人和大鼠胸主动脉成纤维细胞的原代培养

目的培养成纤维细胞,建立不同种属来源的胸主动脉成纤维细胞的培养方法并比较其形态差异。方法用消化法和贴壁法分离不同来源的成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24h后细胞全部贴壁,48h后人胸主动脉成纤维细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而大鼠胸主动脉的成纤维细胞生长的相对较慢。结论用Ⅰ型胶原消化动脉的成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。     

人成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的建立不同组织来源成纤维细胞的培养方法并比较其培养差异。方法用消化法和贴壁法分离人胚胸主动脉成纤维细胞与人胚肺成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养的细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24 h后人胚胸主动脉成纤维细胞全部贴壁,48 h后细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而消化的人胚肺组织中细胞形态不一,经继续培养4～5代后,培养物完全由成纤维细胞构成。结论用胶原酶Ⅰ消化人胚胸主动脉成纤维细胞效果好,而用胰蛋白酶液消化人胚肺成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。     

大鼠结肠原代成纤维细胞的分离、培养和鉴定

目的：建立简单高效的大鼠结肠成纤维细胞体外原代培养和鉴定方法,为进一步研究结肠纤维化疾病提供细胞模型。方法：取成年雄性Wistar大鼠结肠组织,采用组织块贴壁法进行成纤维细胞体外原代培养,胰酶联合差速组织块贴壁培养法分离成纤维细胞,HE染色观察细胞形态表现,免疫组织化学法观察细胞中波形蛋白（Vimentin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、S100钙结合蛋白A4（S100A4）和E钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,并与大鼠胸主动脉平滑肌A7R5细胞对比进行鉴定。结果：结肠组织块贴壁培养8d后成纤维细胞爬出,12d进入增殖时期,15~20d基本长满。倒置显微镜下观察,细胞呈扁平多突的纺锤形或星形;HE染色,成纤维细胞核大,卵圆形,着色浅,核仁明显。免疫组织化学染色,成纤维细胞Vimentin呈阳性表达,α-SMA、S100A4和E-cadherin均呈阴性表达;对照组大鼠胸主动脉平滑肌A7R5细胞S100A4呈阴性表达,α-SMA、Vimentin和E-cadherin均呈阳性表达。结论：采用胰酶联合差速组织块贴壁培养法成功原代培养出大鼠结肠成纤维细胞。     

优化贴壁法人皮肤成纤维细胞的原代培养

目的:优化贴壁法原代培养人皮肤成纤维细胞的条件,建立稳定?经济?高效可行的人皮肤成纤维细胞培养方法?方法:采用包皮环切术后皮肤组织,剪成均匀组织块后贴壁,皮肤边缘长出薄层致密细胞团后胰酶消化?传代,并对所培养的细胞进行形态学观察及细胞免疫荧光鉴定?此方法与酶消化法相对照?结果:优化贴壁法成功率100%,取得组织后2 d沿皮肤边缘均开始生长高密度类圆形细胞层,在1周内可获得高质量?高数量的细胞,传代贴壁后经镜下形态观察及细胞免疫荧光染色确定为皮肤成纤维细胞?结论:较之酶消化法,优化贴壁法细胞存活率高,活性及纯度好?该方法可稳定?经济地获得足够数量的细胞?     

组织贴壁法原代培养人皮肤瘢痕成纤维细胞

目的：探索和建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,为皮肤瘢痕体外研究提供平台。方法：采用组织块贴壁法进行瘢痕成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,CO2浓度为5%,饱和湿度下培养。结果：皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,18d～20d可传第一代,以后每7d～10d可传一代,细胞形态为长梭形。结论：培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究。     

人皮肤成纤维细胞原代培养方法的改良

目的：改良人皮肤成纤维细胞培养方法。方法：采用培齐后组织块消化法(简称改良法)培养成纤维细胞，以组织块贴瓶法(简称贴瓶法)作为对照。结果：改良法成功率为100％，43d左右成纤维细胞增殖形成单层并进行第1次传代；贴瓶法成功率为66．7％，47d左右成纤维细胞增殖形成单层并进行第1次传代结论：改良法是一种可行的成纤维细胞培养方法。     

原代人牙周膜成纤维细胞的培养及培养方法的改进

目的：探讨如何提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率。方法：组织来源于11～15岁青少年因正畸而拔除的前磨牙，刮取牙根中1／3的牙周膜组织，组织贴壁培养法进行培养采用冠根分离控制取材中的污染，首次传代前进行细胞分散的方法来提高传代的成功率，并对培养细胞的形态及超微结构进行了观察。结果：经免疫组化染色证实所培养的细胞为牙周膜成纤维细胞，通过冠根分离法可有效的控制组织污染，首次传代前进行细胞分散可提高细胞传代成功率，从而使细胞培养成功率提高。结论：获得人牙周膜成纤维细胞，培养成功率在15％～20％。     

