长和肺结节转移具有协同抑制作用,其机制与其抑制肿瘤内NF-κB和HIF-1a表达相关.     

肺岩宁对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤组织中核小体构象调控因子H3-K56、Rtt109、Asf1及E2F1表达的影响

目的:恶性肿瘤细胞具有异常的细胞周期.前期体内实验证实肺岩宁具有干预细胞周期G1/S检测点信号通路的作用,本研究进一步探讨肺岩宁对S期核小体构象调控因子表达的影响.方法:将60只小鼠随机分成正常组、模型组、顺铂组和肺岩宁组,每组15只.右腋部皮下注射Lewis细胞构建C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型.观察各组小鼠的瘤质量和抑瘤率,采用流式细胞术检测细胞周期时相分布和增殖指数,实时聚合酶链反应法及蛋白质印迹法检测各组小鼠肺癌移植瘤细胞的核小体构象调控因子H3-K56、Ty1转座基因调节因子109(regulator of Ty1 transposition 109,Rtt109)、细胞反沉默功能因子1(antisilencing function 1,Asf1)、腺病毒E2启动子结合转录因子1(E2F1)mRNA和蛋白的表达.结果:肺岩宁组和顺铂组的瘤质量显著低于模型组(P＜0.01),抑瘤率分别为27.92％和42.50％.肺岩宁组癌细胞的增殖指数明显低于模型组和顺铂组,S期分布比例最少(P＜0.01).肺岩宁组H3-K56、Rtt109、Asf1、E2F1 mRNA和蛋白的表达较模型组显著下调(P＜0.05).结论:肺岩宁可能是通过影响核小体构象调控因子的表达干预异常细胞周期来发挥抗肺癌细胞生长增殖作用.     

肺岩宁方干预Lewis肺癌小鼠移植瘤VEGF及其受体Flt-1、KDR蛋白表达的实验研究

目的：观察肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠移植瘤VEGF及其受体Flt-1、KDR蛋白表达的影响。方法：采用C57BL／6小鼠,接种Lewis肺癌细胞株,随机分为对照组、化疗组、肺岩宁组和综合组,在接种后5天肿瘤直径约为5min时,开始给予0．9％NaCl溶液、DDP、肺岩宁、DDP＋肺岩宁治疗。用药21d,第22天处死小鼠。观察各组肺转移灶抑制率,免疫组化测定肿瘤VEGF及其受体Flt-1、KDR蛋白表达。结果：与对照组相比,肺岩宁组及综合组能显著降低肺转移灶发生率（P〈0．05）。免疫组化结果显示：肺岩宁方能够显著降低肿瘤VEGF及其受体KDR水平。肺岩宁方能够减少肿瘤Flt-1表达,但无统计学意义。结论：益气养精、解毒散结的肺岩宁方具有明显的抗肺癌侵袭转移作用。肺岩宁方可以干扰VEGF与其受体（主要是KDR）的相互作用,从而抑制VEGF的生物活性,这可能是肺岩宁方抗肺癌侵袭转移的机制之一。     

米非司酮体内增强顺铂对人卵巢癌细胞的抗癌作用

目的：观察米非司酮在体内对顺铂抗人卵巢癌细胞作用的影响。方法：采用人卵巢腺癌细胞耐药亚株COC1／顺铂，建立人类卵巢癌裸鼠异种移植瘤耐药模型，观察体内应用米非司酮后荷瘤裸鼠肿瘤体积及其瘤组织形态学变化，应用RT－PCR技术检测瘤组织葡萄糖神经酰胺合成酶（GcS)mRNA表达。结果：顺铂与米非司酮联用后，细胞形态发生变化，抑瘤率为70．48％，显著高于顺铂组的抑瘤率21．55％（P＜0．01），联合用药组和米非司酮组的移植瘤GcSmRNA表达较对照组显著下降，联合用药组尤为明显，结论：无毒性剂量米非司酮可以在体内增加COC1／顺铂细胞对顺铂的敏感性，作用机制与抑制GcSmRNA表达有关。     

