广西巴马小型猪和贵州小型香猪的DNA指纹分析

目的　应用DNA指纹分析的方法研究广西巴马小型猪和贵州小型猪的遗传背景。方法　采用ECL核酸直接标记和检测系统 ,以HRP标记JL 0 2多位点小卫星探针 ,对广西巴马小型猪和贵州小型猪基因组DNA的HinfⅠ或HaeⅢ酶切DNA片段进行Southern杂交 ,以化学发光法进行检测 ,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图。结果　广西巴马小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数为 11 7和 2 4 5 ;贵州小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数则为 15 8和 17 6。另外 ,广西巴马小型猪HinfⅠ和HaeⅢ酶切产生的不同个体DNA指纹的相似系数分别为 0 5 4± 0 0 7和 0 5 5± 0 0 8;而贵州小型猪则分别为 0 5 3± 0 0 4和 0 5 3± 0 0 7。结论　该探针适用于这两种猪的DNA指纹分析 ,不同酶切产生的DNA指纹图带数不同 ,但不同个体间相似系数的分析结果一致。同时说明这两种猪具有相当程度的种质均质性 ,符合封闭群动物的要求     

洛伐他汀缓释片在人体内的药代动力学研究

目的:研究洛伐他汀缓释片在人体内单次和多次口服给药后的药代动力学过程。方法:采用LC-MS/MS方法测定人血浆中洛伐他汀的浓度。采用正离子方式检测;扫描方式为选择离子反应监测(SRM)。20名男性健康受试者随机双交叉单次(40 mg)或多次(20 mg×6)口服洛伐他汀缓释片和普通制剂海立片,并于相应的时间点取血测定血浆中的药物浓度。结果:所建立的LC-MS/MS方法的线性范围为0.05~10.0 ng/mL,最低检测浓度为0.05 ng/mL。以海立片为参比对照,用面积法估算的单次和多次给药后洛伐他汀缓释片中洛伐他汀的相对生物利用度分别为(148.5±43.1)%和(140.7±32.8)%。估算单次给药后海立片和洛伐他汀缓释片的人体内洛伐他汀的MRT为(14.61±7.27)h和(29.72±17.22)h;tmax为(4.2±2.1)h和(12.3±7.5)h;cmax为(1.98±1.01)ng/mL和(1.64±0.62)ng/mL;t1/2为(12.16±5.18)h和(18.17±10.78)h。海立片和洛伐他汀缓释片的稳态药物浓度分别为(0.57±0.27)ng/mL和(0.80±0.43)ng/mL,波动度分别为(2.64±1.10)和(0.97±0.36)。结论:单剂量给药后洛伐他汀缓释片与海立片相比,产生的cmax比较平稳,tmax延迟,两种给药方式洛伐他汀缓释片的吸收程度均高于普通制剂。     

巴马小型猪的选育

5世代选育结果，0-4世代群体有效含量6.93,13.44,11.42,7.45,10.76,2-4世代群体近交系数9.18%,22.50%,35.22%，4世代3-7月龄体重9.60,12.47,16.40,20.26,35.54kg,4世代初产仔数8.64头，初生重0.55kg，3世代二产10.60头，0.56kg。巴马小型猪近交程度较高，毛色理想并趋于整齐，矮小体型及多产等，主要特性遗传性稳定，已达选育目标。     

巴马小型猪染色体核型

采用外周血淋巴细胞培养技术，对巴马小型猪的染色体作了核型分析。结果表明：巴马小型猪正常的二倍体细胞染色体数２ｎ＝３８，其性染色体为ＸＹ（♂）、ＸＸ（♀）。根据染色体形态、相对长度、臂比、着丝点指数，参照第一届国际家畜分带核型标准化会议（１９７６）制定的猪的染色体核型标准，将１８对常染色体分为Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ四个形态组，核型呈１０ｓｍ＋４ｓｔ＋１０ｍ＋１２ｔ。Ｘ染色体为中着丝点染色体，大小介于第８对和第９对染色体之间，Ｙ染色体为最小的中着丝点染色体。     

广西巴马小型猪体外循环建立

目的探讨广西巴马小型猪体外循环建立的方法。方法选用小型猪12头,随机分为两组（n=6）。实验组：在心包外过上腔静脉和下腔静脉的阻断带建立体外循环;对照组：在心包内过上腔静脉和下腔静脉的阻断带建立体外循环。结果两组建立体外循环所需的时间比较有统计学差异（P〈0.05）,实验组所用的时间短;两组的成功率比较无统计学差异。结论改进的广西巴马小型猪体外循环建立方法所需的时间更短,是一种更快捷和安全的方法。     

