FXR和BSEP在阻塞性黄疸大鼠肝细胞中的表达及其意义

目的：研究胆盐输出泵（BSEP）在阻塞性黄疸肝细胞表达过程中的变化及其与阻塞性黄疸高胆汁酸血症的关系,探讨法尼酯衍生物X受体（FXR）的活性及内毒素（ET）对BSEP表达的影响。方法：36只健康SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、胆总管结扎组（CBDL）和胆总管结扎再通组（BR）,建立大鼠阻塞性黄疸模型,检测各时相点血清总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）和ET水平;用免疫组织化学法观察各组大鼠肝组织FXP和BSEP蛋白的表达,用平均积分光密度(IOD)法检测FXR和BSEP蛋白的表达水平;线性相关分析FXR、TBA、ET和BSEP之间的定量关系。结果：Sham组大鼠术后各时间点血清TBIL、TBA及ET水平无明显变化（P>0.05）;CBDL组大鼠胆总管结扎术后,TBIL、TBA及ET水平显著增高（P<0.01）;BR组大鼠胆道再通术后TBIL、TBA及ET水平逐步下降,术后7 d组TBIL、TBA接近Sham组水平（P>0.05）,ET仍高于Sham组水平（P<0.05）。肝组织中FXR蛋白表达水平在Sham、CBDL和BR组中呈逐渐缓慢增高趋势,但各组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。肝组织中BSEP蛋白表达水平在Sham和CBDL组中呈下降趋势,BR组先下降后上升,但与Sham组比较差异无统计学意义（P>0.05）。FXR蛋白表达与血清TBA水平呈正相关关系（r=0.303,P<0.05）,FXR与BSEP蛋白表达呈负相关关系（r=－0.359,P<0.05）,BSEP蛋白表达与血清ET水平呈高度负相关关系（r=－0.412,P<0.01）。结论：阻塞性黄疸时FXR在BSEP表达调控中并非起主要作用,而是ET致炎症介质的释放下调了BSEP表达。     

法尼酯X受体可下调肝细胞中肝型脂肪酸结合蛋白的表达

目的研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对肝型脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid-binding pro-tein,L-FABP)表达的影响。方法用终浓度为50、100μmol/L的鹅脱氧胆酸(chenodesoxycholic acid,CDCA)以及1、5μmol/L的GW4064分别处理人胚胎肝细胞LO2和人肝癌细胞株HepG2后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FXR特异靶基因小异二聚体配体(small heterodimer partner,SHP)和L-FABP mRNA表达,再用Western blot法检测L-FABP蛋白水平的变化。结果LO2和HepG2细胞经FXR特异性激动剂CDCA以及GW4064刺激后,细胞内的SHP mRNA水平均明显升高,表明FXR在这两种细胞中是有功能活性的;而L-FABP mRNA和蛋白水平显著下降(P<0.05)。结论激活后的FXR可抑制L-FABP的表达活性。     

高胆固醇摄入对新西兰兔胆汁酸代谢的影响

 目的 观察2周高胆固醇食物摄入对新西兰兔胆汁酸经典合成途径基因调节的影响。方法 20只新西兰兔随机分为对照组和高胆固醇组,分别喂饲普通兔粮及高胆固醇兔粮2周,测定实验前后血清总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、胆汁酸（bile acid,BA）及肝脏胆固醇7α羟化酶（cholesteral 7α-hydroxylase,CYP7A1）活性及mRNA、小分子异源二聚体伴侣（short heterodimer partner,SHP）mRNA、胆盐输出泵（bile salt export pump,BSEP）mRNA和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）mRNA、胆固醇酯转移蛋白（cholesteryl-ester transfer protein,CETP）mRNA。结果 高胆固醇组TC、LDL、BA均较对照组升高（P<0.05）;高胆固醇组CYP7A1活性及mRNA均较对照组降低（P<0.05）;高胆固醇组SHP mRNA、BSEP mRNA均较对照组升高（P<0.05）;胆固醇组ABCA1 mRNA、CETP mRNA均较对照组升高。结论 高胆固醇摄入后肝脏FXR、LXR受体均被激活,CYP7A1活性下降,胆汁酸经典合成减少。     