羟基红花黄色素A对卵巢癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人顺铂耐药的卵巢癌A2780/DDP细胞株顺铂耐药性的逆转作用及具体机制。方法培养A2780/DDP细胞,接种至20只BALB/C雌性裸鼠,按随机数字表法分为对照组、红花组、顺铂组和联合组,每组5只,均采用腹腔注射给药的方式,对照组予0.9%氯化钠溶液,顺铂组按3mg/kg剂量给予顺铂,红花组按1.1g/kg给予HSYA,联合组予HSYA(1.1g/kg)联合顺铂(3mg/kg),每3天给药1次,连续给药4周。第5周后处死小鼠,解剖取瘤记录瘤重并计算抑瘤率,HE染色观察各组肿瘤的病理改变,Western blot检测Akt、p-Akt蛋白表达。结果对照组瘤重(4.71±0.17)g,顺铂组瘤重(3.53±0.28)g,抑瘤率25.08%,红花组瘤重(4.54±0.25)g,抑瘤率3.61%,联合组瘤重(2.76±0.17)g,抑瘤率41.36%。与对照组和顺铂组相比,联合组的肿瘤质量下降(P0.05),抑瘤率明显增加(P0.05);HE染色显示,与顺铂组比较联合组肿瘤坏死程度更高;Western blot结果示,对照组Akt蛋白相对表达水平为(0.61±0.11),顺铂组为(0.62±0.09),红花组为(0.42±0.10),联合组为(0.44±0.07)。与对照组比较,顺铂组Akt、p-Akt蛋白表达无统计学差异(P0.05),与对照组与顺铂组比较,红花组与联合组的Akt、p-Akt蛋白表达较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HSYA可能通过下调PI3K/AKT通路的关键组分Akt、p-Akt蛋白,来增强A2780/DDP对顺铂的化疗敏感性,逆转顺铂耐药。     

选择性COX-2抑制剂联合顺铂对肺癌新生血管的影响

目的 选择性环氧化酶-2（cyclooxtgenase-2,COX-2）抑制剂尼美舒利（Nimesulide,NIM）联合顺铂(Cisplatin,CDDP)对于肺癌A549裸鼠动物模型中肿瘤新生血管的影响。方法 （1）培养肺癌A549细胞,构建肺癌A549裸鼠移植瘤模型。（2）药物干预,对照组,尼美舒利组,顺铂组,尼美舒利与顺铂联合组,依据随机数字表法将研究 对象分为4组每组8只,观察一般状态。（3）用免疫组化检测肺癌A549裸鼠移植瘤内新生血管因子, 血管转换生长因子TGF-β、环氧化酶COX-2、碱性成纤维细胞生长因子bFGF,以明确尼美舒利单独或者联合顺铂对肺癌A549裸鼠移植瘤新生血管的影响及其机制。 结果（1）成功构建肺癌A549裸鼠移植瘤模型,裸鼠背部皮下形成圆形、椭圆形、不规则形结节,,无裸鼠建模死亡。（2）NIM+DDP组对肿瘤的抑制最强,抑瘤率最大,（P＜0.001）,有明显差异,有统计学意义。（3）NIM+DDP组的bFGF、TGF-β1的阳性表达最弱,NIM+DDP组和DDP组的阳性表达比较,（P＜0.001）,有统计学意义。（4）COX-2阳性表达呈对照组＞NIM组＞DDP组＞NIM+DDP组。结论（1）选择性COX-2抑制剂联合顺铂对肺肿瘤的生长有抑制作用,抑瘤率明显高于顺铂单药组。（2）选择性COX-2抑制剂联合顺铂对新生血管因子bFGF、TGF-β1、COX-2表达的抑制效果更显著,对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长的抑制更显著。     