巴马小型猪在医学研究中的应用进展

广西巴马小型猪作为国内小型猪主要品种之一,具有遗传性稳定、多产、体重较小、体表多覆白毛等特征,组织器官及生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域：猪的心脏解剖与生理特点与人类高度相似,已被广泛应用于心血管系统研究中,在我国,巴马小型猪被用来构建心肌缺血、卵圆孔未闭等心血管疾病模型;猪具有杂食性及与人相似的脂质代谢,可用于研究内分泌疾病,巴马小型猪已用于糖尿病动物模型建立及其遗传易感性、并发症的防治研究等;巴马小型猪的消化系统与人类相似,利用此特点已建立阻塞性慢性胰腺炎、结肠穿孔、胆肠吻合等消化系统疾病模型;巴马小型猪除头、尾外,体表覆以白毛,这一特点使其成为研究皮肤创伤、烧伤修复等的理想动物;小型猪的牙齿解剖结构与人类相似,口裂大,可作为口腔医学研究中的理想动物,巴马小型猪已用来建立牙髓坏死模型及对上颌扩弓方式的研究;类似人的解剖、生理、病理使其成为较为适合的异种移植供体。在中医药研究方面,已用巴马小型猪分别建立了肝脏、脾脏、股动、静脉出血及头颈恶性肿瘤放疗后的腮腺损伤动物模型以研究中药制剂的疗效及机制。     

广西巴马小型猪的选育研究

广西大学王爱德等从1 987年至今历经1 7年,以广西巴马香猪作为原始材料,采用闭锁纯繁近交方式,选育出1 6世代适于实验用的、优异小型猪封闭群品系———广西巴马小型猪。1 987年底笔者从广西巴马县,将巴马香猪2头公、1 4头母作为零世代、原始基础群,引入原广西农学院牧试站内,进行“实验用小型猪的选育”的有关研究(国家自然科学基金和广西壮族自治区科委资助项目)。1 994年经项目鉴定专家组同意,将选育的实验用小型猪品系定名为“广西巴马小型猪”(GuangxiBA MAMini Pig) ,简称“巴马小型猪”。选育目标:体型尽量小;两头乌毛色整齐或白…     

洛伐他汀在巴马香猪体内的分布和排泄

目的研究洛伐他汀在巴马香猪体内的分布和排泄特点。方法以抗动脉粥样硬化药物洛伐他汀为模型药,选择健康6月龄雄性巴马香猪为实验对象,经灌胃途径给药(45 mg/kg或2.4 mg/kg),采用RP-HPLC方法测定各组织及体液中的药物浓度,并对其分布和排泄过程进行研究。血浆蛋白结合率通过透析法测定。结果给药后,洛伐他汀快速分布到贲门、胃、小肠、肝、大肠、胰、前列腺、肺、肾、心、肌肉、睾丸、肾上腺、膀胱、脑和脾。以胃、肠、肝组织中药物浓度较高。单次给药4h后,贲门、胃、小肠、肝、心、肾上腺、膀胱药物浓度同给药后1h相比略有下降,其余组织均高于1 h。血浆蛋白结合率为95%以上,同正常人血浆非常一致。96 h尿中累积排泄量为给药量的7.4%,原形药经胆汁及粪排泄量达到80%以上。结论洛伐他汀在巴马香猪体内同人的分布排泄和血浆蛋白结合率相似,均在组织中广泛分布,血浆结合率达到95%以上,主要经胆汁和粪排泄。     

人口服黄连素的药代动力学研究

本实验用ＨＰＬＣ方法研究了健康志愿者口服黄连素的吸收情况及药代动力学。结果表明，单次口服黄连素（３００ｍｇ／人），其血药浓度－时间数据用３Ｐ８７药代动力学程序处理，经自动拟合，黄连素口服后的药代动力学模型符合一室模型，Ｔ１／２（ｋａ）为０．８７±０．　０２６ｈ，Ｔ１／２（ｋｅ）为２．９４±０．１３ｈ，血药浓度达峰时间为２．３７±０．０４ｈ，峰浓为３９４．７±１５５．４μｇ／Ｌ。此结果表明，人口服黄连素后能被吸收，且达到了有效的血药浓度。     

AFLP技术用于巴马小型猪遗传多样性的研究

目的 评价巴马小型猪的遗传多样性。方法 用与接头对应的10条AFLP引物，扩增经PstⅠ酶切且与接头连接的17头巴马小型猪的基因组DNA，用从Internet网上下载的软件RAPD istance package version 1．04对结果进行分析。结果 共获得104个AFLP标记，单引物得到的标记数在3～20个之间，巴马小型猪群体内的相似系数为0．903(0．791～0．982)。其多态性位点的比率为29．8％；总的等位基因数为136个，平均每个位点的等位基因数为1．31个，基因型数为119，平均每个位点的基因型数为1．41。结论 该实验为评价巴马小型猪遗传多样性的多寡提供了相关的参数，准确评价尚待和普通猪对比研究后确定。     