婴儿肝外胆道闭锁肝组织MRP2及FXR蛋白的表达及其意义

目的探讨肝外胆道闭锁(EHBA)婴儿肝组织中多药耐药相关蛋白2(MRP2)、法尼醇受体(FXR)蛋白的表达及其与胆汁淤积的关系。方法将临床和病理诊断为EHBA的20例患儿肝组织作为EHBA组,肝移植手术中成人供体的肝组织10例作为对照组,比较两组患者肝功能指标;采用免疫组织化学法检测肝组织中MRP2、FXR的表达情况,并进行病理图像分析。结果 EHBA组患儿血清总胆红素、直接胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)浓度明显高于对照组(P<0.05)。对照组和EHBA组肝组织MRP2蛋白吸光度(A)值分别为0.16±0.04和0.10±0.02,对照组和EHBA组肝组织FXR A值分别为0.15±0.06和0.06±0.02,EHBA组肝组织MRP2、FXR表达水平明显低于对照组(P<0.05),MRP2A值与血清γ-GT浓度呈负相关(r=-0.415,P<0.05)。FXR与MRP2的表达呈正相关(r=0.468,P<0.05)。结论 EHBA患儿肝组织MRP2表达降低可减少胆汁流,加重胆汁淤积,MRP2的下调可能与FXR相关。     

三物白散通过影响FXR表达逆转Th1/Th2漂移发挥抗肝癌免疫应答作用

目的:探讨三物白散干预肝癌原位移植瘤小鼠Th1/Th2细胞因子水平、回肠组织中法尼醇X受体(farnesoid X re-ceptor,FXR)的表达及其和肠道菌群间的关系.方法:将ICR小鼠随机分为5组,即空白组、模型组、三物白散(56.47 mg· kg-1)组、万古霉素(5 mg· kg-1)组、消胆胺(2％消胆...     

胆道梗阻肝脏部分切除后肝细胞周期素及其依赖性激酶mRNA的表达变化

目的 检测胆道梗阻肝脏部分切除术（PH）后肝细胞周期素（cyclin)D1、E及细胞周期素依赖性激酶CDK2、CDK4 mRNA的表达变化。方法 Wistar大鼠随机分为正常70％肝部分切除组（N－PH）、胆道梗阻（BDO）胆流再通（RBF）70％PH组（BDO－PH）及胆道梗阻胆流再通组（BDO－RBF）。RT－PCR法检测肝细胞cyclin D1、cyclin E mRNA及CDK2、CDK4 mRNA表达。结果 BDO－PH后肝细胞cyclin D1 mRNA和CDK4 mRNA、 cyclin E mRNA和CDK2 mRNA表达变化时限一致，其表达增长缓慢，表达高峰晚于N－PH组12－24h，分别于70％PH后24h及48h达到高峰，且其高峰表达值亦明显低于N－PH组。结论 胆道梗阻大鼠70％PH后肝细胞cyclin D1 mRNA、clcin E mRNA及CDK2 mRNA、CDK4 mRNA表达高峰延后，且表达量减少。     

脂肪肝血清总胆汁酸检测43例分析

目的 :探讨血清总胆汁酸的测定对脂肪肝的诊断价值。方法 :采用酶偶联连续监测法 ,检测 43例脂肪肝患者空腹、餐后 2h血清总胆汁酸 (totalbileacids ,TBA) ,并以 5 0名正常献血员作对照组。结果 :43例脂肪肝、5 0名对照组的空腹及餐后TBA活性值分别为 38.5 8± 16 .42 μmol/L、49.30± 2 0 .44 μmol/L和 5 .2 1± 3 .15 μmol/L、5 .44± 3.2 3μmol/L ,空腹及餐后 2h的TBA活性与对照组差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :血清TBA有助于脂肪肝的诊断 ,并能帮助临床医师动态观察脂肪肝的发生、发展及预后情况 ,特别是餐后 2h的TBA ,更能诊断轻度肝细胞损伤 ,为脂肪肝早发现、早治疗提供可靠依据     