肺岩宁方对人肺癌细胞系增殖及肿瘤坏死因子α诱导的白细胞介素6和白细胞介素8产物的影响

目的：探讨中药肺岩宁方含药血清对人肺癌细胞系A549细胞增殖及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor—α,TNF—α）诱导的A549细胞分泌自细胞介素6（interleukin-6,IL-6）和IL-8的影响。 方法：肺岩宁方含药血清培养A549细胞24、48和72h后,采用四唑单钠盐法检测肺岩宁方含药血清对A549细胞增殖的影响;肺岩宁方含药血清培养A549细胞48h后,酶联免疫吸附测定法检测肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的IL-6和IL-8分泌的影响,逆转录聚合酶链式反应检测IL-6和IL-8 mRNA表达水平的变化。 结果：肺岩宁方含药血清对A549细胞增殖具有明显的抑制作用。1μg／LTNF—α可明显提高A549细胞上清液中IL-6和IL-8的分泌水平,肺岩宁方含药血清与TNF-α共同作用后,可抑制IL-6和IL-8的分泌（P〈0．01）及IL-6、IL-8mRNA的表达（P〈0．01）。 结论：肺岩宁方含药血清对TNFα诱导A549细胞分泌IL-6和IL-8具有明显的抑制作用,这为其临床治疗肺癌提供了一定的实验依据。     

七叶灵方诱导裸鼠人肺腺癌A549移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究中药复方七叶灵方诱导人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用.方法:皮下接种人肺腺癌A549细胞,建立裸鼠移植瘤模型,随机分为不用任何治疗的对照组(A组)、化疗组(B组)、化疗加七叶灵治疗组(C组)和七叶灵治疗组(D组),每组12只,分别给予相应处理.治疗开始后每周测量肿瘤体积并换算成瘤重.采用原位细胞凋亡检测试剂盒,检测瘤组织凋亡细胞数.结果:A组瘤重显著高于其他各组(P＜0.05),C组、D组与B组比较亦有显著差异(P＜0.05).凋亡细胞数各组间具有显著差异(P＜0.05),D组瘤组织中的凋亡细胞数显著高于B组和C组(P＜0.05).A组则表现出早期细胞为高分化,到后期肿瘤组织坏死及部分细胞凋亡.结论:在裸鼠体内中药七叶灵方具有诱导A549细胞凋亡的作用.     

贝伐单抗对荷耐顺铂人肺腺癌A549/DDP裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的 探讨贝伐单抗联合或不联合顺铂对耐顺铂肺腺癌A549/DDP移植瘤生长的抑制作用.方法 建立裸鼠移植瘤模型,随机分成空白对照组(A组)、单药贝伐单抗组(B组)、单药顺铂组(C组)、联合用药组(D组)和联合半剂量组(E组)5组,连续用药4周.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率;免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(MVD);RT-PCR分析各组经治疗后凋亡基因bcl-2及耐药基因(LRP、GST-Π)mRNA表达情况.结果 与空白对照组比较,经贝伐单抗治疗组(B、D、E组)抑瘤率分别为20.96%、51.67%、50.95%,联合用药组(D、E组)效果最佳.经贝伐单抗治疗组微血管密度分别为18.6±1.14、13.6±1.14、14.4±0.55,联合用药组最为显著,而单药顺铂组与对照组在抑瘤率和微血管密度表达上均无差异(P=0.632).经贝伐单抗治疗组bcl-2 mRNA表达较对照组有显著差异(P＜0.001),但三组之间无差异(P＞0.05);五组之间在LRP、GST-Π mRNA表达上无明显差异(P＞0.05).结论 贝伐单抗对荷A549/DDP裸鼠移植瘤有抑制作用,联合顺铂用药有显著协同作用,同时提高A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与抑制肿瘤微血管形成、诱导细胞凋亡增加有关.     

染料木黄酮对卵巢癌HO-8910PM裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：观察植物雌激素染料木黄酮（GEN）与顺铂（DDP）联合应用治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的效应及其机制．方法：建立20只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型，随机分成4组，分别为对照组、GEN组、DDP组及GEN＋DDP组．4wk后处死裸鼠，计算抑瘤率，用Ⅷ因子抗原多克隆抗体测定肿瘤内微血管密度（MVD），用细胞增殖指数（PI）反映细胞增殖状态，并进行形态学观察．结果：DDP组及GEN组均可有效抑制卵巢癌移植瘤生长，二者联合应用有协同作用．GEN＋DDP组MVD和PI低于GEN组和DDP组（P〈0．01），3组均显著低于对照组（P〈0．01）．形态学观察可见GEN组和GEN＋DDP组细胞凋亡、凋亡小体及变性坏死增多，而对照组少见．结论：GEN对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤有明显抑制作用，且与DDP有协同作用；GEN对肿瘤细胞的作用，与抑制肿瘤细胞的增殖和肿瘤区新生血管的生长、阻断肿瘤血供有关．     