裸鼹鼠成纤维细胞原代培养方法的建立

目的建立裸鼹鼠成纤维细胞的原代培养方法,研究裸鼹鼠成纤维细胞的生长特性。方法结合传统的消化培养法和组织培养法进行裸鼹鼠和小鼠成纤维细胞原代培养,CCK-8（cell countingkit）细胞计数比较研究两种物种成纤维细胞的生长速率和细胞周期。以不同浓度接种裸鼹鼠肝脏成纤维细胞,CCK-8计数细胞24h、72h、96h、144h细胞密度。结果结合消化培养法和组织培养法两种细胞原代培养方法,裸鼹鼠及小鼠成纤维细胞的生长状态良好。裸鼹鼠成纤维细胞的增殖速率显著高于小鼠成纤维细胞,处于对数生长期的细胞比例与小鼠比较,显著较高。以1．5×10^4／ml以上的浓度接种裸鼹鼠成纤维细胞能使细胞在两天内进入细胞生长对数期。结论结合消化培养法和组织培养法的原代培养方法能提高细胞原代培养的效率,裸鼹鼠成纤维细胞的增殖能力显著高于小鼠。     

人皮肤成纤维细胞原代培养中组织块法及其注意事项

0引言 成纤维细胞是皮肤组织受损后的主要修复细胞.正常情况下,其处于相对静止状态,当皮肤受损或发生某些病变时,成纤维细胞表现为增生活跃和代谢旺盛[1].近年来,国内已有一些科研单位开展皮肤成纤维细胞的培养技术,以获得在体外稳定生长的正常皮肤成纤维细胞,从而为自体皮肤成纤维细胞的基因治疗和相关疾病的研究提供充足、可靠的靶细胞[2].国内各实验室在进行成纤维细胞原代培养时方法不一,多以组织块法和酶消化法为主.我们通过应用组织块法进行皮肤成纤维细胞原代培养而获得大量稳定细胞,并总结出皮肤成纤维细胞原代培养中组织块方法的注意事项,为今后进行细胞培养起到了一定的指导作用.     

一种改良宫颈癌相关成纤维细胞原代培养方法的建立

目的:通过对比并改良常见的原代(CAFs)细胞培养方法,建立一种成功率较高的宫颈癌相关成纤维细胞(CAFs)原代培养的方法。方法:取确诊为宫颈癌患者的活检或手术标本,通过对消化时间、重悬液量及培养基血清浓度进行改良原代细胞培养,观察细胞生长状况,并比较其与传统组织块贴壁法和酶消化法的细胞生长率。运用时间差酶消化及反复贴壁法进行分离纯化后,用免疫荧光的方法对宫颈癌相关成纤维细胞的纯度进行鉴定。结果:改良培养法消化时间为30min,血清浓度为20%时成功率最高(66.67%)。反复运用时间差酶消化及反复贴壁法可以得出纯度较高的宫颈癌相关成纤维细胞。结论:本研究成功建立了一种成功率较高的宫颈癌相关成纤维细胞改良培养方法,为后期探讨CAFs在肿瘤形成、进展中的作用打好实验基础。     

SD乳鼠海马神经细胞原代培养方法的探讨

目的 寻求一种简单、廉价的原代SD乳鼠海马神经细胞培养方法.方法 采用胰蛋白酶消化法制备游离海马神经细胞悬液,进行培养.结果 通过多次探索、观察、成功的进行了原代海马神经细胞培养.结论 本方法适合一般实验室开展海马神经细胞培养.     

卡托普利对糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶基因表达的影响及其意义

目的探讨卡托普利对糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶基因表达的影响及其意义。方法建立糖尿病大鼠模型,分为卡托普利干预组和对照组,15周后处死大鼠,从肾脏皮质抽提mRNA,逆转录分别用Cy5和Cy3标记,成为两组cDNA探针。cDNA探针与基因芯片杂交,扫描仪扫描,用软件进行分析。结果与对照组相比,干预组醛糖还原酶基因表达下调。结论卡托普利可能通过下调醛糖还原酶的表达产生肾脏保护作用。     

新生大鼠中脑黑质神经细胞的原代培养

对新生1天大鼠中脑黑质神经细胞进行原代培养，以建立稳定的神经细胞培养模型。通过光镜对培养各阶段的神经细胞系统地观察，描写了它们的生长发育过程和形态特征，同时用特异性诱发荧光技术和酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学方法，进一步确定培养的黑质神经细胞的化学性质。本方法与通常从胚胎鼠取材比较，具有难度小，取材范围大的优点。     