RP—HPLC测定人血浆中洛伐他汀浓度及药动学研究

用ＲＰ－ＨＰＬＣ测定人血浆中洛伐他汀浓度。以甲醇－水（８３∶１７,Ｖ／Ｖ）为流动相,色谱柱采用ＨＹＰＥＲＳＩＬＢＤＳ－Ｃ１８（５μｍ）不锈钢柱,紫外２３７ｎｍ波长检测。血浆样品经环己烷－异丙醇（９５∶５）萃取浓缩后进样测定。洛伐他汀浓度在２．５～８０ｎｇ／ｍｌ范围内线性良好,ｒ＝０．９９６８。测定含洛伐他汀２０．０ｎｇ／ｍｌ的血浆样品,其日内（ｎ＝７）及日间（ｎ＝７）的ＲＳＤ分别为９．８％和８．５％。回收率平均为（１０１．３±５．５）％。测定了１０名健康志愿者单次ｐｏ洛伐他汀片剂８０ｍｇ后不同时间的血药浓度,计算了相应的药动学参数。     

巴马香猪、人和大鼠洛伐他汀体外代谢的比较

目的：体外研究巴马香猪、人和大鼠肝微粒体中洛伐他汀代谢的酶动力学差异，并用人体肝微粒体细胞色素P4503A（CYP3A）酶特异性抑制剂酮康唑（KCZ）进行抑制，观察抑制活性反应的差异，评估巴马香猪作为人体CYP3A酶代谢药物研究实验动物模型的可行性。方法：制备巴马香猪、人和大鼠的肝微粒体，构建肝微粒体与洛伐他汀的反应体系以及抑制剂抑制反应体系。利用RP—HPLC测定洛伐他汀代谢的变化，并对其相应活性值进行比较。结果：巴马香猪肝微粒体代谢洛伐他汀的酶动力学变化比大鼠更为与人体相似。人体CYP3A特异性抑制剂均可以显著抑制三者的代谢，但是巴马香猪代谢速率下降程度与人体接近。结论：巴马香猪与大鼠相比，更适用于作为人CYP3A酶代谢的相关药物研究的良好动物模型。     

蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因的比较

目的研究蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因表达量的差异。方法采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术,检测蕨麻猪与巴马小型猪心、肝、脾、肺、肾低氧反应基因表达量的变化。结果蕨麻猪的肾脏、脾脏指数低于巴马小型猪,蕨麻猪的心脏、肺脏指数高于巴马小型猪。蕨麻猪血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)与低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1,HIF-1α)在肺、肾中的表达量明显比普通猪高(P0.05或P0.01);促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)只在肺中比巴马小型猪高(P0.05)。结论不同物种脏器指数可能是物种对物质环境、能量环境、外界病原体、能量代谢需求等综合因素进化适应的结果。蕨麻猪低氧相关基因明显比巴马小型猪高,揭示在基因方面蕨麻猪具有较强的高原适应性。     

血清茶碱测定及其药代动力学

目的判断静注氨茶碱在体内的隔室模型,计算其药代动力学参数。方法用双波长紫外分光光度法测定家兔静注氨茶碱后的血清茶碱浓度,根据相关药代动力学理论研究其药动学。结果静注氨茶碱在体内符合两室模型,药动学方程为c=7.7e-2.58t 20.893e-0.1733。结论可以用紫外分光光度法测定茶碱血药浓度,在体内代谢符合两室模型,并可计算出其药动学方程。     

四个品种小型猪血液学指标测定及比较

目的 分析比较四个品种小型猪的血液学生物学特性.方法 分别选取上海地区饲养的巴马小型猪、贵州小型猪和版纳小型猪及陆川小型猪,每个品种雌雄各20头,3～6月龄,测量其血液生理、血清生化与血凝指标,然后进行单因素方差分析,并进行数据比较.结果 四个品种的小型猪血液生理14个指标差异有统计学意义(P＜0.05),血清生化12个指标组间差异有统计学意义(P＜0.05),血凝4个指标差异都有统计学意义(P＜0.05).分别对各品种群体数据进行比较分析,巴马小型猪群体雌雄间血液常规、血清生化和血凝指标差异显著(P＜0.05)的指标分别有6项、4项和3项,而贵州小型猪、版纳小型猪和陆川小型猪雌雄间差异指标较少或差异不显著.四品种小型猪相同性别间比较,也有较多指标差异显著.结论 测定和比较的巴马小型猪、贵州小型猪、版纳小型猪和陆川小型猪在血液学、血清生化和血凝等方面数据,为应用和选择小型猪开展相关生物医学和药物研究提供了基础数据.     