FXR、BSEP在ICP胎盘胆酸转运中的作用机制研究

目的 研究胎盘在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）胆汁酸转运中的作用，从胎盘角度探讨ICP的发病机制。方法 采用免疫组化法测定ICP（ICP组）和正常晚期妊娠（对照组）胎盘上法尼醇X受体（FXR）、胆盐输出泵（BSEP）的表达，同时用放免法测定母体静脉血和脐静脉血甘胆酸（CG）水平。结果 （1）ICP组母血CG、脐血CG均明显高于正常妊娠组（P〈0．05）；ICP组脐血CG与母血CG水平具有明显相关性（r=0．522，P％0．01），但脐血明显低于母体水平，二者差异有统计学意义。而正常组脐血与母血CG差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）首次在胎盘上发现有FXR的表达，其表达水平在ICP及正常妊娠胎盘差异有统计学意义（P〈0．05）。（3）BSEP在正常妊娠胎盘上的表达明显增高，而在ICP胎盘表达减低。结论 胎盘存在胆酸的载体转运．在ICP时，胎盘的这种转运可能发生了改变；胎盘上FXR、BSEP的表达异常引起的胆酸转运改变可能是ICP发病机制之一。     

法尼酯X受体对脂肪酸合酶表达的影响

目的 探讨法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对脂肪酸合酶(fatty acid synthetase,FAS)表达的影响.方法 用FXR激动剂CDCA作用人肝癌细胞株(HepG2),应用RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白质水平检测FAS的表达情况.结果 用不同浓度的CDCA(25、50、75 μmol/L)分别作用于HepG2细胞,6、12、24、48 h后,FAS mRNA和蛋白质水平呈时间和剂量依赖性下调.结论 FXR激动剂可抑制脂肪酸合酶的表达.     

肝胆疾病患者血清总胆汁酸水平检测的临床意义

目的：探讨人体血清总胆汁酸水平在肝胆疾病诊断中的临床应用价值。方法：对７２３例各型肝胆疾病患者血清标本进行总胆汁酸测定,其结果与正常对照组作统计学比较。结果：急性肝炎,肝癌,肝硬化,慢性活动性肝炎及胆汁淤积组血清总胆汁酸水平与正常对照组有非常显著差异（Ｐ〈０．０）。结论：人体血清总胆汁酸水平是反映肝实质损伤的一项重要指标。     

法尼酯X受体对肝脂酶表达及活性的影响

目的 探讨法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对肝脂酶(hepatic lipase,HL)表达及活性的影响.方法 用FXR激动剂CDCA作用人肝癌细胞株(HepG2),用RT-PCR和Western blotting检测HL的表达情况.此外,用FXR激动剂CDCA处理C57BL/6小鼠,采用总脂酶测试盒检测HL的活性.结果 用不同浓度的CDCA(25、50、75μmol/L)分别作用HepG2细胞,6、12、24、48h后HL的Mrna和蛋白质水平呈时间和剂量依赖性下调.同时,用不同浓度的FXR激动剂CDCA(10、20、50、90、150mg/kg)处理C57BL/6小鼠7d后,测定小鼠HL的活性呈剂量依赖性下降.结论 FXR激动剂可抑制肝脂酶的表达及活性.     