P13K抑制剂对肺癌Akt2、p-Akt表达影响的试验研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对肺癌Akt2、p-Akt表达的影响。方法体外实验是取对数生长期的A549细胞制备细胞爬片,体内实验先用裸鼠建立移植瘤模型,通过P13K抑制剂LY294002干预后,分别用免疫组织化学法和W estern b lot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002组移植瘤组织Akt2和p-Akt蛋白的表达用免疫组织化学法检测较对照组染色变淡,用W estern b lot法检测显示其蛋白表达量低于对照组。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制,P13K/Akt可能成为肺癌治疗的靶点。     

肺岩宁及其拆方对小鼠Lewis肺癌端粒酶活性的影响

目的:观察肺岩宁及其拆方对小鼠Lewis肺癌端粒酶活性的影响,探讨该复方各种治法在抑制肿瘤中的作用及机制。方法:72只小鼠接种Lewis肺癌细胞株造模,随机分为生理盐水对照组、肺岩宁组、益气组、养精组、益气养精组、抗癌组及化疗组,分别给予相应药物干预21d。测定小鼠抑瘤率和肺转移抑制率,应用荧光标记引物的TRAP法检测端粒酶活性。结果:在改善荷瘤小鼠皮下移植瘤瘤重上,肺岩宁组、抗癌组、化疗组较生理盐水组有明显差异(P<0.01)。在抑制肺转移灶上,化疗组、肺岩宁组、抗癌组较生理盐水组疗效有明显差异(P<0.01),而肺岩宁组与益气养精组无差异(P>0.05)。在抑制荷瘤小鼠端粒酶活性上,肺岩宁组、养精组、益气养精组、抗癌组、化疗组的端粒酶活性相对值较低,较生理盐水组有显著的统计学差异(P<0.01);益气组、养精组、益气养精组端粒酶活性相对值较高,较化疗组有显著统计学差异(P<0.01);与肺岩宁组比较,益气组、养精组、益气养精组、生理盐水组端粒酶活性相对值较高,有显著统计学差异(P<0.01)。结论:针对肺岩宁立方原则,益气、养精、解毒散结等治法的综合运用在抗瘤上存在相互协同作用,肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肺癌转移的机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

肺岩宁方对肿瘤坏死因子α诱导的人肺癌细胞系核转录因子κB基因表达的影响

目的：探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor—α,TNF—α）诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子KB（nuclearfactor—κB,NF—κB）基因表达的影响。方法：制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNFα组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κ及抑制性核转录因子（inhibitorxBa,IκBα）表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果：与对照血清比较．15％和20％肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．05,P〈0.01）。1μg／L TNF—α能够明显提高NF—κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达（P〈0．01）,而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义（P〈0．05）;肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF—κB重组质粒转染后的转录活性（P〈0．01）。结论：肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。。     

缺氧诱导因子-1α基因沉默逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的机制

目的：观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)沉默后人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP 的HIF-1α、多药耐药基因1 （MDR1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）mRNA及蛋白产物的表达,探讨HIF-1α逆转SKOV3/DDP耐药性的机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3（敏感组）及其顺铂耐药株SKOV3/DDP（耐药组）,部分耐药株转染HIF-1α干扰质粒 pshRNA-HIF（转染组）及对照质粒pshRNA-Control（对照组）。RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量;Western blotting和免疫组织化学法测定HIF-1α、P-gp（MDR1基因编码蛋白）和Bcl-2蛋白的表达量。结果：RT-PCR检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量明显低于耐药组（P<0.05)。Western blotting检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05) ;免疫组织化学法,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);MDR1、Bcl-2 mRNA及蛋白在敏感组与转染组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。HIF-1α表达与MDR1、Bcl-2 mRNA表达量均呈正相关关系（r=0.908,P=0;r=0.916,P=0);HIF-1α表达与P-gp、Bcl-2蛋白表达呈正相关关系(r=0.773,P=0.003;r=0.862,P=0）。结论：HIF-1α沉默逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药株SOV3/DDP耐药性可能与MDR1和Bcl-2表达降低有关联。
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肺岩宁方及其拆方对Lewis小鼠肿瘤肺转移与VEGF/KDR表达关系的影响

目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。