洛伐他汀预适应在大鼠急性心脏缺血再灌注损伤中的心肌保护作用研究

目的 探讨洛伐他汀(Lovastatin)预适应在大鼠急性心脏缺血再灌注损伤中的心肌保护作用机制.方法 将24只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分洛伐他汀组(A组),每天胃内直接灌注洛伐他汀15mg/kg,灌注时间2周;洛伐他汀复合L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(B组),每天胃内直接灌注洛伐他汀15mg/kg,同时每天腹腔内注射L-NAME 30mg/kg,共2周;模型对照组(C组).2周后建立在体急性缺血再灌注心脏模型,观察心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达以及心肌细胞的凋亡情况.结果 洛伐他汀能明显上调缺血再灌注时心肌组织内eNOSmRNA表达(t=0.006,P＜0.01);下调iNOS mRNA的表达(t=0.0002,P＜0.01);明显降低缺血再灌注所导致的心肌细胞凋亡指数(t=0.03,P＜0.05).结论 洛伐他汀预适应对大鼠心脏急性缺血再灌注时具有心肌保护作用,与其在缺血再灌注过程中eNOSmRNA表达提高及iNOSmRNA表达抑制有关.     

蕨麻小型猪与巴马小型猪高原多脏器功能障碍综合征模型的比较研究

目的比较不同海拔地区两种小型猪高原多脏器功能障碍综合征(H-MODS)模型存在的差异,探讨建立H-MODS模型的理想动物。方法利用高原土生蕨麻小型猪与平原巴马小型猪,以内毒素(LPS)建立HMODS模型。检测不同时点血液生理生化指标的变化,并观察肺脏组织病理学变化。结果巴马小型猪模型的死亡率明显高于蕨麻小型猪;生理生化各指标的变化基本相同,但蕨麻小型猪的变化较平缓。在24 h与48 h肺脏均出现严重病理改变,但巴马小型猪较蕨麻小型猪更严重。结论不同海拔地区的两种小型猪均可成功建立HMODS模型,同时蕨麻小型猪由于自身高原生物特性对H-MODS模型的复制更加准确安全,避免高原环境的外在因素的影响。     

塞来昔布联合洛伐他汀下调前列腺癌细胞小窝蛋白-1的表达及下游信号分子的激活

目的探讨塞来昔布和洛伐他汀对前列腺癌细胞小窝蛋白-1表达及下游信号分子的影响。方法体外培养前列腺癌细胞PC-3,Mrrr检测塞来昔布和洛伐他汀对其增殖的影响。用IC50浓度的塞来昔布和洛伐他汀与PC-3孵育,Westernblot检测小窝蛋白-1的表达以及Akt、ERKI／2和STAT3的磷酸化水平。结果PC-3细胞经洛伐他汀和塞来昔布处理24h后,IC50值分别为25μM和50μM;塞来昔布或洛伐他汀单独处理PC-3细胞24h,能轻微下调小窝蛋白-1的表达,当两者联合使用时,能使小窝蛋白-1水平进一步降低;洛伐他汀、塞来昔布能抑制EGF诱导的Akt、ERK1／2和STAT3磷酸化,当两者共同处理PC-3细胞时,能进一步抑制其磷酸化水平。结论塞来昔布能协同洛伐他汀下调前列腺癌细胞小窝蛋白-1的表达,从而可能影响下游信号分子的激活。     

辛伐他汀与洛伐他汀的降血脂作用比较

目的 在两种病理模型上比较辛伐他汀与洛伐他汀的降血脂作用。方法 通过食用高脂饲料制备食饵性高血脂大鼠模型和通过腹腔注射Triton WR1339制备高胆固醇血症大鼠模型。结果 辛伐他汀12mg/kg,6mg/kg可显著降低食饵性高血脂大鼠血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）,胆胆固醇和肝甘油三酯水平,升高其血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）;并可显著降低Triton WR1339所高胆固醇血症大鼠血清总胆固醇和肝胆固醇。洛伐他汀的这些作用明显弱于相同剂量的辛伐他汀,且洛伐他汀无明显升高食饵性高血脂大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇的作用。结论 在本实验条件下,辛伐他汀的降血脂作用明显强于同剂量的洛伐他汀。