大鼠ALPPS术后残肝再生与Wnt2蛋白表达关系的研究

目的 探讨大鼠联合肝脏分割和门静脉结扎分阶段肝切除术(A LPPS)后残余肝再生Wnt2蛋白的表达变化,进一步了解肝再生过程中的分子机制.方法 选取200 ～ 240g健康SD雄性大鼠40只,随机分为ALPPS组和假手术(Sham)组;Sham组仅游离出门静脉各分支,不结扎即关腹;ALPPS组行大鼠肝左外叶、左中叶、右叶门静脉分支结扎,切除尾状叶,保留肝右中叶分支,并行肝中叶实质离断.分别于术后1、2、4、7d处死5只大鼠,称取大鼠肝右中叶重量,计算肝再生率;光学显微镜下观察肝右中叶细胞的形态学变化,免疫组化法检测肝右中叶Ki-67和Wnt2蛋白表达变化,并进行统计分析.结果 ①ALPPS术后保留侧肝脏开始再生,第2天肝再生率升高最快,随后肝再生率升高速度逐渐降低,第7天与Sham组相比肝再生率升高速度两者相近;②ALPPS术后Ki-67与Sham组比较,第1天开始升高,第2天达到最高,此后逐渐降低,第7天有少量阳性细胞,与Sham组相比差异无统计学意义;③Wnt2阳性表达主要在中央静脉周围,可能与肝干细胞的产生相关;与Sham组相比,肝右中叶Wnt2蛋白在ALPPS术后第1天即开始升高,第2天达到最高,然后逐渐降低,第7天时仅有少量表达,与Sham组相比差异无统计学意义;④大鼠肝脏ALPPS术后Wnt2的表达与术后Ki-67的表达呈正相关性.结论 Wnt2在ALPPS术后肝脏再生及肝干细胞表达过程中起重要的调控作用.     

血清前白蛋白和总胆汁酸联合检测在肝病中的临床价值

目的探讨血清前白蛋白（PAB）和总胆汁酸（TBA）在肝病中的临床价值。方法分别检测急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者及正常对照组的血清PAB和TBA,并进行统计学分析。结果血清前白蛋白在各肝病中均显著低于对照组（P〈0.01）,而血清TBA则明显高于对照组（P〈0.01）。结论可见联合检测血清PAB和TBA,有助于肝病的诊断、疗效的观察以及预后的判断。     

他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响

目的:观察他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生的影响.方法:建立大鼠部分肝(65%)移植模型,并随机分为对照组、他克莫司大剂量组(0.1 mg·kg-1·d-1)和他克莫司小剂量组(0.05 mg·kg-1·d-1),每组各24只.受体于术前3 d起肌注给药,每天1次,直至术后.观察术后第1、2、3、5天肝细胞有丝分裂指数(MI)、增殖细胞核抗原标记指数(PCNA LI),速率法检测血清胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)等指标.结果:肝移植术后的肝细胞有丝分裂的高峰期出现在术后48 h,他克莫司显著提高了大鼠减体积肝移植术后48 h MI及PCNA LI(P＜0.05,P＜0.01);大剂量实验组术后48 h PCNA LI高于小剂量组(P＜0.05);两种剂量组的TB、ALT没有明显改变.结论:他克莫司对大鼠减体积肝移植后肝再生有促进作用,且该作用有剂量依赖性,同时肝脏毒性较小.     

Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤和肝再生中的作用

Toll样受体（TLR）是近年来倍受关注的一种病原识别受体，可特异地识别病原相关分子模式，通过激活信号级联反应产生细胞因子和相关刺激因子，从而在天然免疫和获得性免疫中发挥重要的桥梁作用。近年来，TLR4在肝脏缺血/再灌注（I/R）损伤等非病原微生物性炎症和肝再生中的作用也日益受到重视，已知其参与肝脏I/R损伤的部分炎症反应，但其是否参与肝再生过程有待进一步研究。     

肝纤维化大鼠部分肝切除后不同时间点肝细胞再生与胶原表达

目的研究肝纤维化大鼠部分肝切除(PH)后不同时间点肝细胞再生与胶原纤维表达。方法雄性SD大鼠84只分为对照组和肝纤维化组,每组42只,分别在PH后12 h、1 d、3 d、5 d、7 d和14 d取材,苏木精伊红(HE)染色、Masson染色,观测肝再生指数、肝细胞核分裂相和肝组织胶原表达。结果(1)肝再生指数:对照组术后1~5 d迅速升高达峰值,并维持至14 d;肝纤维化组术后1~3 d迅速升高,5~7 d缓慢递增至峰值,术后14 d又略有下降;(2)肝细胞核分裂相:对照组肝细胞核分裂相先增多后减少,术后缓慢增加,术后1 d迅速升高,于术后3 d最高,此后逐步下降。肝纤维化组肝细胞核分裂相较少,肝部分切除后稍有增多,术后3 d最多,而后略有减少并维持到术后14 d;(3)肝组织胶原表达:对照组术后胶原表达缓慢增加,14 d到达峰值;肝纤维化组胶原纤维术后12 h~5 d维持高表达,在术后1 d达峰值,术后5 d迅速下降,14 d降至最低。肝纤维化组各时间点胶原表达均高于对照组(P<0.05)。结论肝纤维化大鼠肝部分切除后,术后1~7 d肝再生达到高峰,肝细胞再生能力较正常大鼠差,胶原表达术后各时间点均高于正常大鼠。     