试验相关因素对SD大鼠血液学指标的影响

目的了解麻醉剂和应激反应对动物生理方面的影响,为动物福利、化合物的毒性检测方法规范化研究提供了可资借鉴的经验。方法选择SPF级SD大鼠为试验动物,按性别(A)、禁食时间(B)、麻醉方式(C)和采血方式(D)4个因素,根据不同因素交互影响分为24组,采集各组SD大鼠血液标本测定血液红细胞计数、血红蛋白水平、白细胞计数及其分类等指标。结果各因素对白细胞计数结果影响的主次顺序为DCAB,各因素水平白细胞计数结果是雄性大鼠雌性大鼠,静脉血动脉血,水合氯醛戊巴比妥钠不麻醉。各因素对白细胞分类结果影响的主次顺序为CD=A=B,各因素水平白细胞分类结果是水合氯醛戊巴比妥钠=不麻醉。各因素对红细胞计数与血红蛋白水平结果影响的主次顺序为CD=A=B,各因素水平红细胞计数与血红蛋白水平是戊巴比妥钠水合氯醛不麻醉,禁食时间各组间血液学指标无统计学差异。结论禁食对血液学指标无影响,血液学指标存在性别、动静脉差异;对白细胞计数及分类的影响水合氯醛麻醉大于戊巴比妥钠麻醉,而对红细胞计数及血红蛋白水平的影响是戊巴比妥钠麻醉大于水合氯醛麻醉,两种麻醉方式各有优缺点。     

改良大鼠成骨细胞原代培养方法的实验研究

目的获得一种操作简便、细胞数量多而纯的成骨细胞原代培养方法。方法改良I型胶原酶消化获得成骨细胞的方法,并检测成骨细胞形态、碱性磷酸酶染色、矿化结节形成。结果经改良的大鼠成骨细胞原代培养方法获得的细胞数量多,形态正常,且碱性磷酸酶分泌及矿化特性正常。结论改良大鼠成骨细胞原代培养方法是一种操作简便、细胞数量多的成骨细胞原代培养方法。     

兔眼角膜成纤维细胞原代培养

目的:建立眼角膜成纤维细胞体外培养的方法。方法:采用全角膜组织培养法培养兔角膜成纤维细胞。结果:在培养皿中培养1天后细胞开始贴壁,6天有新生细胞分出,形成梭形的成纤维细胞。传代细胞经4-6天可形成密集的成纤维细胞,细胞呈纤维状,呈漩涡形排列,排列整齐,局部细胞相互平行,第4、5代生长情况良好,细胞生长旺盛,细胞呈密集漩涡形排列。结论:眼角膜成纤维细胞全角膜组织培养法是可行的。     

新生大鼠上丘脑组织培养研究

目的探讨新生大鼠上丘脑组织培养方法,并对其在培养过程中的变化进行观察。方法取出生4 d的SD乳鼠上丘脑组织,分别在鼠尾胶原玻片、多聚赖氨酸玻片和B iocoat培养小室上进行组织培养,使用相差显微镜动态观察组织块生长情况。48 h后观察组织块贴壁率,在培养5 d时使用图像分析仪观察细胞迁移情况,测量最大迁移距离。使用乳酸脱氢酶试剂盒,测量组织培养液中乳酸脱氢酶活性的动态变化。常规HE染色形态学观察,并使用透射电镜观察组织块超微结构。结果与传统的培养载体相比,上丘脑组织在B iocoat培养小室上进行培养可以获得较高的组织贴壁率和细胞迁移距离。上丘脑组织在接种后31~5 d,其培养液中乳酸脱氢酶活性保持在较低水平。培养早期上丘脑组织块边缘出现细胞突起,胶质细胞迁移,随着培养时间延长,细胞出现凋亡,组织结构破坏。结论B iocoat培养小室是进行新生大鼠上丘脑组织培养的理想载体,接种3 d后组织生长趋于旺盛,而在2周后多数组织的生长逐渐衰退。     

大鼠糖尿病模型早期病理观察指标的筛选

目的 通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠糖尿病模型,筛选成模早期对糖尿病变化敏感的器官组织及生化指标.方法 60只雄性SD大鼠随机分成5组,分别腹腔一次性注射0、20、30、50和80mg/kg的STZ,注射STZ后第2天开始检测各组大鼠的空腹血糖、随机血糖及体质量,第9天实验结束时,取肾脏、胰腺、眼球、心脏、肝...     

免疫组织化学方法测定TGF-β1在鼠根尖周炎中的表达

目的了解TGF-β1与大鼠急性根尖周炎的关系.方法取16只SD大鼠建立鼠根尖周炎动物模型,制作根尖周组织切片,用免疫组织化学方法测定TGF-β1在根尖周炎中的表达.结果免疫组化研究显示TGF-β1阳性表达细胞分布于根尖周和牙槽骨缺损处,在急性期(1～3周)根尖炎症阶段有高表达,表达细胞多为巨噬细胞、淋巴细胞和成纤维细胞;而在急性期和慢性期(第4周)均未见成骨细胞TGF-β1表达.结论在早期(1～4周)根尖炎症阶段未见成骨细胞TGF-β1表达,推测此物质在该阶段主要起促炎症作用.