Changes of gastrointestinal myoelectric activity and bile acid pool during cholesterol gallstone formation in guinea pig

Ithasbeenknownthatenterohepaticcirculationofbileacidsisessentialforregularcyclingofmigratingmotorcomplex(MMC).Animportantcomponentofthe enterohepaticcirculationistheactivereabsorptionof conjugatedbileacidsintheterminalileum,withspecial referencetobileacidpoolsizethatmaybedefinedasthe totalmassofbileacidsintheenterohepaticcirculation. However,becauseoftechnicaldifficultiesinmeasuringof bileacidpoolsizeinhumanbeing,theroleofthebile acidpoolhaslittlebeeninvestigated,andtheexact mechanismofchange…     

TCTP mRNA在肝再生中的表达及其生物学意义

目的：探讨翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）mRNA在肝再生中的表达情况和生物学意义.方法：对健康成年雄性SD大鼠进行2/3部分肝切除以建立肝再生模型,分别于肝切除术后不同时间点收集再生肝组织,在显微镜下进行有丝分裂指数评价,利用流式细胞术分析细胞周期分布变化;半定量RT-PCR法检测TCTP mRNA的表达.结果：肝细胞有丝分裂指数在术后3～12h明显升高.细胞周期分析显示,肝切除术后1h呈现G0/G1向S期迁移,G2/M期细胞比例在3h呈现升高,6h升高最为显著.TCTP mRNA的表达在肝切除术后1h时轻微上调,在3～12h呈显著升高,之后下降至初始水平.结论：在肝再生组织中TCTP mRNA表达呈动态变化,可能与有丝分裂和细胞增殖密切相关.     

阻塞性胆汁淤积大鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶和核受体FXR、SHP表达变化

目的:通过建立梗阻性黄疸动物模型,观察胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7alpha-hydroxylase,CYP7A1)、类法尼醇X受体(farnesoid Xreceptor,FXR)及小异源二聚体伴侣受体(small heterodi mer partner,SHP)的表达变化,并分析CYP7A1和FXR、SHP之间的关系。方法:采用胆总管结扎术制备大鼠梗阻性黄疸模型,分别于术后1、3、14 d麻醉后放血处死。取大鼠肝脏,抽提总RNA,采用实时定量RT-PCR检测CYP7A1 mRNA表达;提取肝细胞核蛋白,采用蛋白质印迹技术检测FXR和SHP蛋白表达。结果:与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞CYP7A1 mRNA表达明显增强,FXR和SHP蛋白表达同步降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论:CYP7A1表达增强可能与FXR、SHP表达减弱有关。     

活化的Kupffer细胞对肝硬变肝脏细胞再生功能的影响

目的：通过对肝硬变大鼠行肝部分切除术基础上，体外活化Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞（ＫＣ），观察其对肝细胞再生过程的影响。方法：分为肝硬变大鼠部分肝切除术组（Ｃ－ＰＨ）、正常大鼠部分肝切除术组（Ｎ－ＰＨ）和假手术组（ＳＯ）。皮下注射四氯化羰油溶液加口服乙醇制作大鼠肝硬变模型，切除大鼠肝脏的左叶和中叶。观察时相为大鼠术后６ｈ，行＾３Ｈ－ＴＤＲ掺合法，＾Ｈ－亮氨到的测定，用ＬＰＳ体外活化ＫＣ，观察其对肝再生过程的